论文摘要
本文旨在研究手动解离、免疫磁珠分选加TIC培养液改良原代小胶质细胞的培养方法,获得高活性、高纯度且与在体状态更接近的小鼠海马原代小胶质细胞,以用于小胶质细胞的相关研究。选取2～4周龄SPF级C57BL/6J小鼠,PBS灌注后取海马组织剪碎,使用成年鼠脑组织解离试剂盒手动解离海马组织,获得单细胞悬液,再经去碎片试剂去除髓鞘等组织碎片。在4°C孵育CD11b免疫磁珠15 min后,细胞悬液经免疫磁珠细胞分选（magnetic activated cell sorting, MACS）两次过柱提高小胶质细胞纯度。将分选后细胞离心重悬,种在多聚赖氨酸包被后的24孔培养板中,用完全培养基或TIC培养液（以TGF-β、IL-34和胆固醇为主要营养成分的无血清培养基）培养4 d后进行其他检测。结果显示:（1）使用成年鼠脑组织解离试剂盒手动解离可得到含有（56.03±2.10）%活细胞的单细胞悬液;（2）与免疫抗体包被筛选法（immunopanning）相比,经过MACS两步分选后,可得到更多且纯度高达（86.20±0.68）%的小胶质细胞;（3）使用TIC培养液培养4 d后,可获得分枝状、形态类似静息状态的原代小胶质细胞;（4） q RT-PCR检测显示,与完全培养基培养相比,TIC培养液培养的小胶质细胞在4 d和7 d后TNF-α、IL-1β及CCL2 m RNA表达水平更接近急性分离后的小胶质细胞。上述结果提示,采用手动解离海马组织,经MACS两步分选及TIC培养后,可以获得高纯度、高活性且接近在体静息状态的小胶质细胞。
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文章来源
类型: 期刊论文
作者: 许雅南,周利君,揭英桃,麦春林,张珺,林震嘉,谈智
关键词: 小胶质细胞,海马,磁珠分选,原代培养,细胞因子
来源: 生理学报 2019年06期
年度: 2019
分类: 医药卫生科技,基础科学
专业: 生物学
单位: 中山大学中山医学院生理教研室及中山大学疼痛研究中心
基金: supported by the National Natural Science Foundation of China(No.81771204,81270377,81371198),the Social Development Project of Science and Technology Department of Guangdong,China(No.2015A020212020)
分类号: Q813.11
DOI: 10.13294/j.aps.2019.0061
页码: 883-893
总页数: 11
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