导读:本文包含了亚型猪流感病毒论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:H1亚型猪流感病毒,微滴数字RT-PCR,绝对定量,检测方法
亚型猪流感病毒论文文献综述
谭建锡,禹思宇,唐连飞,胡忆文,白雪[1]（2019）在《H1亚型猪流感病毒微滴数字RT-PCR定量检测方法的建立》一文中研究指出本研究针对H1亚型猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)HA基因保守序列设计引物和探针,通过反应条件优化,建立了一种快速、准确检测H1亚型SIV的微滴数字RT-PCR定量方法。该方法特异性强,除H1亚型SIV外,H3、H5、H7亚型SIV以及猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等检测均为阴性;敏感性高,最低可检测4.7拷贝/μL;重复性好,对5个不同稀释度的H1亚型SIV RNA进行3次重复试验,每个稀释度的变异系数均小于5%。利用该方法对湖南省规模化养殖场收集的30份猪鼻拭子样品进行检测,发现与荧光RT-PCR检测结果一致。试验表明,该方法快速、准确、灵敏,可为H1亚型SIV的快速筛查及流行病学研究提供可靠的技术保障。(本文来源于《中国动物检疫》期刊2019年11期）
石建州,李青梅,王彦红,刘肖,李鸽[2]（2019）在《H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体IPMA检测方法的建立》一文中研究指出本试验旨在建立一种针对检测抗H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验(immunoperoxidase monolayer assay,IPMA)筛选方法。通过优化MDCK细胞接毒量、细胞接毒后培养时间、封闭液的种类和工作浓度、工作时间等各个反应条件,并对建立的IPMA筛选方法的特异性、敏感性和重复性进行评价。结果显示,建立的IPMA检测方法的最优反应条件为MDCK细胞接毒10~(2.63) TCID_(50)/100μL H1N1亚型猪流感病毒,37℃培养24 h,含3‰H_2O_2的甲醇室温固定15 min,5%脱脂乳37℃封闭2 h,50μL杂交瘤细胞上清作为一抗,37℃孵育2 h,羊抗鼠HRP-IgG二抗37℃孵育1 h。所建立的IPMA方法能特异性地检测H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体,与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪瘟病毒(CSFV)阳性血清不发生交叉反应;其敏感性检测结果显示,可检测1∶3 200的HI=2~(-9)标准H1N1猪阳性血清;批间和批内重复性试验结果较好。综上所述,本试验成功建立了抗H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体的IPMA检测方法,该方法特异性强、敏感性高、重复性好,为生产鉴定H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体提供了一种简便、实用、有效的检测手段。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2019年09期）
范桂芳,徐守兴,杨斓,宋文博,华琳[3]（2019）在《表达H1N1亚型猪流感病毒HA蛋白的重组伪狂犬病病毒rPRV-optiHA的构建及生物学特性》一文中研究指出为研发针对猪流感病毒流行毒株和猪伪狂犬病病毒变异毒株更为有效的基因工程疫苗,本研究以变异伪狂犬病病毒基因缺失毒株(rPRVΔTKΔgI/gE)为载体,采用同源重组的方法,成功构建了表达经密码子优化的H1N1亚型猪流感病毒HA基因的重组病毒rPRVΔTKΔgI/gE-optiHA。对获得的重组病毒在多种细胞上的增殖特性、一步生长曲线、遗传稳定性以及对小鼠的安全性等生物学特性进行了研究。结果表明,构建的rPRVΔTKΔgI/gE-optiHA重组病毒能够稳定表达HA蛋白,并且经过优化后,目的基因的表达量有明显提高。该重组病毒在ST、PK-15、Vero和BHK-21细胞上的增殖滴度均高于10~(-7.0)/0.1 mL,对PK-15细胞的敏感性最高。一步生长曲线结果表明,重组病毒的增殖特性未受影响。连续传代20代后,该重组病毒依然具有较好的遗传稳定性,并且对小鼠安全性良好。本研究为重组病毒rPRV-optiHA的进一步研究与应用奠定了基础。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2019年07期）
朱和超,范桂芳,朱莉莉,彭忠,华琳[4]（2019）在《猪流感病毒H1N1亚型HA蛋白单克隆抗体的制备与鉴定》一文中研究指出为获得H1N1亚型猪流感病毒(SIV)血凝素(HA)蛋白的单克隆抗体(McAb),选取A/swine/NanChang/H1N1/2009毒株,病毒经增殖、超速离心后,收集病毒粒子作为免疫原,将SIV粒子包被建立了间接ELISA方法。将免疫4次的BALB/c小鼠,经间接ELISA测定小鼠血清效价,将效价高的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(sp2/0)进行融合。采用间接ELISA的方法筛选效价高的阳性细胞孔,采用有限稀释法进行3轮亚克隆,得到了5株杂交瘤细胞株,分别命名为2C6、5G5、1D5、3G3、4F11。随后对5株杂交瘤细胞的亚型进行鉴定,显示2C6、1D5、4F11为IgM亚型,5G5、3G3为IgG1亚型,5株杂交瘤的L链均为k链。间接免疫荧光(IFA)和Western blot检测表明,5G5能够与HA蛋白发生特异性的结合。本研究为进一步建立H1亚型SIV的相关检测方法及对HA蛋白的功能研究奠定基础。(本文来源于《畜牧与兽医》期刊2019年06期）
孙王杨吉,刘源,刘子拓,范佳文,石火英[5]（2019）在《一株H9N2亚型猪流感病毒的遗传进化和致病性分析》一文中研究指出本研究从有流感症状的病猪中分离到一株H9N2亚型猪流感病毒(SIV),命名为A/swine/Jiangsu/1/2015 (SW/JS/1/15)。为探究其遗传特征和生物学特性,本研究采用RT-PCR技术扩增其全部基因节段后测序并进行遗传分析,并研究了其对鸡和豚鼠的致病特性。遗传进化分析显示,分离病毒SW/JS/1/15株是由BJ/94系、DK1系、G1系和F/98系4个分支病毒重组而成,8个基因节段均属于G57基因型。分离株HA蛋白裂解位点为PSRSSR*GL,符合低致病性流感病毒的特征。HA蛋白有9个潜在糖基化位点,其中218位糖基化位点缺失,145位与313位各新增一个糖基化位点。与疫苗株SH/F/98、SD/6/96、GD/SS/94相比,分离病毒HA抗原位点发生了G~(90)E、S~(127)R、S~(145)N、D~(153)G、N~(167)S、A~(168)N、A~(198)T、T~(200)R、N~(201)D、和Q~(235)M (H9 numbering)突变;NA蛋白发生6个氨基酸突变:K~(367)R、K/E~(368)N、D~(369)N、D~(401)E、K~(143)N和T~(434)P。同时NA蛋白颈部缺失aa63～aa65。分离病毒的8个基因节段与2株禽源H9N2病毒的相应基因高度同源,其6个内部基因与两株人源H7N9病毒的内部基因高度同源。致病性试验结果显示分离病毒可以感染鸡和豚鼠,但不能在豚鼠群内水平传播,且可能作为H7N9等新型流感病毒内部基因供体,同时表明猪可以感染禽流感病毒(AIV),且可能是AIV获得感染哺乳动物能力的过渡宿主。本研究为H9N2亚型SIV的致病性以及遗传特征的研究提供科学依据。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2019年05期）
方超[6]（2018）在《H3N2亚型猪流感病毒的分离鉴定及其灭活疫苗免疫效力评价》一文中研究指出猪流行性感冒(Swine influenza,SI)是由A型流感病毒引起的一种急性、热性、高度接触性感染的呼吸道传染病。其临床症状为突然发病、咳嗽、喷嚏、流涕、呼吸困难、发热、衰竭、食欲下降和生长缓慢等。该病发病率高、传染性强,单纯感染时死亡率并不高,但在短时间内可波及全群,对猪的生长性能造成不良的影响;若与其他病原混合感染,会使死亡率增高,给养猪业造成严重的经济损失。目前对于猪流感的防控主要通过免疫接种进行,但我国市场上猪流感疫苗的种类非常少,且交叉保护力不强。本研究通过分离国内流行的H3N2亚型猪流感病毒,针对灭活剂及佐剂进行优化,并制备成灭活疫苗,同时对该灭活疫苗进行免疫效力的评估,以提供一种安全有效的猪流感灭活疫苗,减少本病对养猪业造成的经济损失。本研究从黑龙江省某猪场采集的疑似猪流感发病猪的鼻拭子13份,经过处理后,接种至10~11日龄SPF鸡胚,分离到一株具有血凝性的病毒。通过血清学鉴定、分子生物学鉴定、电镜观察、生物学特性及理化特性等方法对该病毒进行鉴定,结果可见分离株对鸡红细胞的凝集价为1:256,且仅能被H3亚型猪流感阳性血清中和,RT-PCR鉴定结果为H3、N2亚型;电镜下病毒粒子呈球形,直径约为80~120nm,有囊膜,表面有刺突和纤突,对鸡胚的半数感染量(EID_(50))为10~(-6.38)EID_(50)/0.1mL;该病毒对热、氯仿以及乙醚均敏感;从上述对病毒特性的研究,判定分离的病毒为H3N2亚型猪流感病毒。利用10~11日龄SPF鸡胚制备制苗用病毒液,用终浓度为0.2%二乙烯亚胺(BEI)灭活病毒,将其乳化制成油乳剂灭活疫苗,用血清学方法和免疫攻毒方法对该疫苗的免疫效力进行评估,并测定了疫苗的免疫期。结果可见该灭活疫苗的免疫效力良好,与市售猪流感灭活疫苗比较,可见两者免疫期相同,且本疫苗的免疫效力在一定程度上优于市售疫苗。由此可见该毒株可以作为一株优质的制苗用备选毒株,为猪流感疫苗的研制奠定基础。(本文来源于《东北农业大学》期刊2018-12-01）
冀池海,朱婉君,盛金良,韦应芳,曾梦[7]（2019）在《H1与H3亚型猪流感病毒IgG抗体双重荧光微球免疫学检测方法的建立》一文中研究指出有效防治猪流感需要借助于准确而快速的检测方法,为了建立一种高效、快速的多重检测方法,本研究应用H1和H3亚型猪流感病毒(SIV)的血凝素(HA)蛋白抗原偶联不同编码的荧光微球,应用间接法检测模式,建立了H1、H3亚型猪流感病毒IgG抗体荧光微球免疫学检测方法,并将该方法与血凝抑制试验(HI)、病毒中和试验(VN)和酶联免疫吸附试验(ELISA)进行比较分析。结果表明,该方法的抗体检测灵敏度比ELISA方法高100～1 000倍;与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、伪狂犬病病毒及日本乙型脑炎病毒的阳性血清均无交叉反应,且两种亚型血清之间也不存在交叉反应。重复性试验表明,批内和批间精密度测试结果分别为10.2%和12.8%。与HI、VN和ELISA方法比较,总符合率分别为97.82%、98.27%和97.83%。综上,本研究建立的检测方法具有双重检测特性,特异性好、灵敏性高、重复性强,可用于H1、H3亚型SIV的鉴别诊断。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2019年02期）
张慧[8]（2018）在《H1N1亚型猪流感病毒的遗传进化分析》一文中研究指出猪流感(Swine influenza,SI)是由猪流感病毒Swine influenza virus,SIV)引起的一种高度接触性传染的猪呼吸道疾病。临床主要表现为咳嗽、呼吸困难、发热、不同年龄、性别和品种的猪均能感染,是当今规模化猪场普遍存在且难以根治的群发性疾病。由于猪同时具有禽流感病毒和人流感病毒的唾液酸受体,常被认为是产生新型重配病毒的“混合器”。SIV在猪群中以H1N1、H1N2和H3N2为主要流行亚型,因此,开展对H1N1亚型SIV的遗传演化分析具有重要意义。本研究为了解鲁西地区猪群中SIV的流行情况,在最近3年期间,对鲁西地区不同养殖场和生猪屠宰场采集鼻拭子样品共计1500份。样品接种于10日龄非免疫鸡胚进行分离、鉴定,共分离到5株H1N1亚型SIV。通过对分离株进行全基因组测序以及遗传进化分析,发现5株病毒基因呈现两种基因型。其中SW/SD/LC9/17毒株的PB2、PB1、PA和NP基因来源于pdm/09 H1N1病毒,HA、NA和M基因来源于EA H1N1病毒,NS基因来源于CS H1N1病毒。另外4株病毒SW/SD/JN3/16、SW/SD/LC15/17、SW/SD/HZ18/18和SW/SD/HZ22/18的PB2、PB1、PA、NP和M基因来自于pdm/09 H1N1病毒,HA和NA来自于EA H1N1病毒,NS基因来源于CS H1N1病毒。均是源于EA H1N1、pdm/09 H1N1和CS H1N1形成的重排毒株。对5株SIV分离株HA基因氨基酸序列关键位点进行分析后发现,3株病毒其蛋白受体结合位点均发生了G225E(以H3为标准)的变异,表明都可以与Saα-2,6-Gal受体结合,其在HA裂解位点上都只存在1个R残基,属于低致病性毒株的氨基酸特征。(本文来源于《山东农业大学》期刊2018-09-27）
梁文花,贾云慧,许程志,吴运谱,陈艳[9]（2018）在《两株H1N1亚型猪流感病毒HA蛋白中和性单克隆抗体的制备及抗病毒活性研究》一文中研究指出为了制备抗欧亚类禽型(Eurasian avian-like,EA)H1N1猪流感病毒(SIV)血凝素(HA)蛋白的单克隆抗体(MAb)并对其生物学活性进行检测,利用SIV A/swine/Henan/11/2005(HN11)增殖、纯化的全病毒蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,采用间接ELISA和HI检测方法进行筛选。结果获得了两株能稳定分泌抗HA蛋白MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为2B6和4C7;两株MAbs的腹水ELISA和HI效价均分别高于1∶107和5log2;两株MAbs能够在IFA试验中与病毒HA蛋白发生反应,而在Western blot试验中不能检测到病毒HA蛋白;病毒中和试验结果显示这两株MAbs对EA H1N1SIV具有病毒中和活性;MAbs的抗病毒活性又进一步通过小鼠的感染试验进行了评估,结果表明接种了MAbs的小鼠获得了有效抵抗同源及异源H1N1SIV感染的保护效果。研究证实制备的两株MAbs具有较高的病毒中和活性和较强的抗病毒感染能力,可以将其进一步应用于抗EA H1N1SIV的感染及开展病毒抗原性变异的分子基础研究。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2018年07期）
兰德松,魏澍,侯振中[10]（2018）在《H1N1亚型猪流感病毒3种谱系叁重RT-PCR检测方法的建立与应用》一文中研究指出以H1N1亚型猪流感病毒(SIV)3种主要谱系2009甲型H1N1(pdm/09 H1N1)、古典型H1N1(CS H1N1)和类禽型H1N1(a H1N1)的血凝素(Hemagglution,HA)基因为靶基因,设计3对特异性引物,建立一种可以同时检测一个反应体系中H1N1亚型3种主要谱系SIV的叁重RT-PCR方法,并将其应用于临床样品的检测,旨在为开展猪群中流行的H1N1亚型SIV感染及流行情况的调查研究提供有力技术支撑。结果显示,该方法可对pdm/09 H1N1、CS H1N1和a H1N1这3个不同谱系SIV特异性检出,扩增片段大小分别为476 bp、293 bp和997 bp,而与其他病毒无交叉反应;最低检测限分别为1 460拷贝/μL、1 700拷贝/μL和1 950拷贝/μL;应用到3 110份临床样品检测中,检测出10株pdm/09 H1N1和21株a H1N1 SIV,未检测到CS H1N1 SIV,与鸡胚分离病毒符合率达100%。综上,该方法敏感性和特异性良好,能快速、有效实现对临床样品中H1N1亚型3种谱系的检测。(本文来源于《河南农业科学》期刊2018年06期）
亚型猪流感病毒论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本试验旨在建立一种针对检测抗H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验(immunoperoxidase monolayer assay,IPMA)筛选方法。通过优化MDCK细胞接毒量、细胞接毒后培养时间、封闭液的种类和工作浓度、工作时间等各个反应条件,并对建立的IPMA筛选方法的特异性、敏感性和重复性进行评价。结果显示,建立的IPMA检测方法的最优反应条件为MDCK细胞接毒10~(2.63) TCID_(50)/100μL H1N1亚型猪流感病毒,37℃培养24 h,含3‰H_2O_2的甲醇室温固定15 min,5%脱脂乳37℃封闭2 h,50μL杂交瘤细胞上清作为一抗,37℃孵育2 h,羊抗鼠HRP-IgG二抗37℃孵育1 h。所建立的IPMA方法能特异性地检测H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体,与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪瘟病毒(CSFV)阳性血清不发生交叉反应;其敏感性检测结果显示,可检测1∶3 200的HI=2~(-9)标准H1N1猪阳性血清;批间和批内重复性试验结果较好。综上所述,本试验成功建立了抗H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体的IPMA检测方法,该方法特异性强、敏感性高、重复性好,为生产鉴定H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体提供了一种简便、实用、有效的检测手段。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
亚型猪流感病毒论文参考文献
[1].谭建锡,禹思宇,唐连飞,胡忆文,白雪.H1亚型猪流感病毒微滴数字RT-PCR定量检测方法的建立[J].中国动物检疫.2019
[2].石建州,李青梅,王彦红,刘肖,李鸽.H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体IPMA检测方法的建立[J].中国畜牧兽医.2019
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[9].梁文花,贾云慧,许程志,吴运谱,陈艳.两株H1N1亚型猪流感病毒HA蛋白中和性单克隆抗体的制备及抗病毒活性研究[J].畜牧兽医学报.2018
[10].兰德松,魏澍,侯振中.H1N1亚型猪流感病毒3种谱系叁重RT-PCR检测方法的建立与应用[J].河南农业科学.2018
标签：H1亚型猪流感病毒; 微滴数字RT-PCR; 绝对定量; 检测方法;