猪圆环病毒2型特异性纳米抗体文库的构建及鉴定

论文摘要

为构建猪圆环病毒2型（PCV2）特异性纳米抗体文库,并对其库容和多样性进行鉴定分析,使用PCV2全病毒灭活疫苗免疫羊驼,经四次免疫后采血分离外周血淋巴细胞,提取总RNA,通过RT-PCR反转录合成cDNA;根据羊驼重链抗体基因序列设计特异性引物,通过巢式PCR扩增羊驼单域重链抗体（variable domain of heavy chain of heavy-chain antibody,VHH）基因片段vhh,并将其克隆到噬菌粒载体pCANTAB 5E中,构建pCANTAB-vhh重组质粒;通过电穿孔法将重组质粒导入E. coli TG1获得抗PCV2特异性纳米抗体基因文库。文库菌梯度稀释后计数单克隆菌落数,并通过菌液PCR鉴定重组菌阳性率,计算抗体文库库容量;对PCR鉴定为阳性的重组质粒进行测序,分析抗体文库多样性。结果显示,构建的PCV2特异性纳米抗体文库重组菌阳性率为92.0%,库容量为2.75×1010CFU/m L;测序后序列比对分析结果表明,纳米抗体文库包含的基因序列具有丰富的多样性。本研究成功构建了PCV2特异性纳米抗体文库,且文库质量满足后续试验要求,为进一步获得针对PCV2抗原的纳米抗体奠定了基础。

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类型: 期刊论文

作者: 王长江,曲光刚,武曰星,管宇,魏凤,侯运专,赵中伟,沈志强

关键词: 猪圆环病毒型,羊驼,纳米抗体文库,抗体库容量,多样性

来源: 中国兽药杂志 2019年11期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 山东绿都生物科技有限公司,山东省滨州畜牧兽医研究院,华中农业大学

基金: 山东省自然科学基金资助项目(ZR2018PC027),山东省重点研发计划(2017JHZ007)

分类号: S852.651

页码: 1-8

总页数: 8

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标签：猪圆环病毒型论文;  羊驼论文;  纳米抗体文库论文;  抗体库容量论文;  多样性论文;