导读:本文包含了番茄基因克隆论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:紫色番茄,WD40重复蛋白,SlWD40-like,克隆
番茄基因克隆论文文献综述
张园,徐绍忠,毛自朝,林春,刘正杰[1]（2019）在《紫色番茄SlWD40-like基因克隆与表达分析》一文中研究指出WD-重复蛋白(WD-repeat protein)是一类含有WD40基序的蛋白,在植物响应非生物逆境胁迫的过程中具有重要调控作用。为揭示紫色番茄中WD40重复蛋白的功能,从富含花青素紫色番茄品种‘砚紫1号’中克隆 SlWD40-like基因,并对该基因在不同组织部位和不同胁迫条件下的表达模式进行分析。结果表明, SlWD40-like基因编码1个含有460个氨基酸的蛋白质。蛋白序列分析显示,SlWD40-like蛋白含有6个WD40基序,是典型的WD40重复蛋白。预测分析发现,该蛋白为亲水性蛋白,其二级结构以无规则卷曲为主;该蛋白序列在物种间具有高度的保守性,系统发生进化树分析表明紫番茄SlWD40-like氨基酸序列与潘那利番茄蛋白亲缘关系最近,其次是胡萝卜。应用qRT-PCR分析 SlWD40-like基因组织特异表达发现,该基因在叶和紫色果实中表达量最高。qRT-PCR分析表明, SlWD40-like基因受到盐胁迫、干旱胁迫脱落酸(ABA)和茉莉酸甲酯(MeJA)诱导表达,推测该基因可能参与紫色番茄逆境胁迫应答。该研究为后续进一步分析紫色番茄 SlWD40-like基因功能奠定了基础。(本文来源于《西北农业学报》期刊2019年04期）
刘爽[2]（2018）在《2个不同番茄品系fasciated基因克隆及表达载体构建》一文中研究指出为了比较由笔者所在实验室通过多代自交筛选得到的性状稳定的2个番茄品系FL1、MLK1中fasciated基因的编码序列,并验证该基因的功能,通过特异性引物PCR,获得该基因在2个供试材料中的序列,并通过Gateway技术分别构建了该基因的超量表达载体和RNAi载体。序列比对结果表明,2个心室差异明显的番茄材料中该基因的编码序列完全一致,同时也构建了完整的质粒表达载体系统。供试番茄材料中心室数的不同并不是由fasciated编码序列的差异引起的。Gateway技术是一种快速高效的植物表达载体构建方法。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2018年20期）
李姗姗[3]（2018）在《番茄SlGAMYBL2基因克隆及非生物胁迫中的功能分析》一文中研究指出番茄常用于植物科学研究,是重要模式植物之一,也是我国重要的蔬菜作物。全球气候变暖、水资源短缺以及设施栽培中土壤盐渍化造成的高盐、低温、高温、干旱等非生物胁迫因子影响着番茄生长发育和生产力。从分子生物学的角度阐明植物抗逆性基因的功能成为了改良植物抗逆性的重要基础。GAMYB是GA信号应答途径中的一个转录因子。GAMYB也受到胁迫激素ABA(abscisicacid)的调控。然而在番茄中GAMYB是否能提高植物的胁迫抗性鲜有报道。本研究克隆了番茄中GAMYB同源基因SlGAMYBL2,在烟草植株中异源超表达,并对转基因烟草进行表型鉴定和生理生化分析,研究番茄SlGAMYBL2在非生物胁迫中的功能,结果如下:1.SlGAMYBL2具有GAMYB典型的R2R3 DNA结构域,C端具有2个特殊的保守区域(BOX1,BOX2),从MEGA软件构建的进化树同样可以看出,SlGAMYBL2编码的蛋白属于GAMYB家族,与大麦HvGAMYB亲缘性较高。通过对其上游序列分析,除了发现具有典型的启动子核心序列外,还具有能响应非生物胁迫的顺式作用元件。2.利用DNA重组技术成功构建了 35S启动子驱动SlGAMYBL2基因表达的超表达载体。3.通过农杆菌介导法,将SlGAMYBL2超表达载体转入烟草。经卡那霉素抗性筛选、PCR和GUS染色鉴定,最终获得超表达SlGAMYBL2的转基因烟草。相对于野生型植株,转基因烟草叶片边沿形成锯齿状,叶片表现出明显的波浪型皱缩,叶柄较短。通过显微镜观察,转基因植株叶片气孔数明显多于野生型植株。4.将野生型与超表达SlGAMYBL2转基因烟草种子分别种植于含有 0 mmol/L、50 mmol/L、100 mmol/L、150 mmol/L 和 200 mmol/L甘露醇的MS培养基中。在0 mmol/L甘露醇中两者的发芽率都高达95%,随着甘露醇浓度的增加,发芽率都逐渐下降,然而转基因烟草发芽率均高于野生型。其中,在150mmol/L甘露醇中,转基因发芽率53.6%显着高于野生型发芽率41.2%。在200 mmol/L甘露醇中,转基因发芽率17.4%极显着高于野生型发芽率0.8%,野生型种子发芽受到明显的影响,发芽率低。相对于野生型种子,转基因烟草种子则表现出了较高的发芽率和发芽速度。5.将发芽7天的野生型烟草与超表达SlGAMYBL2转基因的烟草幼苗分别进行不同的胁迫处理,结果表明:在400 mmol/L甘露醇、0.2mmol/LGA、0.1mmol/LABA、4℃处理下,转基因烟草的根长极显着高于野生型烟草的根长。40℃处理下,转基因烟草的根长也显着高于野生型烟草;然而在200mmol/LNaCl的处理下,野生型幼苗根长(1.63cm)极显着高于转基因幼苗的根长(0.50cm)。以上结果显示,转基因植株在甘露醇、GA、低温、高温等非生物胁迫中有较强的抗性,而对高盐胁迫抗性降低。6.在0.1mmol/LABA、300mmol/L甘露醇、4℃低温胁迫下,对烟草植株进行抗性相关的生理活性测定,结果显示:转基因植株比野生型植株表现出更高的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(CAT)、过氧化氢酶(POD)活性和较低的相对电导率、丙二醛(MDA)含量。而在氯化钠胁迫处理下则表现了相反趋势。综上,超表达SlGAMYBL2提高了转基因烟草的ABA、甘露醇、低温胁迫的抗性。(本文来源于《广西大学》期刊2018-06-01）
樊蕾,高志英[4]（2018）在《番茄SlNAC71基因克隆及表达分析》一文中研究指出NAC转录因子在植物逆境应答中具有重要的作用。本研究从番茄中克隆了一个NAC基因Sl NAC71。该基因编码区长1 059 bp,编码352个氨基酸,预测分子量约为39.51 k D,等电点为8.40。推测的氨基酸序列中含有1个高度保守的NAM结构域。Sl NAC71基因序列具有mi R164靶序列识别位点。亚细胞定位预测Sl NAC71蛋白定位于细胞核。进化树分析发现,Sl NAC71和At NAC分为一个分支。组织特异性表达模式分析表明在检测的所有组织中Sl NAC71都有表达,在叶中表达量最高,在茎中表达量最低。Sl NAC71基因的表达受高盐诱导,说明番茄Sl NAC71基因可能参与番茄对高盐胁迫的应答。(本文来源于《分子植物育种》期刊2018年13期）
晚小帅[5]（2017）在《番茄植株螺旋生长突变体hel遗传分析与基因克隆》一文中研究指出番茄是一种重要的经济作物。植株的螺旋生长往往对植株的生长发育产生重要的影响。在拟南芥中很多螺旋生长相关的分子机制已经研究清楚,但是对于番茄螺旋生长的调控途径还没有相关的报道。对番茄植株螺旋生长的研究不仅具有重要的理论意义,而且了解突变体螺旋生长的突变机制可以为进一步了解茄科物种的生长习性奠定了良好的基础。螺旋突变体的hel还可以为进一步深入研究番茄微管功能多样性以及激素控制植株株型的研究提供珍贵的实验材料。本研究以hel突变体为研究对象,通过对突变体进行表型鉴定,遗传分析,同时和野生型材料LA1589杂交构建F2代分离群体,开发分子标记克隆目的基因,探究突变体的突变机制。为进一步深入研究番茄微管功能多样以及激素控制植株株型的研究提供一定的理论依据。主要研究结果如下:1、hel突变体表型稳定,其幼苗期子叶和叶柄较正常植株均出现了右手螺旋生长。对突变体整个生育期进行观察发现其茎也出现了右手螺旋的弯曲,该突变表型持续整个生育期。2、对hel突变体幼苗子叶的主叶脉与叶柄之间的夹角测量发现突变体hel两片子叶的螺旋角度平均值分别约为39.8°和40.1°,这表明突变体子叶的螺旋生长是左右对称的。3、取螺旋生长的突变体的叶柄做石蜡切片观察发现叶柄螺旋生长部位的表皮细胞排列不均匀,并且出现了弧形排列。4、以hel突变体为父本,野生型材料LA1589为母本进行杂交,构建F2遗传分离群体。遗传分析表明hel螺旋生长的突变表型是由隐性基因控制。5、通过BSR-Seq的方法进行测序分析发现四号染色体上出现了明显的SNP位点,这表明目的基因在四号染色体上面。6、利用番茄基因组数据在四号染色体上开发叁种标记用于目的基因定位。包括InDel、SNP、CAPS标记。首先用8对具有稳定多态性的InDel标记对从hel×LA1589的F2遗传群体中分离出的具有子叶以及茎螺旋生长表型的108棵单株进行遗传连锁分析,将hel基因定位于两个标记CH4-25和CH4-35之间,遗传距离约为2.4cM;进一步扩大F2代作图群体,开发新的SNP、CAPS标记,进一步用从F2代群体中分离的具有突变体表型的1136棵单株用于遗传连锁分析,最终把目的基因hel精确定位于标记SNP4-6和SNP4-2之间约389kb的物理区间内。7、利用基因分析与预测网站,在标记SNP4-6和SNP4-2之间预测到20个开放阅读框(ORFs)。通过对部分开放阅读框(ORFs)在CR291和hel突变体中的表达量分析表明ORF2在突变体hel中的表达量显着低于其背景材料CR291中的表达量。进一步开发覆盖候选基因ORF2编码区全长的特异性引物,以hel突变体以及其背景材料CR291为模板测扩增和测序,通过基因序列的比对我们发现ORF2核苷酸序列在hel突变体以及其背景材料CR291有18个氨基酸的变化。我们进一步预测其氨基酸序列,结果显示hel突变体氨基酸序列较CR291发生了大片段的缺失。8、通过液相色谱法测定hel突变体以及其背景材料CR291生长素含量,结果显示hel突变体中生长素的含量大约只有对照CR291的叁分之一,即与其背景材料CR291相比,螺旋生长突变体hel生长素的含量显着降低。9、通过BSR-seq数据分析hel突变体以及CR291中生长素生物合成以及信号转导途径中关键基因表达变化。其中生长素生物合成途径中的P450和ISS1在hel突变体中的表达量显着高于对照材料CR291。AMI1的表达量在hel突变体中的表达量显着低于对照材料CR291。在生长素信号转导途径中,ARF11在hel突变体中的表达量显着低于对照材料CR291。而BPS1和AXR3的结果刚好相反,在hel突变体中的表达量显着高于对照材料CR291。(本文来源于《华中农业大学》期刊2017-06-01）
莫爱琼,黄婉茹,郭小建,郑奕雄,万小荣[6]（2016）在《微型番茄中番茄红素β-环化酶基因克隆与鉴定》一文中研究指出根据Gen Bank DNA数据库序列信息设计引物,通过PCR扩增了Micro-Tom番茄(Lycopersicon esculentum)中编码番茄红素β-环化酶的Lcy B1、Lcy B2和Cyc B等3个基因序列,并对其进行了BLAST及多重排比分析.结果表明:Lcy B1和Lcy B2基因编码的叶绿体特异定位番茄红素β-环化酶分别位于第4和第10染色体,Cyc B基因编码的有色体特异定位番茄红素β-环化酶位于第6染色体.Lcy B2与Lcy B1基因核苷酸序列的同源性达84.4%,Cyc B与Lcy B1、Lcy B2核苷酸序列的同源性分别为59.3%和58.5%;Lcy B2与Lcy B1蛋白氨基酸序列的同源性达87.2%,Cyc B与Lcy B1、Lcy B2氨基酸序列的同源性分别为51.6%和51.8%.Lcy B1与Lcy B2在系统进化上亲缘关系更近.Lcy B1和Lcy B2蛋白均有一个由其N端81个氨基酸残基组成的叶绿体定位转运肽,Cyc B蛋白有一个由其N端83个氨基酸残基组成的有色体定位转运肽.(本文来源于《仲恺农业工程学院学报》期刊2016年03期）
韩磊,迟胜起,张剑峰[7]（2016）在《番茄褪绿病毒CP基因克隆、序列分析及原核表达》一文中研究指出为制备番茄褪绿病毒(Tomato chlorosis virus,To CV)抗血清,以番茄病叶为试验材料,提取总RNA,根据To CV CP基因设计特异性引物,利用RT-PCR方法克隆目的基因,构建原核表达载体p ET32a-To CVCP,在大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株中表达CP蛋白。结果表明:To CV CP基因(Gen Bank登录号:KT809400)全长774 bp,编码257个氨基酸,与Gen Bank中其他地区分离物核苷酸序列同源性为97.2%~99.6%,推导的氨基酸序列同源性为97.3%~100.0%。核苷酸序列保守位点占全部位点的91.3%,氨基酸序列保守位点占全部位点的88.3%,表明不同地理来源的番茄褪绿病毒的CP基因保守性较高。将To CV CP基因克隆到原核表达载体p ET-32a(+)上,并在体外条件下诱导表达出融合蛋白。SDS-PAGE分析表明,转p ET32a-To CVCP载体的大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株表达了分子量约33 k Da的重组蛋白。该重组蛋白在37℃,1.0 mmol/L IPTG、诱导6 h,表达量最大。(本文来源于《华北农学报》期刊2016年04期）
刘展[8]（2016）在《苹果HMGR1基因克隆及在番茄中的功能分析》一文中研究指出萜类化合物,在自然界中分布广泛、种类最多,是一种植物天然代谢产物,具有重要的社会学和生理学功能。近年来,越来越多的人关注萜类代谢途径的研究,深入研究萜类代谢途径中的关键酶是一个必然的切入点。HMGR是萜类两条代谢途径中甲羟戊酸途径的第一个限速酶,催化HMG-Co A形成MVA,是细胞质萜类代谢中的重要调控位点。植物中的HMGR常以小基因家族的方式存在,HMGR在植物的整个生长发育中都起到重要作用。本研究首先从青香蕉苹果中克隆得到了MdHMGR1,后以组成型启动子CaMV35S和MdHMGR1自身启动子与MdHMGR1构建表达载体,然后转化到野生番茄中,得到了35S+HMGR1和MdHMGR1-1+HMGR1两种转基因番茄植株,以研究两种不同启动子的表达调控作用以及MdHMGR1的功能。探讨MdHMGR1在转基因番茄中表达的时间和组织特异性以及对植物生长发育的影响。主要结果如下:(1)MdHMGR1在两种转基因番茄的根、茎、叶、果实中均有表达,但表达模式不同。MdHMGR1在35S+HMGR1转基因番茄的根、茎、叶、果实各个组织中的表达量均较高,MdHMGR1在MdHMGR1-1+HMGR1转基因番茄的根和果实中表达量最高,远远高于35S+HMGR1转基因番茄,具有组织特异性。(2)MdHMGR1在ABA,ETH,GA,IAA,MeJA,SA处理下的诱导表达模式有很大差异。在处理2h或4h时,MdHMGR1在这些激素的诱导处理下表达均有所提高,其中以MeJA和SA处理效果最为明显。(3)过量表达MdHMGR1能够诱导转基因番茄根的伸长,HMGR的抑制剂洛伐他汀处理前MdHMGR1-1+HMGR1转基因番茄的根长比35S+HMGR1转基因番茄和野生型番茄的根长,35S+HMGR1转基因番茄的根长略长于野生型番茄的根长。将叁种番茄的种子在含有HMGR的抑制剂洛伐他汀的培养基上播种,发现叁种番茄的根长均短于处理前,而MdHMGR1-1+HMGR1转基因番茄的根长依旧比35S+HMGR1转基因番茄和野生型番茄的根长。(4)番茄果实发育过程中纵径、横茎和体积的变化呈S形曲线,MdHMGR1-1+HMGR1转基因番茄果实的体积迅速膨大时期早于35S+HMGR1转基因番茄和野生型番茄。35S+HMGR1转基因番茄果实的迅速膨大时期早于野生型番茄。35S+HMGR1转基因番茄的果形指数不规则。(5)过量表达MdHMGR1促进番茄果实早期细胞分裂,发现转基因番茄的果实体积较大,MdHMGR1-1+HMGR1转基因番茄的果实体积最大。在叁种番茄果实发育的早期和中期从花梗注射HMGR的抑制物洛伐他汀,发现早期被注射洛伐他汀的果实都不会正常长大成熟,而在中期注射洛伐他汀的果实可以正常生长发育,说明MdHMGR1可以提高转基因番茄果实早期的细胞分裂活性。(6)CTK、IAA在MdHMGR1-1+HMGR1番茄植株的幼果中含量比35S+HMGR1和野生型番茄高。(7)35S+HMGR1和MdHMGR1-1+HMGR1转基因番茄有一定的耐盐性,盐处理后,MdHMGR1-1+HMGR1转基因番茄中的叶绿素、类胡萝卜素含量高于35S+HMGR1转基因番茄和野生型番茄,而35S+HMGR1转基因番茄中的叶绿素、类胡萝卜素含量稍高于野生型番茄,但差异不明显。(8)盐处理后,MdHMGR1-1+HMGR1转基因番茄中的抗氧化酶APX、SOD、POD、CAT的活性显着高于35S+HMGR1转基因番茄和野生型番茄,而35S+HMGR1转基因番茄和野生型番茄的抗氧化酶APX、SOD、POD、CAT的活性差异不显着。(本文来源于《山东农业大学》期刊2016-05-10）
王凤凤,赵曦娟,王丹,苏杨起,梅圆圆[9]（2015）在《‘Micro-Tom’番茄SlSARK-like基因克隆及初步功能分析》一文中研究指出从‘Micro-Tom’番茄(Solanum lycopersicum)中分离克隆了一个与叶片衰老相关、编码LRR型类受体蛋白激酶(receptorlike protein kinase,RLK)的基因。序列分析显示,该基因的编码产物与大豆和拟南芥中的SARK(SENESCENCE-ASSOCIATED RECEPTOR-LIKE KINASE)类似,都具有典型的LRR-RLK结构,且可能具有丝/苏氨酸和酪氨酸双底物特异性激酶活性,因此命名为SlSARK-like。半定量RT-PCR分析表明,无论是自然衰老还是AtSARK过表达诱导衰老的‘Micro-Tom’叶片中,SlSARK-like基因的表达水平都明显提高。进一步利用农杆菌介导的番茄转化技术获得了6个GVG:SlSARK-like转基因‘Micro-Tom’株系,发现DEX诱导SlSARK-like基因过表达导致转基因植株早衰,说明SlSARK-like基因对‘Micro-Tom’叶片衰老起正向调控作用。上述研究结果进一步支持了编码LRR-RLK的SARK基因参与叶片衰老调控的机制普遍存在于高等植物中。(本文来源于《植物生理学报》期刊2015年12期）
谌琴琴,李丽霞,战鹏林,王强[10]（2015）在《穿心莲八氢番茄红素脱氢酶ApPDS的基因克隆及功能鉴定》一文中研究指出采用RT-PCR和RACE技术从穿心莲植株中克隆得到了八氢番茄红素脱氢酶(PDS)的全长c DNA,预测有一个1 752bp的完整开放阅读框(序列已登录Gen Bank,登录号KP982892),编码584个氨基酸。序列同源性分析,穿心莲PDS编码的氨基酸序列与芝麻、广藿香、黄芩等其他植物的PDS有很高的同源性,该蛋白包含一个共有的氨基酸脱氢酶的辅酶结构域NAD(H)-binding domain。利用半定量RT-PCR技术进行组织表达模式分析,发现PDS基因在穿心莲的根、茎、叶、花中均有表达,表达量为叶﹥花﹥茎﹥根。用病毒诱导基因沉默(VIGS)的方法在穿心功莲体内鉴定Ap PDS的功能,构建VIGS载体p TRV2-PDS,经农杆菌浸染穿心莲叶片,植物表型观察、定量RT-PCR检测Ap PDS基因的表达,结果观察到叶片轻微变黄和明显的基因下调,鉴定了Ap PDS在体内的功能。该研究首次克隆并鉴定了穿心莲PDS基因,为进一步研究穿心莲中新基因尤其是穿心莲内酯类二萜生物合成基因的功能奠定了基础。(本文来源于《中国中药杂志》期刊2015年19期）
番茄基因克隆论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了比较由笔者所在实验室通过多代自交筛选得到的性状稳定的2个番茄品系FL1、MLK1中fasciated基因的编码序列,并验证该基因的功能,通过特异性引物PCR,获得该基因在2个供试材料中的序列,并通过Gateway技术分别构建了该基因的超量表达载体和RNAi载体。序列比对结果表明,2个心室差异明显的番茄材料中该基因的编码序列完全一致,同时也构建了完整的质粒表达载体系统。供试番茄材料中心室数的不同并不是由fasciated编码序列的差异引起的。Gateway技术是一种快速高效的植物表达载体构建方法。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
番茄基因克隆论文参考文献
[1].张园,徐绍忠,毛自朝,林春,刘正杰.紫色番茄SlWD40-like基因克隆与表达分析[J].西北农业学报.2019
[2].刘爽.2个不同番茄品系fasciated基因克隆及表达载体构建[J].江苏农业科学.2018
[3].李姗姗.番茄SlGAMYBL2基因克隆及非生物胁迫中的功能分析[D].广西大学.2018
[4].樊蕾,高志英.番茄SlNAC71基因克隆及表达分析[J].分子植物育种.2018
[5].晚小帅.番茄植株螺旋生长突变体hel遗传分析与基因克隆[D].华中农业大学.2017
[6].莫爱琼,黄婉茹,郭小建,郑奕雄,万小荣.微型番茄中番茄红素β-环化酶基因克隆与鉴定[J].仲恺农业工程学院学报.2016
[7].韩磊,迟胜起,张剑峰.番茄褪绿病毒CP基因克隆、序列分析及原核表达[J].华北农学报.2016
[8].刘展.苹果HMGR1基因克隆及在番茄中的功能分析[D].山东农业大学.2016
[9].王凤凤,赵曦娟,王丹,苏杨起,梅圆圆.‘Micro-Tom’番茄SlSARK-like基因克隆及初步功能分析[J].植物生理学报.2015
[10].谌琴琴,李丽霞,战鹏林,王强.穿心莲八氢番茄红素脱氢酶ApPDS的基因克隆及功能鉴定[J].中国中药杂志.2015
标签：紫色番茄; WD40重复蛋白; SlWD40-like; 克隆;