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【摘要】目的：建立高效液相色谱法测定参梅养胃胶囊中芍药苷含量的方法。方法：采用高效液相色谱法，液相色谱柱：戴安十八烷基硅烷键合硅胶（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：0.1%磷酸溶液-乙腈；流速：1.2ml/min；检测波长：230nm。结果：芍药苷线性范围为0.105～0.525μg，回归方程为Y=10.87X-10.34,r=0.9998；方法回收率为97.74%，RSD为1.32%。结论：本方法精密度、准确度、稳定性均符合要求，可用于该制剂中的芍药苷含量测定。
【关键词】高效液相色谱法；参梅养胃胶囊；芍药苷
【中图分类号】R284.1【文献标识码】B【文章编号】2095-1752（2017）09-0292-02
DeterminationinShenmeiYangweicapsulePaeoniflorinbyHPLC
DongYihu.
GuangYuancityInstituteforFoodandDrugControl,SiChuan628000China
【Abstract】ObjectiveToestablishaHPLCmethodfordeterminationinShenmeiYangweicapsulepaeoniflorin.MethodsThedeterminationwascarriedoutonaC18column(250mm×4.6mm,5μm).Themobilephasewas0.1%phosphateandacetonitrileattheflowrateof1.2ml/min.Thedetectionwavelengthwasat230nm.ResultThecontentofpaeoniflorinhadagoodlinearityattherangeof0.105-0.525μg，Y=10.87X-10.34,r=0.9998；Theaveragerecoverywas97.74%andRSDwas1.32%.ConclusionThemethodwhichprovedtobeaccurate,precise,andstableissuitable,canbeusedtodeterminepaeoniflorincontentinthispreparation.
【Keywords】PLC;EnmeiYangweicapsule;Paeoniflorin
参梅养胃胶囊由北沙参、白芍、丹参甘草等11味中药制成的纯中药制剂，功效为养阴和胃、活血止痛[1]。白芍一药在该制剂中，主要有效成分为芍药苷。该制剂标准建立中采用中药制剂常用的高效液相色谱法，建立了测定参梅养胃胶囊中芍药苷的含量测定方法[2]。该方法简便，精密度、准确度、稳定性均符合《中国药典》的要求，可用于参梅养胃胶囊的芍药苷含量测定。
1.仪器与试药
1.1仪器
安捷伦Agilent1260高效液相色谱仪（G1311C泵、G1329B进样器、G1316A柱温箱、G1314FVWD检测器和Chemstation色谱工作站）；超纯水仪；电子分析天平（十万分之一）等。
1.2试药
参梅养胃胶囊（批号：160501A、160502A、160503A）。芍药苷对照品（批号：110736-200933，中国食品药品检定研究院）；乙腈（色谱纯）；磷酸（色谱纯）；实验用水为超纯水（电阻率小于18MΩ*cm）；其余试剂均为分析纯。
2.方法与结果
2.1色谱条件与系统适应性实验
液相色谱柱：戴安十八烷基硅烷键合硅胶（4.6mm×250mm,5μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（22:78）；流速：1.2ml/min；进样量：20μl；检测波长：230nm。在本实验条件下，芍药苷峰与其他成分峰基线分离，分离度值＞2.0；理论塔板数以芍药苷峰计＞3000。
2.2溶液的制备
(1)对照溶液的制备：用电子天平精密称取芍药苷对照品10.05mg，加甲醇少量溶解后，稀释至100ml制成对照品溶液。(2)样品溶液的制备：称取样品装量差异后，研细混匀，精密称取1.007g，加入稀乙醇约40ml，用超声波处理25分钟，冷却后，加稀乙醇稀释至50ml，滤过，取续滤液作为供试品溶液。(3)阴性对照溶液的制备：按参梅养胃胶囊处方量称取其它药材（不含白芍），按照参梅养胃胶囊的工艺规程制成缺白芍的胶囊，作为阴性样品。
2.3专属性检查
取对照品溶液、样品溶液和阴性对照溶液，在色谱条件下进样，得到色谱图。实验结果为芍药苷对照品溶液和参梅养胃胶囊的色谱图中芍药苷色谱峰保留时间约为11.50min；而无白芍的阴性样品对照溶液色谱图在相同保留时间处没有出现色谱峰。说明参梅养胃胶囊中其他成分在本实验条件下对芍药苷测定没有干扰，图谱见图1、2、3。
2.4线性关系考察
精密吸取对照品溶液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，用甲醇分别稀释至10ml，对照品浓度分别为10.05、20.10、30.15、40.20、50.25μg/ml。按“色谱条件，分别量取20μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图。以芍药苷对照品的浓度（ug）为横坐标(X)，芍药苷峰面积积分值为纵坐标（Y）进行线性回归，得回归方程Y=10.87X-10.34,r=0.9998。结果表明，标准曲线通过原点，芍药苷在0.105-0.525μg浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系，采用外标一点法能够进行芍药苷的含量测定。
2.5精密度实验
精密吸对照品溶液10μl，在色谱条件下连续进样5次，5针芍药苷峰面积的相对标准偏差（RSD）为0.57%；取对照品溶液和样品溶液分别于1天，2天，5天后按本实验条件进行重复实验，对照品和供试品芍药苷峰面积的相对标准偏差（RSD）分别为0.82%；0.93%和0.92%。表明日内精密度和日间精密度均符合《中国药典》的规定[3]。
2.6重复性实验
取同一批号（160502A）的参梅养胃胶囊制剂，按照本实验方法重复检验6次。结果供试品中芍药苷的平均含量为4.297mg/g，相对标准偏差（RSD）：0.88%，结果显示方法重复性符合《中国药典》的规定。
2.7加样回收率实验
取已检测芍药苷含量的参梅养胃胶囊（批号：160502A）适量，研细，取约90mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加入0.105mg/ml对照品溶液4ml，挥干，加稀乙醇8ml，超声处理30分钟，取出，放冷，加稀乙醇至刻度，摇匀，取续滤液作为样品溶液，在色谱条件下按本方法进样。结果为参梅养胃胶囊中芍药苷的加样准确度为97.74%，相对标准偏差（RSD）为1.32%，见表1。
2.8耐用性
在色谱条件，芍药苷峰与其他组分峰实现基线分离，分离度值＞2.0，理论塔板数以芍药苷峰计＞3000。在以上条件下，将流动相组成比例作如下变动，测定同一批次同一样品的含量，考察其耐用性。
用以上三组流动相分别测定参梅养胃胶囊（批号：160502A）含量分别为：0.4906%、0.4902%、0.4851%，其RSD=0.63%。说明测定条件小变动不影响测定结果。
3.样品芍药苷含量测定
取3批不同批号参梅养胃胶囊（批号：160501A、160502A、160503A），每批平行测定3份，供试品溶液以60μg/ml的对照品作对照，计算样品中芍药苷的含量，见表2。结果：本品每粒成品按规格（4g/粒），每粒含白芍以芍药苷(C23H28O11)计，均能控制在15mg以上。该制剂芍药苷质量控制，本品每粒含白芍以芍药苷计，不得少于15mg。
4.讨论
本实验了采用回流提取和超声处理方法进行提取，结果表明，超声处理25min也可提取完全，而且超声比回流提取操作更简便快捷。提取溶剂选择：选用50％乙醇和甲醇两种溶剂对芍药苷进行提取，结果表明，用50％乙醇比用甲醇提取更全。
【参考文献】
[1]顾向东.参梅养胃颗粒治疗慢性胃炎50例临床观察[J].中国中医药科技，2012，19(3):286-286.
[2]杨芳.高效液相色谱法测定泻停封胶囊中苦参碱含量[J].中国药业，2011，20(24):52-53.
[3]沈萍，罗海保.高效液相色谱法测定茵赤胶囊中芍药苷的含量[J].中国医药导报，2012，9(24):111-112.