论文摘要
[目的]为揭示宁夏地区牛源金葡菌对β-内酰胺类药物可能存在的耐药机制。[方法]通过分离本地区流行菌株,进行blaZ等耐药基因检测,并模拟β-内酰胺酶与药物作用方式,以期分析产酶与耐药的关系。借助高效液相色谱（HPLC）并结合外排泵抑制剂（CCCP）,验证外排机制的存在。利用透射电镜（TEM）进行表型观察,研究药物引起的细胞壁变化。[结果]结果显示:分离到的261株牛源金葡菌对广谱的青霉素类药物具有较高的耐药率,氨苄西林（79.74%）,青霉素（78.50%）。对14种抗菌药物的多重耐药情况,主要以3、7及8重耐药的菌株居多;其中,1株耐受的抗菌药物可达14种之多;若将3重耐药视为多重耐药,则多重耐药率达70.11%。同时,基因组和质粒中blaZ耐药基因的检出率分别为82.37%和32.18%,其中16.86%为基因组与质粒共同检出。此外,还检测出在金葡菌中较少报道的ESBLs blaZTEM-1基因,检出率为26.05%。对本地区检出的β-内酰胺酶BlaZ进行同源模建及进化分析,并与TEM-1及同属中水解活性突出的TEM-52的结构对比,与药物分子对接;可知BlaZ是通过Ser70,Ser130及Ala237等氨基酸与青霉素分子以低结合能形成稳定复合物,与头孢菌素相比青霉素更易与BlaZ结合。其后,通过添加CCCP,利用HPLC技术检测添加前后细菌体内药物的蓄积量,证实了药物外排泵机制的存在;但仅在耐药菌中存在蓄积量的差异。为进一步探究还可能存在的耐药机制,利用TEM观察细胞壁变化,发现在64和128μg/ml的青霉素药物浓度下,菌株MSSA JY21细胞壁的厚度较无药物时,出现显著增加。值得注意,在128μg/ml的药物浓度下,细胞壁不再显著增厚,转而出现其他形态变化,包括:（1）由球形变为梭形,椭球形及杆状;（2）细胞壁增厚不均匀,呈现出"花瓣状"等;但MRSA菌株的细胞壁几乎未增厚。[结论]本地区牛源金葡菌对β-内酰胺类药物存在的耐药机制包括:产β-内酰胺酶,药物外排泵及细胞壁增厚三种。其中产β-内酰胺酶是主要的耐药机制;药物外排机制仅在耐药菌中较为突出,细胞壁增厚机制在MSSA菌株中显著,而对于MRSA并非如此。
论文目录
文章来源
类型: 国内会议
作者: 马强,王艺晖,常佳伟,万佳宏,魏彦琴,王曈,王桂琴
关键词: 金葡菌,耐药性,内酰胺酶,外排泵,细胞壁
来源: 中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会 2019-10-13
年度: 2019
分类: 基础科学,农业科技
专业: 生物学,畜牧与动物医学
单位: 宁夏大学农学院
分类号: S852.611
DOI: 10.26914/c.cnkihy.2019.034626
页码: 209-210
总页数: 2
文件大小: 154k
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