导读:本文包含了细胞凋亡诱导剂论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:诱导剂,凋亡,细胞,肿瘤,蛋白,细胞系,药物。
细胞凋亡诱导剂论文文献综述
张爽[1]（2018）在《细胞凋亡诱导剂对羊肉成熟过程Caspase-3激活通路的机制研究》一文中研究指出嫩度是决定肉食用品质的重要因素和最重要的感官特征之一,研究肉嫩度的影响因素及其嫩化机制,有助于肉制品生产商向市场供给嫩度优良的肉,以更好满足消费者的需求。肉的嫩度在宰后的成熟过程中会得到很大改善。在现代肉品工业中,屠宰后的动物在很短时间内血液大量流失,重要功能及氧气摄入停止。在这种情况下,动物体的肌细胞不可避免会处于缺氧缺血状态,引起肌细胞发生“细胞凋亡”,细胞凋亡与其关键效应酶Caspase-3在肉成熟嫩化中的重要作用已被证实,在宰后肉的成熟过程中,细胞凋亡效应酶Caspase-3被激活并且引起肌原纤维降解,是参与宰后肉质嫩化的一个关键蛋白酶,但是Caspase-3在肉成熟中的激活机制及调控因子还不清楚。针对这一改善肉品嫩度的关键问题,本研究以陕西特色的关中奶山羊肉为研究对象,以其被屠宰后肌细胞的缺氧缺血环境与细胞凋亡为研究背景,用凋亡诱导剂氯化钙和茶多酚处理羊肉后,以Western Blot为主要研究方法,结合有关物理化学技术探究在羊肉正常成熟过程中试剂处理对奶山羊肉嫩度、奶山羊骨骼肌细胞的凋亡情况的影响,并进一步研究细胞凋亡关键效应酶Caspase-3激活的分子机制。具体研究内容和结果如下:(1)探究细胞凋亡诱导剂处理对骨骼肌细胞凋亡的影响:利用氯化钙、茶多酚处理宰后羊肉的背最长肌,以生理盐水孵育处理作为对照,分别取0、1、3、5 d(4℃)的肉样提取胞浆蛋白,Western Blot法检测细胞凋亡关键效应酶Caspase-3及其底物Parp-1的表达。结果显示处理组的Caspase-3蛋白酶及其切割底物Parp-1的酶原片段条带较对照组显着减弱(P<0.05),即活性显着增加,表明这两种试剂均可以有效诱导奶山羊骨骼肌细胞的凋亡;(2)探究细胞凋亡诱导剂处理对宰后羊肉嫩度的影响:利用氯化钙、茶多酚处理宰后羊肉的背最长肌,以生理盐水孵育处理作为对照,分别取0、1、3、5 d(4℃)的肉样提取蛋白,分光光度法检测肌原纤维小片化指数(MFI)的变化;提取肌原纤维蛋白,Western Blot法检测肌间线蛋白Desmin的表达。结果显示处理组中羊肉的肌原纤维小片化指数(MFI)值较对照组有了显着增加(P<0.05),且骨骼肌肌间线蛋白(Desmin)的降解程度也显着提高,表明这两种试剂孵育处理可以加速宰后羊肉的成熟过程并有效改善其嫩度;(3)探究细胞凋亡诱导剂处理对奶山羊骨骼肌细胞Caspase-3两条激活通路的影响:利用氯化钙、茶多酚处理宰后羊肉的背最长肌,以生理盐水孵育处理作为对照,分别取0、1、3、5 d(4℃)的肉样提取胞浆蛋白,Western Blot法检测Caspase-3的死亡受体激活通路中Fas、Fas-L、Caspase-8及线粒体激活通路中Bax、Bcl-2、Caspase-9及细胞色素C这些关键调控因子的变化。结果表明,Fas、Fas-L、Bax/Bcl-2及胞浆内细胞色素C这些蛋白因子在处理组中的表达均显着高于对照组(P<0.05),而Caspase-8和Caspase-9酶原的表达量则显着低于对照组。这表明了在羊肉宰后成熟过程中Caspase-3的激活是由Caspase-8介导的死亡受体途径和细胞色素C、Caspase-9介导的线粒体途径这两条通路共同参与的。因此可以调节和控制上述Caspase-3激活的关键因子以最终控制Caspase-3效应酶对肉嫩化和肉成熟的作用。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2018-05-01）
张静晓,李燕,付新梅,潘艳秋,杨凌[2]（2015）在《一类细胞凋亡诱导剂的结构特征研究》一文中研究指出许多抗癌药物通过引起癌细胞的凋亡来达到治疗目的,因此开发能诱导癌细胞凋亡的药物一直是癌症研究的热点.以153个结构各异的具有caspase-3激活作用的细胞凋亡诱导剂为研究对象,通过叁维定量构效关系(3D-QSAR)分析,得到了一个基于位阻场、静电场、疏水场、氢键供体场和受体场参数的最优比较分子相似性指数法(CoMSIA)模型.该模型(Q2=0.51、R2ncv=0.89和R2pred=0.82)具有良好的内部一致性和预测能力,通过对模型的等值线图分析发现:(1)R2取代基提高诱导剂活性的因素包括位阻大、负电性大、有亲水性和具有氢键供体作用;(2)位阻适中和/或具有氢键供体作用的R4取代基,以及位阻小和/或亲水的R1取代基对提高分子的活性是有利的;(3)N-甲基-N-苯基-1-萘胺类细胞凋亡诱导剂具有正电性的A环3号位或C环7号位取代基,以及具有负电性的B环1号位取代基有利于提高诱导剂的生物活性.对该模型的分析更有利于认识细胞凋亡诱导剂的分子特征,并为设计和开发新型细胞凋亡诱导剂提供理论指导.(本文来源于《大连理工大学学报》期刊2015年01期）
阿茹娜[3]（2014）在《希夫碱派生铜Ⅱ复合体通过激活内源性途径成为结肠癌细胞潜在的细胞凋亡诱导剂》一文中研究指出金属基药物被广泛应用于癌症化疗且具有良好前景。在过去的几十年中,希夫碱及衍生物因其广泛的生物潜能而被广泛知晓。在现在的研究中,Hajrezaie M等评估了铜Ⅱ复合物对结肠癌细胞的抗恶性细胞增殖效果,结果提示,在接受了2.87μg/m L铜Ⅱ复合物治疗72 h后,对HT-29结肠癌细胞具有抗恶性细胞增殖的作用。接受过铜Ⅱ复合物治疗的HT-29细胞经历了细胞凋亡。对染色细胞进行荧光强度检查后发现,6.25μg/m L的铜Ⅱ复合物会显着提高活性氧产物,但会伴随线粒(本文来源于《中国普外基础与临床杂志》期刊2014年11期）
陈典华[4]（2014）在《一种新的基于FRET技术和流式细胞分析的细胞凋亡诱导剂药物筛选系统》一文中研究指出从自然界或人工合成的分子库中筛选细胞凋亡抗肿瘤候选药物迄今仍然一个步骤繁杂的实验,而且实验对设备仪器要求较高。本论文研究将流式细胞仪的荧光信号检测功能和蛋白酶类荧光共振能量转移技术(FRET)相结合、设计了较方便用以细胞凋亡抗肿瘤药物高通量筛选的FRET荧光探针。其主要原理是：通过测定荧光蛋白之间的FRET现象来检测在药物作用下、肿瘤细胞内中分别位于两种细胞凋亡途径中的关键酶casp-8和casp-2的活性,以期用以确定所筛选的化合物是否能够通过激活这两种酶而引发肿瘤细胞的凋亡。将基于荧光显微镜技术的FRET方法与成熟的流式细胞术相结合,能够实现本论文中筛选技术的快速、准确和高通量应用。本论文研究利用我们所搭建的流式细胞分析系统和作用机制的已知细胞凋亡诱导药物,对本文设计的叁色FRET探针EBFP2-C8-EGFP-C2-TagRFP进行了测定和验证,实验结果证明了本文设计和构建的探针能够分别、独立地检测细胞内casp-8、casp-2的活性,同时将casp-8、 casp-2的活性表现为FRET效率的变化。论文通过caspase抑制剂,对所设计检测探针酶活性测定的有效性以及其与FRET效率的关联性进行了验证。本论文工作为新的基于流式细胞仪分析平台、用于细胞凋亡抗肿瘤药物筛选的FRET荧光探针奠定了理论与实验基础。(本文来源于《南京大学》期刊2014-05-01）
陈胡林,杨慧兰,范秀针,朱英杰,赵敏玲[5]（2013）在《线粒体DNA缺失细胞系对凋亡诱导剂敏感性的研究进展》一文中研究指出线粒体DNA(mtDNA)缺失细胞系及其转线粒体细胞系在一些线粒体相关疾病的研究中得到广泛的应用。凋亡是疾病发生发展过程中的重要环节,目前关于mtDNA缺失细胞对凋亡敏感性的研究结果存在较大争议。本文就mtDNA缺失细胞系对各种凋亡诱导剂刺激的敏感性研究进展进行综述。1 mtDNA缺失细胞系及其转线粒体细胞系的概况Rho细胞是指mtDNA含量低于5%,线粒体功能缺陷,必须依靠糖酵解才能生存的细胞系。第1个mtDNA缺乏细胞系(Rho 206细胞系)是20世纪80年代末期KING等[1]通(本文来源于《广东医学》期刊2013年18期）
刘宁[6]（2012）在《与膜联蛋白A7相互作用蛋白以及细胞自噬和凋亡诱导剂的筛选、鉴定及其作用机制研究》一文中研究指出研究背景和目的自噬是细胞内组分包括蛋白质、脂质、糖类、核苷酸、细胞器及入侵的病原体被运送到溶酶体降解的过程。降解产物可以被细胞重新用于营养循环或细胞器更新,因此自噬对于维持细胞内稳态和能量代谢平衡非常重要。自噬可被多种因素诱导,例如营养或生长因子缺乏、低氧、活性氧、DNA损伤、受损细胞器及病原体入侵等,此时,自噬主要起保护性的作用使机体适应环境变化。自噬失调会导致重大疾病发生,包括心血管疾病、神经退行性病变、肿瘤、动脉粥样硬化和老化等。因此,研究自噬的分子机制具有极为重要的病理、生理学意义。血管内皮细胞是覆盖于血管内膜表面的单层细胞,在保护内膜完整性及维持血液流动和稳态方面起着关键的作用。内皮功能的失调会引发多种疾病如高血压、动脉硬化、高血糖症等。自噬和血管内皮功能的失调都会导致疾病。因此,近年来自噬的功能以及自噬对正常内皮细胞功能的调节成为研究热点。在前期研究中,我们发现化学小分子ABO可以诱导正常培养条件下血管内皮细胞自噬,并可以抑制去血清去生长因子诱导的内皮细胞凋亡。进一步研究发现膜联蛋白A7(ANXA7, Annexin A7, synexin)通过对钙离子的调控在ABO诱导的内皮细胞自噬中发挥关键的作用。ANXA7是钙离子依赖的磷脂结合蛋白-Annexins家族成员之一,具有形成钙离子通道及调节胞内钙离子稳态的功能。并且我们的前期数据表明ANXA7介导的细胞自噬信号通路与经典的mTOR、ROS介导的信号通路不同,表明ANXA7介导着新的细胞自噬信号通路,但是其下游因子尚未知。ANXA7在诱导血管内皮细胞自噬中发挥重要的作用,然而其调节内皮细胞的自噬机理尚不清楚。为此,本研究利用酵母双杂交系统筛选和鉴定了与ANXA7相互作用的蛋白,并研究其相互作用与调节血管内皮细胞自噬之间的关系,这为阐明血管内皮细胞自噬的分子机制提供实验证据。具有调节细胞或蛋白功能及生物学过程的化学小分子是研究细胞信号通路和疾病机理的良好工具,同时可为开发治疗相关疾病的药物奠定基础。另外,细胞自噬和凋亡之间关联密切,但是其关联机制仍未知。因此,本研究第二部分内容为筛选和鉴定能够调节肺癌细胞自噬与凋亡的化学小分子,目的是为深入研究肺癌细胞自噬和凋亡及其关联的复杂机理提供新的工具和切入点,同时为开发新的治疗肺癌的药物提供新先导化合物。研究内容1.利用酵母双杂交系统筛选并鉴定与ANXA7相互作用的蛋白(1)构建诱饵蛋白表达载体NpGBKT7-ANXA7(2)检测诱饵蛋白对酵母细胞AH109的毒性及自激活效应(3)筛选人肝脏cDNA文库(4)生物信息学分析阳性文库质粒,并在血管内皮细胞内验证候选蛋白与ANXA7的相互作用2.筛选出与ANXA7相互作用的粒钙蛋白,并研究其在化学小分子ABO诱导血管内皮细胞自噬中的调控作用。(1)ABO对粒钙蛋白和ANXA7相互作用的影响(2)ABO对粒钙蛋白在血管内皮细胞分布的影响(3)抑制粒钙蛋白的表达对ABO诱导的血管内皮细胞自噬的影响(4)粒钙蛋白和ANXA7的相互作用对血管内皮细胞钙离子的影响3.利用肺癌细胞筛选能够诱导细胞自噬与凋亡的化学小分子,为研究自噬或凋亡的细胞信号通路提供工具,为开发相关治疗疾病的药物奠定基础。(1)小分子化合物对P53野生型A549细胞生长及作用机制研究(2)小分子化合物对P53突变型H322细胞生长及作用机制研究(3)小分子化合物对P53缺失型H1299细胞生长及作用机制研究(4)小分子化合物对正常胚肺细胞生长作用的影响研究方法Ⅰ.利用酵母双杂交系统筛选鉴定与ANXA7相互作用的蛋白并研究其在血管内皮细胞自噬中的作用1.诱饵表达载体NpGBKT7-ANXA7构建：以pCMV6-XL5-ANXA7质粒为扩增ANXA7基因序列的模板,使用引物/ANXA7-F/R引入特异性的酶切位点。PCR产物双酶切后连接入酵母表达载体NpGBKT7中。2.检测诱饵蛋白对酵母细胞的毒性和自激活效应：根据Clontech公司操作手册,将诱饵质粒NpGBKT7-ANXA7和空载体NpGBKT7分别转入酵母感受态细胞AH109,根据转化两种质粒的酵母在固体SD/-Trp缺陷培养基的生长表型,以及在液体SD/-Trp缺陷培养基中的菌体密度判断诱饵蛋白对酵母细胞的毒性。将NpGBKT7-ANXA7和pGADT7快速共转入酵母AH109,通过酵母在不同3-AT浓度的SD/-Trp/-Leu/-His平板上的长势判断诱饵蛋白有无自激活效应。3.筛选cDNA文库：根据操作手册将人肝脏cDNA文库转化携带诱饵质粒的酵母感受态细胞,取100μl梯度稀释的细胞悬液,分别涂布于φ9cm SD/-Trp/-Leu板上计算转化效率,剩余酵母菌液涂在含2.5mM3-AT的SD-Trp/-Leu/-His φ15cm平皿内初步筛选阳性克隆。4.Cos7细胞培养与转染:Cos7细胞培养于含10%胎牛血清、100Units/ml青霉素和100mg/ml链霉素DMEM培养基中。细胞转染按照Invitrogen公司转染试剂LipofectamineTM2000的使用手册操作。5.候选蛋白与ANXA7相互作用的鉴定：免疫共沉淀和免疫荧光共定位方法检测。6.血管内皮细胞的分离与培养：参考Jaffe等的方法(Jaffe et al.,1973)。7.细胞内蛋白表达水平及分布检测：免疫细胞化学染色法结合激光扫描共聚焦显微镜检测粒钙蛋白的分布。Western blot方法检测粒钙蛋白表达水平。8.利用RNA干扰技术降低HUVEC粒钙蛋白表达水平：HUVEC细胞长至80-90%时,利用QIAGEN公司的转染试剂将scramble RNA和靶向粒钙蛋白的siRNA转入细胞,western blot方法检测干扰效果。9.细胞内游离钙离子浓度检测：利用高度特异性钙离子荧光探针Fluo-3AM结合激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内Ca2+水平变化。Ⅱ.肺腺癌细胞生长抑制、自噬和凋亡诱导剂的筛选及其作用机制研究1.倒置相差显微镜观察细胞形态2.SRB方法检测细胞存活率3.LDH(乳酸脱氢酶)法检测细胞是否坏死4.吖啶橙(AO)染色以及Western blot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和p62的蛋白水平检测细胞是否发生自噬5. Hoechst染色检测细胞是否发生凋亡研究结果Ⅰ.利用酵母双杂交系统筛选和鉴定与ANXA7相互作用的蛋白并研究其在血管内皮细胞自噬中的作用1.利用酵母双杂交系统筛选到四种与ANXA7相互作用的蛋白,分别为：粒钙蛋白、T细胞抗原毒性颗粒相关RNA结合蛋白、补体因子H及纤维蛋白原p链相互作用。1.1诱饵表达载体构建：ANXA7的开放阅读框由1467个核苷酸序列组成,重组载体NpGBKT7-ANXA7经菌落PCR(图Ⅰ-1-2)和限制性内切酶Sal Ⅰ和NotⅠ双酶切(图Ⅰ-1-3)均能在1500bp处检测到条带,说明目的基因已连入载体中。测序结果没有碱基突变,进一步表明载体构建正确。1.2诱饵蛋白毒性和自激活检测：携带诱饵质粒NpGBKT7-ANXA7和空载体NpGBKT7质粒的AH109在固体SD/-Trp缺陷培养基的均生长良好,长出的单克隆克隆数目和大小大致相近(图Ⅰ-1-5)；在液体SD/-Trp缺陷培养基中过夜培养后,600nm的吸光度分别为1.51和1.54,表明诱饵蛋白对酵母细胞没有毒性,不影响酵母的正常生长。自激活检测确定了筛选文库的最低3-AT浓度为2.5mM(图Ⅰ-1-6)。1.3cDNA文库筛选：将人肝朋cDNA文库转入携带诱饵质粒NpGBKT7-ANXA7的酵母中共产生1.72×106个转化子(图Ⅰ-2-1),经第一轮筛选长出2000多个克隆(图Ⅰ-2-2)。选取直径>2mm得200个克隆分别利用HIS, ADE和LacZ叁个报告基因进行选择(图Ⅰ-2-3,Ⅰ-2-4,Ⅰ-2-5)。根据叁轮筛选结果选取62个阳性克隆的文库质粒扩增后进行Xho I和]EcoR I双酶切验证,酶切片段长于500bp的质粒送交公司测序。1.4生物信息学分析：测序结果利用NCBI在线工具分析,去除公认的假阳性克隆和重复克隆,共得到编码四种蛋白的基因序列,分别是：粒钙蛋白、T细胞抗原毒性颗粒相关RNA结合蛋白、纤维蛋白原β链和补体因子H(表一)。2. ANXA7在细胞内与粒钙蛋白、T细胞抗原毒性颗粒相关RNA结合蛋白和纤维蛋白原p链发生相互作用2.1分别构建携带GFP和Myc标签的pEGFP-ANAX7, pEGFP-GCA, pEGFP-TIA-1, pEGFP-FGB和pEGFP-CFH(图Ⅰ-3-1)和pMyc-ANAX7, pMyc-GCA. pMyc-TIA-1, pMyc-FGB和pMyc-CFH(图Ⅰ-3-2)经双酶切验证及测序证实载体构建成功。将10种重组质粒分别转染Cos7细胞,激光扫描共聚焦显微镜观察(图Ⅰ-3-3)和、western blot检测结果显示融合蛋白的表达(图Ⅰ-3-4,Ⅰ-3-5)2.2将pEGFP-ANAX7与pMyc-GCA, pMyc-TIA-1, pMyc-CFH, pMyc-FGB共同转染Cos7细胞,pMyc-C2作为空白对照。48h后裂解细胞,细胞裂解液以anti-Myc小鼠单克隆抗体进行免疫沉淀实验,western blot结果发现带有Myc标签的四种文库质粒编码蛋白均能将A7沉淀下来,而空白对照不能,说明四种蛋白和ANXA7存在相互作用(图Ⅰ-3-6)。反向免疫共沉淀再次验证ANXA7和TIA-1与FGB具有相互作用(图Ⅰ-3-7)。2.3利用GCA, TIA-1, CFH, FGB的抗体在血管内皮细胞内进行免疫共沉淀实验,结果发现与GCA、TIA-1和FGB抗体孵育的细胞裂解液内能检测到ANXA7,而CFH抗体则不能,说明在血管内皮细胞内ANXA7可以和GCA,TIA-1, FGB发生相互作用,不能和CFH发生相作用(图Ⅰ-3-8)。3.GCA在ABO诱导的血管内皮自噬中发挥关键作用3.1ABO增强血管内皮细胞ANXA7和GCA的相互作用：分别用50μM R-ABO和S-ABO处理血管内皮细胞6h、12h和24h,取等蛋白量的细胞裂解液以GCA抗体进行免疫沉淀实验, western blot检测结果发现R-ABO和S-ABO处理细胞12h和24h后,ANXA7的蛋白量显着增多,说明ANXA7和GCA的相互作用均显着增强(图Ⅰ-4-2A,B)。同样在未经化合物处理的细胞提取液内分别加入R-ABO, S-ABO和ABO(混合型),随后与GCA抗体4℃孵育过夜,western blot检测ANXA7,结果再次表明R-ABO, S-ABO和ABO可以增强ANXA7和GCA的相互作用(图Ⅰ-4-2C,D)。3.2ABO调节血管内皮细胞粒钙蛋白的分布：以50μM ABO, R-ABO和S-ABO处理血管内皮细胞24h,免疫细胞化学染色的方法检测粒钙蛋白的分布,结果发现ABO处理的血管内皮细胞中GCA的分布出现点状簇集现象(图Ⅰ-4-3)。3.3RNA干扰下调粒钙蛋白的表达水平：以20nM和40nM特异阻断粒钙蛋白表达的siRNA处理细胞24h和48h,利用western blot方法检测干扰效果。结果表明20nM和40nM粒钙蛋白的siRNA,24h和48h时均能有效抑制粒钙蛋白的表达,其中40nM效果较为显着(图Ⅰ-4-4)。3.4粒钙蛋白参与ABO诱导的血管内皮细胞自噬：以40nM粒钙蛋白siRNA和scrambled RNA处理细胞24h后,再利用ABO继续处理24h。免疫荧光染色结果显示与对照组相比LC3-Ⅱ的点状分布显着减少(图1-4-5A, B). Westem blot检测结果显示LC3-Ⅱ蛋白积累显着减少(图Ⅰ-4-5C.D)。说明在ABO诱导的血管内皮细胞自噬中粒钙蛋白发挥关键作用。3.5干扰GCA不影响ANXA7的蛋白表达：以40nM粒钙蛋白siRNA和scrambledRNA处理细胞24h后,再利用ABO继续处理24h。Western blot检测结果显示未用ABO处理组ANXA7没有显着变化,而处理组ANXA7蛋白水平显着上升(与前期已发表数据一致),说明GCA不影响ANXA7的蛋白表达(图Ⅰ-4-6)。3.6利用RNA干扰技术抑制粒钙蛋白表达引起细胞内游离Ca2+浓度上升：利用siGCA下调粒钙蛋白的表达,加入钙离子荧光探针检测,结果显示游离Ca2+浓度显着上升。说明粒钙蛋白参与了对细胞内游离Ca2+的调控(图Ⅰ-4-7)。Ⅱ.肺腺癌细胞生长抑制、自噬和凋亡诱导剂的筛选及其作用机制研究1.12种吡唑酰胺衍生物(3a-31)对A549细胞生物活性的影响1.13a-31(结构式图Ⅱ-1)不影响A549细胞的形态：分别用8μM、16μM、32μM和64μM的处理A549细胞24h和48h,与对照组相比,化合处理组的细胞形态物无显着变化,3e-3h在高浓度处理48h细胞数量有明显减少,其它8种化合物无论细胞数量还是细胞形态都未发现明显变化(图II-2A,II-2B)。1.23e-3h抑制A549细胞增殖：SRB检测结果表明3e-3h能不同程度的抑制A549细胞的生长,其中32μM和64gM有较好的抑制效果,抑制率在20%-50%(图Ⅱ-3)。1.33e-3h引起细胞中酸性膜泡增多：用32μM和64μM的3e-3h处理A549细胞24h和48h,吖啶橙染色结果显示与对照组相比,32μM和64μM的3e-3h能够使细胞内的酸性膜泡明显增多,其中64μM处理48h效果更显着(图Ⅱ-4)。说明上述化合物可能诱导了A549细胞自噬。为进一步证实是否发生自噬,我们检测了利用western blot方法检测了自噬的标志性蛋白LC3-Ⅱ的积累和p62的降解,结果显示与对照组相比LC3-Ⅱ和p62蛋白水平并无显着性变化,说明四种化合物不是通过诱导自噬抑制A549细胞增殖(图Ⅱ-5)。1.43e-3h不引起细胞坏死：用64μM的3e-3h处理A549细胞48h,测定上清中乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase, LDH)的活性,结果显示与对照组相比,处理组LDH活性无显着上升,表明3e-3h不引起A549细胞坏死(图Ⅱ-6)。1.53e-3h不诱导细胞凋亡：Hoechst染色显示化合物的处理细胞核均末出现凝集破碎或趋边等凋亡特征,说明3e-3h不引起A549细胞凋亡(图Ⅱ-7)。1.63e-3h阻滞细胞周期：流式细胞术检测3e-3h对A549细胞细胞周期分布的影响,结果显示四中化合物均能够有效的将A549细胞周期阻滞在G1期(图Ⅱ-8)。2.3e-3h对H322和H1299细胞生物活性的影响2.1利用16μM、32μM和64μM的3e-3h处理H322细胞和H1299细胞24h和48h,形态学观察发现两种细胞均表现出体积缩小,细胞膜边缘凸起等凋亡特征(图Ⅱ-9A,B；Ⅱ-10A,B)2.2SRB检测结果显示32μM和64gM的3e-3h处理的细胞存活率明显下降(图Ⅰ-9C,Ⅰ-10C)2.3Hoechst33258染色结果显示,与对照组相比,化合物处理的细胞核明显表现出收缩、凝集且被染为亮蓝色等凋亡细胞的特征,说明细胞确实发生了凋亡(图Ⅰ-9D,E；Ⅰ-10D,E)。3.3e-3h对正常胚肺细胞的影响我们进一步研究了上述四种化合物对人正常胚肺细胞的影响,以32μM和64gM处理细胞48h, SRB检测结果表明细胞的生长基本不受影响,只有3e和3f在32μM有稍许促进增殖的作用(图Ⅱ-11)。结论Ⅰ.本研究利用酵母双杂交系统筛选到四种和ANXA7相互作用的蛋白,这四种蛋白与ANXA7的关系尚未有报道。1.成功构建了酵母双杂交诱饵载体NpGBKT7-ANXA7,并经测序证实正确,为筛库创造了条件。2.将重组诱饵质粒NpGBKT7-ANXA7转化酵母菌株AH109,检测表达的融合蛋白对宿主菌无毒性和自激活作用,可进一步用于筛选cDNA文库。3.通过筛选成人肝脏cDNA文库,经四轮筛选逐步排除假阳性克隆,得到了62个阳性克隆,并经测序及生物信息学分析后确定4个候选蛋白：粒钙蛋白,T细胞抗原毒性颗粒相关RNA结合蛋白,纤维蛋白原β链和补体因子H。4.免疫共沉淀实验证实粒钙蛋白,T细胞抗原毒性颗粒相关RNA结合蛋白和纤维蛋白原β链与ANXA7在血管内皮细胞内发生相互作用。5.粒钙蛋白是EF手家族的钙离子结合蛋白,其生物学功能尚不清楚。本研究首次发现粒钙蛋白是ABO诱导的血管内皮细胞自噬的关键蛋白。ABO能增强粒钙蛋白和ANXA7的相互作用,抑制粒钙蛋白的表达ABO不能诱导血管内皮细胞自噬,并且细胞内游离钙离子浓度显着增加。Ⅱ.本部分我们筛选了12种吡唑酰胺化合物,有四种即3e-3h在高浓度时可以抑制A549细胞、H322和H1299细胞增殖。它们发挥作用是通过阻滞A549细胞细胞周期,诱导H322和H1299细胞凋亡。(本文来源于《山东大学》期刊2012-11-24）
[7]（2009）在《新型癌症治疗药物——细胞凋亡诱导剂Elesclomol》一文中研究指出近期研究显示,在缺氧状态下,例如在肿瘤细胞中,线粒体会产生大量活性氧簇(ROS),当ROS累积到一定量时会引发细胞凋亡。因此,那些能促进ROS产生的药物可能具有潜在抗癌作用。体外研究表明,小分子化合物elesclomol(STA-4783)可通过一系列效(本文来源于《药学进展》期刊2009年05期）
张劲松,唐庆九,ZIMMERMAN-KORDMANN,Martin,REUTTER,Werner,樊华[8]（2006）在《灵芝中肿瘤细胞凋亡诱导剂的研究》一文中研究指出灵芝水提物(LZ)对8种肿瘤细胞增殖的抑制作用具有剂量依赖关系。通过透析和离子交换凝胶过滤层析方法从LZ中分离出活性组分LZ-DN-2-2和LZ-DW-2-a-3。LZ、LZ-DN-2-2和LZ-DW-2-a-3可剂量依赖地诱导SW620细胞凋亡,使细胞增殖周期停滞于G0期。(本文来源于《食用菌学报》期刊2006年02期）
金霞,郭勇[9]（2006）在《中药细胞凋亡诱导剂逆转肿瘤多药耐药的研究进展》一文中研究指出细胞周期限制点调控及凋亡的关键性通路改变是多药耐药的主要耐药机制之一,文章综述了近几年中药领域内细胞凋亡诱导剂的研究进展。(本文来源于《中国现代中药》期刊2006年04期）
魏美娇[10]（2006）在《新型肿瘤细胞凋亡诱导剂筛选及作用机理研究》一文中研究指出本研究采用由大连理工大学精细化工国家重点实验室设计、合成的32种全新结构的8-氧-8H-苊并[1,2-b]吡咯-9-腈为主体环的系列衍生物,通过流式细胞仪检测细胞凋亡,筛选出14种能够诱导乳腺癌(MCF-7)细胞凋亡的化合物,其中S1、E-10和E-13化合物诱导MCF-7细胞凋亡效果较强。用终浓度为20gM的S1化合物作用12h的细胞凋亡比率可达29.7%;终浓度为20gM的E-10作用MCF-7细胞72h的细胞凋亡比率为29.3%;20μM E-13作用MCF-7细胞72h的细胞凋亡比率为35.1%。检测叁种化合物的半数有效剂量IC_(50)结果表明,化合物S1的IC_(50)最小,为17μM,且起效时间短。化合物S1已申请国家发明专利(2004100504495)。因此,以化合物S1作为抗癌药物先导物探讨诱导MCF-7肿瘤细胞凋亡的作用机制。 通过显微镜观察细胞生长,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,罗丹明123染色检测线粒体膜电位变化,分光光度法检测caspase-3、caspase-8、caspase-9活性,流式细胞术和Western Blotting检测Bcl-2蛋白表达量,实时荧光定量PCR检测Bcl-2 mRNA量。检测结果表明:caspase-3和caspase-9被激活,但caspase-8没有被活化,细胞内Bcl-2蛋白表达量和线粒体膜电位显着下降,而Bcl-2的mRNA量没有明显的改变。选用圆二色光谱分析化合物S1与Bcl-2蛋白复合物的结构,用Insight Ⅱ软件分析化合物S1与Bcl-2蛋白的结合方式,结果表明化合物S1能够对接在Bcl-2蛋白的表面活性区,破坏Bcl-2蛋白的α-螺旋结构。由此可初步推断Bcl-2蛋白可能是与化合物S1直接作用的凋亡因子,化合物S1通过下调Bcl-2蛋白的表达水平,引起线粒体膜电位下降,进而激活caspase-9、caspase-3,引发凋亡的级联反应,从而诱导MCF-7肿瘤细胞凋亡。 本研究筛选出全新的具有自主知识产权的小分子凋亡诱导剂。化合物S1作为Bcl-2蛋白抑制剂,将为研究Bcl-2蛋白的功能和该蛋白家族之间的关系提供新的研究手段。(本文来源于《大连理工大学》期刊2006-04-01）
细胞凋亡诱导剂论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
许多抗癌药物通过引起癌细胞的凋亡来达到治疗目的,因此开发能诱导癌细胞凋亡的药物一直是癌症研究的热点.以153个结构各异的具有caspase-3激活作用的细胞凋亡诱导剂为研究对象,通过叁维定量构效关系(3D-QSAR)分析,得到了一个基于位阻场、静电场、疏水场、氢键供体场和受体场参数的最优比较分子相似性指数法(CoMSIA)模型.该模型(Q2=0.51、R2ncv=0.89和R2pred=0.82)具有良好的内部一致性和预测能力,通过对模型的等值线图分析发现:(1)R2取代基提高诱导剂活性的因素包括位阻大、负电性大、有亲水性和具有氢键供体作用;(2)位阻适中和/或具有氢键供体作用的R4取代基,以及位阻小和/或亲水的R1取代基对提高分子的活性是有利的;(3)N-甲基-N-苯基-1-萘胺类细胞凋亡诱导剂具有正电性的A环3号位或C环7号位取代基,以及具有负电性的B环1号位取代基有利于提高诱导剂的生物活性.对该模型的分析更有利于认识细胞凋亡诱导剂的分子特征,并为设计和开发新型细胞凋亡诱导剂提供理论指导.
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
细胞凋亡诱导剂论文参考文献
[1].张爽.细胞凋亡诱导剂对羊肉成熟过程Caspase-3激活通路的机制研究[D].西北农林科技大学.2018
[2].张静晓,李燕,付新梅,潘艳秋,杨凌.一类细胞凋亡诱导剂的结构特征研究[J].大连理工大学学报.2015
[3].阿茹娜.希夫碱派生铜Ⅱ复合体通过激活内源性途径成为结肠癌细胞潜在的细胞凋亡诱导剂[J].中国普外基础与临床杂志.2014
[4].陈典华.一种新的基于FRET技术和流式细胞分析的细胞凋亡诱导剂药物筛选系统[D].南京大学.2014
[5].陈胡林,杨慧兰,范秀针,朱英杰,赵敏玲.线粒体DNA缺失细胞系对凋亡诱导剂敏感性的研究进展[J].广东医学.2013
[6].刘宁.与膜联蛋白A7相互作用蛋白以及细胞自噬和凋亡诱导剂的筛选、鉴定及其作用机制研究[D].山东大学.2012
[7]..新型癌症治疗药物——细胞凋亡诱导剂Elesclomol[J].药学进展.2009
[8].张劲松,唐庆九,ZIMMERMAN-KORDMANN,Martin,REUTTER,Werner,樊华.灵芝中肿瘤细胞凋亡诱导剂的研究[J].食用菌学报.2006
[9].金霞,郭勇.中药细胞凋亡诱导剂逆转肿瘤多药耐药的研究进展[J].中国现代中药.2006
[10].魏美娇.新型肿瘤细胞凋亡诱导剂筛选及作用机理研究[D].大连理工大学.2006
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