溶原性芽孢杆菌噬菌体的生物学特性及其灭活方法

论文摘要

芽孢杆菌以其独特的益生特性被应用于各个行业,但部分芽孢杆菌菌株中存在前噬菌体,易被紫外线或丝裂霉素等外界因素诱导转变为烈性噬菌体,从而影响菌株的生长以及工业化生产,进而造成巨大的损失。因此,本实验通过不同的方法诱导一株溶源性芽孢杆菌,以得到的噬菌体为研究对象,对其形态特征、生物学特性、环境因素对吸附能力的影响,以及温度与化学试剂对该噬菌体的灭活效果进行了研究。结果如下:（1）该溶原性芽孢杆菌噬菌体的最佳诱导方法是在距紫外灯（254nm）10-15cm处照射40s。经透射电镜观察该芽孢杆菌噬菌体（B1）属于肌尾噬菌体科。该噬菌体的最佳感染复数为10,潜伏期为45min,之后进入裂解期,在105min时进入平稳期,裂解量平均为104.48±2.70PFU。（2）温度与pH值对该噬菌体影响较大。在pH值为2和3时,噬菌体B1完全失活。当温度为0°C时,存活率仅有19.37%。而温度为36℃时,噬菌体B1的存活率达到90.22%。（3）pH值对噬菌体B1的吸附率影响较小,在pH 5-9时,噬菌体B1的吸附率在90%以上。温度为0℃-36℃时,对噬菌体B1的吸附能力没有明显影响,其吸附率均可达到90%以上。在50℃时,噬菌体B1的吸附虽受到明显影响,但仍可达到84.9%。二价离子的添加或氯霉素的添加对噬菌体B1的吸附能力无明显影响。（4）63℃时,RSM培养基对于噬菌体B1的保护比较好。水浴温度为72℃时,处理10min之后三种培养基保护的噬菌体B1全部失活。（5）除过氧乙酸外,乙醇和异丙醇对噬菌体B1的灭活效果与试剂浓度和处理时间呈正相关;75%乙醇或50%的异丙醇均可在15min内使其完全失活。

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摘要

Abstract

1 前言

1.1 芽孢杆菌

1.2 噬菌体

1.3 芽孢杆菌噬菌体

1.4 影响噬菌体吸附的因素

1.5 噬菌体的灭活

1.6 课题主要研究内容与目的

2 材料与方法

2.1 试验材料与仪器设备

2.1.1 菌粉来源

2.1.2 主要仪器设备

2.1.3 试剂与培养基

2.2 实验方法

2.2.1 菌株的分离与纯化

2.2.2 菌株的形态特征

2.2.3 菌株DNA提取以及16S rDNA鉴定

2.2.4 噬菌体的诱导

2.2.5 噬菌体的浓缩

2.2.6 噬菌斑的检测

2.2.7 噬菌体生物学特性

2.2.8 环境因素对噬菌体耐受能力的影响

2.2.9 环境因素对噬菌体吸附能力的影响

2.2.10 传统商业灭菌剂对噬菌体的灭活效果

2.3 数据处理与分析

3 结果与分析

3.1 菌株的形态特征

3.2 16S rDNA序列测定及系统发育分析

3.3 溶原性甲基营养型芽孢杆菌的诱导

3.3.1 紫外线对溶原性甲基营养型芽孢杆菌的诱导

3.3.2 丝裂霉素对溶原性甲基营养型芽孢杆菌的诱导

3.4 甲基营养型芽孢杆菌噬菌体的浓缩与效价的测定

3.5 甲基营养型芽孢杆菌噬菌体形态观察

3.6 甲基营养型芽孢杆菌噬菌体的生理生化特性

3.6.1 噬菌体B1最佳感染复数的测定

3.6.2 一步生长曲线

3.7 环境条件对甲基营养型芽孢杆菌噬菌体耐受能力的影响

3.7.1 pH值对噬菌体耐受能力的影响

3.7.2 温度对噬菌体耐受能力的影响

3.8 环境条件对甲基营养型芽孢杆菌噬菌体吸附能力的影响

3.8.1 pH值对噬菌体吸附能力的影响

3.8.2 温度对噬菌体吸附能力的影响

3.8.3 二价阳离子对于噬菌体吸附能力的影响

3.8.4 氯霉素对于噬菌体吸附能力的影响

3.9 传统商业灭菌剂对甲基营养型芽孢杆菌噬菌体的灭活效果

3.9.1 乙醇对噬菌体B1的灭活作用

3.9.2 异丙醇对噬菌体B1的灭活作用

3.9.3 过氧乙酸对噬菌体B1的灭活影响

3.9.4 不同温度对噬菌体的B1灭活影响

4 结论

致谢

参考文献

作者介绍

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 郭静

导师: 陈霞

关键词: 芽孢杆菌,噬菌体,生物学特性,吸附,灭活

来源: 内蒙古农业大学

年度: 2019

分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

专业: 生物学,轻工业手工业

单位: 内蒙古农业大学

分类号: TS201.3

DOI: 10.27229/d.cnki.gnmnu.2019.000030

总页数: 50

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