重组毕赤酵母生产β-葡萄糖苷酶发酵条件优化及固定化研究

重组毕赤酵母生产β-葡萄糖苷酶发酵条件优化及固定化研究

论文摘要

为了实现绿色木霉菌Trichoderma viride来源的β-葡萄糖苷酶在重组毕赤酵母中的高效表达,对重组菌P. pastoris KM71/pPIC9K-bgl1/pPICZ A-pdi进行3. 6 L罐发酵培养条件优化。结果表明,当诱导温度28℃,初始诱导菌体浓度50 g/L,诱导阶段甲醇体积分数1. 0%时,酶活力最高,能达到1 452 U/m L。同时以壳聚糖为载体、戊二醛为交联剂,采用吸附交联法对β-葡萄糖苷酶进行固定化。结果表明,当壳聚糖质量浓度0. 03 g/m L,戊二醛质量浓度0. 008 g/m L,游离酶添加量400U/g(1 g壳聚糖微球加酶量为400 U),固定化吸附时间20 h时,固定化酶酶活回收率最高,达到65. 4%。以800 g/L葡萄糖为底物,优化的转化条件下连续转化6次,低聚龙胆糖产率仍达到15. 2%,显示出该固定化酶具有较好的持续利用性及较高的低聚龙胆糖生产能力。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料与试剂
  •     1.1.1 菌株与质粒
  •     1.1.2 实验试剂
  •     1.1.3 仪器与设备
  •     1.1.4 培养基的配制
  •   1.2 实验方法
  •     1.2.1 发酵条件优化
  •     1.2.2 酵母菌体浓度的测定
  •     1.2.3 固定化酶及固定化条件优化
  •     1.2.4 固定化酶操作稳定性分析
  •     1.2.5 β-葡萄糖苷酶酶活力的测定
  •     1.2.6 酶转化产物的测定
  • 2 结果与讨论
  •   2.1 重组毕赤酵母发酵条件优化结果
  •     2.1.1 诱导温度对发酵产酶的影响
  •     2.1.2 初始诱导菌体浓度对发酵产酶的影响
  •     2.1.3 诱导阶段甲醇体积分数对发酵产酶的影响
  •   2.2 β-葡萄糖苷酶固定化条件优化结果
  •     2.2.1 壳聚糖含量对固定化酶的影响
  •     2.2.2 戊二醛含量对固定化酶的影响
  •     2.2.3 游离酶添加量对固定化酶的影响
  •     2.2.4 吸附时间对固定化酶的影响
  •   2.3 固定化酶操作稳定性研究
  • 3 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 汪飞,吴敬,陈晟

    关键词: 葡萄糖苷酶,毕赤酵母,发酵优化,固定化,低聚龙胆糖

    来源: 食品科学技术学报 2019年03期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑

    专业: 一般化学工业

    单位: 江南大学食品科学与技术国家重点实验室/工业生物技术教育部重点实验室/教育部食品安全国际合作联合实验室

    基金: 国家杰出青年基金资助项目(31425020),国家自然科学基金资助项目(31571776),中央高校基本科研业务费专项项目(JUSRP51706A),江苏省重点研发计划(社会发展)项目(BE2015751)

    分类号: TQ925

    页码: 41-47

    总页数: 7

    文件大小: 270K

    下载量: 328

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