导读:本文包含了转移质粒载体论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:质粒,病毒,载体,基因,蛋白,新城疫,激酶。
转移质粒载体论文文献综述
蒙建州[1]（2009）在《嗜酸性硫杆菌高效接合转移质粒载体及抗砷工程菌的构建》一文中研究指出面对日益枯竭的自然资源,通过生物冶金对低品位矿藏和尾矿进行回收成为对现有资源的一种有效利用形式。喜温硫杆菌(Acidithiobacillus caldus,简称A.c)是一种广泛分布于硫化矿床的专性自养极端嗜酸性硫杆菌(Acidithiobacillus),是一种重要的浸矿微生物。但这一类细菌生长缓慢,代时长,细菌得率低,对某些重金属离子缺乏抗性,因此生产效率较低,在大规模矿样处理中其实际作用效果受到了限制。为了提高硫细菌的浸矿能力,亟待对其进行遗传改造。目前,将外源基因导入嗜酸性硫杆菌最为成功的方法是接合转移,但是现在用于接合转移的IncQ族质粒载体分子量较大,多克隆位点少,遗传操作难度大,限制了进一步的研究工作。这就要求我们构建新的质粒载体以满足研究和应用需要。本文以具有广泛宿主范围IncR族质粒载体pBBR1MCS-2为出发质粒,以链霉素抗性基因置换了质粒上的卡那霉素抗性基因作为选择标记,构建了新的具有链霉素抗性的低分子量质粒载体pMSD1(5,602 bp)和pMSD2(5,833 bp),其中质粒载体pMSD1没有启动子,而质粒pMSD2含有强启动子tac。为了验证构建的质粒载体的性质,以卡那霉素抗性基因为报告基因,构建了重组质粒pMSD1-Km,pMSD2-Km,以携带卡那霉素抗性基因的实验室原有IncQ族质粒pJRD215为对照,分别在大肠杆菌和喜温硫杆菌中比较检测了卡那霉素抗性基因的表达情况。实验表明,含有强启动子tac的质粒载体pMSD2具有最高的表达卡那霉素抗性基因的能力,而卡那霉素抗性基因依靠基因自身启动子时,质粒载体pMSD1上的表达能力比质粒载体pJRD215弱一点。同时也对不同质粒载体从大肠杆菌向嗜酸性喜温硫杆菌接合转移的频率和在嗜酸性喜温硫杆菌中的稳定性进行了比较检测,通过平皿菌落计数法计算接合转移频率。质粒pMSD2-Km的接合转移频率约为1.38±0.64×10~(-5)。在无选择压力的条件下,A.caldus(pMSD2-Km)连续传代50次,质粒载体的保留率约为75±2.7%,而实验室原有的质粒载体pJRD215的接合转移频率约为3.33±0.72×10~(-5),在无选择压力下连续传代50次之后质粒保留率约为79±3.2%。表明基于IncR族质粒构建的质粒载体pMSD2和pMSD1是一种能够向嗜酸性喜温硫杆菌接合转移并能在嗜酸性喜温硫杆菌中稳定存在的表达载体。运用实时定量PCR的方法,初步测定了质粒pMSD2-Km和pJRD215在大肠杆菌和喜温硫杆菌中的拷贝数。在大肠杆菌JM109中,以大肠杆菌染色体组单拷贝基因D-1-脱氧木酮糖磷酸合成酶基因(D-1-deoxyxylulose 5-phosphatesynthase,简称dxs)为内标基因,以质粒卡那霉素抗性基因为参比基因;在喜温硫杆菌MTH-04中,以喜温硫杆菌染色体组基因核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶(ribulose-1,5-biphosphate carboxylase/oxygenase,简称Rubisco)大亚基基因序列为内标基因,以质粒的链霉素抗性基因为参比基因。分别提取含有质粒的菌株E.coli(pMSD2-Km),E.coli(pJRD215),A.caldus(pMSD2-Km)和A.caldus(pJRD215)的总DNA进行适时定量PCR实验。试验结果表明:质粒pMSD2-Km和pJRD215在大肠杆菌的拷贝数分别约为5～6拷贝(4.2%～6.3%)和15～17拷贝(4.7%～6.9%),而在喜温硫杆菌MTH-04中的拷贝数分别约为5～6拷贝(3.0%～5.2%)和14～15拷贝(2.3%～4.5%)。在此基础上以来自于大肠杆菌质粒pUM3的抗砷基因为目的基因,构建重组质粒pMSD1-As,pMSD2-As。以实验室原有基于质粒pJRD215构建的抗砷质粒pSDRA1为对照,通过接合转移的方法,分别转入喜温硫杆菌MTH-04,获得抗砷基因工程菌株A.caldus(pMSD2-As),A.caldus(pMSD1-As)和A.caldus(pSDRA1),进一步检测了各菌株在含有不同浓度亚砷酸钠的培养基中的生长情况。结果表明:对照工程菌A.caldus(pSDRA1)的最大耐受浓度为40 mmol/L,新构建工程菌A.caldus(pMSD1-As)的最大耐受浓度也为40 mmol/L,但是菌体量低于工程菌A.caldus(pSDRA1)。而新构建工程菌A.caldus(pMSD2-As)具有最强的抗砷能力,最大耐受浓度为45 mmol/L。本实验成功构建了具有广泛宿主范围IncR族质粒载体pMSD1和pMSD2,该系列质粒具有接合转移频率高,分子量小,表达效率高及稳定性高等特点,为进一步对硫细菌的遗传改造奠定了基础;运用实时定量PCR的方法,初步测定了质粒pMSD2-Km和质粒pJRD215在大肠杆菌和喜温硫杆菌的质粒拷贝数;在此基础上,以质粒载体pMSD1和pMSD2为基础,构建了具有高抗砷能力的工程菌株。(本文来源于《山东大学》期刊2009-04-01）
苏春霞,苏鑫铭,张彦明,曹瑞兵,周斌[2]（2006）在《含NDV F48E9株F基因的MDV CVI988株转移质粒载体的真核表达》一文中研究指出为进一步提高重组病毒的表达水平,用构建的含gB启动子和NDV F48E9株F基因的MDV CVI988株转移质粒载体pUS10F转染293T细胞,通过PCR和接免疫荧光(IFA)法研究了其在真核中的表达,并确定最佳的转染条件。结果表明,真核细胞中带有F基因,转移质粒载体已经进入细胞DNA;转染转移质粒载体 pUS10F后的293 T细胞所表达的NDV F基因产物抗原性较好,能够与抗NDV的标准血清反应。确定的最佳转染条件为:DNA 3μg／mL,转染后48 h外源基因在细胞中的表达量最高,在6孔板和96孔板中细胞数量分别以 2×105／孔和1×101／孔的转染效果最好。(本文来源于《西北农林科技大学学报(自然科学版)》期刊2006年05期）
苏春霞,张彦明,张雪莲,徐学清,陈溥言[3]（2005）在《表达NDV F48E9株F基因的MDV CVI988株转移质粒载体的构建》一文中研究指出将新城疫病毒(NDV)F48E9株融合蛋白(F)基因1700bp克隆到真核表达载体pIRES中,构建成表达F基因的载体pIRESF,然后将包含F基因及其上游的内含子和下游的polyA的2900bpDNA片段再克隆入包含gB启动子的SK载体中,并使其克隆到gB启动子600bp的下游,最后将包含gB启动子和F基因表达盒3500bp克隆到包含MDVCVI988非必须片段US10的载体SK中。该研究为进一步在细胞中转染并获得表达F基因的MDVCVI988重组病毒奠定了基础。(本文来源于《西北农林科技大学学报(自然科学版)》期刊2005年01期）
苏春霞[4]（2004）在《含NDV F基因的MDV CVI988株转移质粒载体的构建及表达》一文中研究指出新城疫是由新城疫病毒引起的鸡和火鸡的一种急性高度接触性传染病。20 世纪40 年代就开始使用新城疫疫苗，通常使用的疫苗为活病毒苗。但活疫苗会导致鸡群产生轻微呼吸道症状，从而继发细菌感染。这些疫苗产生的免疫反应持续时间短，必须进行多次免疫接种；且雏鸡具有较高的母源抗体，会干扰疫苗的免疫效果。因此，构建重组病毒来表达与新城疫病毒免疫有关的抗原基因，试图解决以上问题。 马立克氏病是由马立克氏病病毒引起的鸡的一种高度接触性传染性肿瘤病。马立克氏病病毒疫苗株被认为是最有潜力的病毒载体之一，通过构建表达外源基因抗原的多价活疫苗来诱导免疫达到预防禽病的目的。 考虑多价重组疫苗的诸多优点，本试验利用马立克氏病病毒的 gB 启动子控制新城疫病毒 F 基因的表达来构建重组马立克氏病病毒，使其能有效地预防新城疫和由马立克氏病病毒超强毒株引起的马立克氏病，且既可以避免病毒对外源启动子的排斥作用，又可以避免母源抗体的影响来提高疫苗对商品鸡的免疫保护作用。 根据 GenBank 己发表的新城疫病毒 F48E9 株 F 基因序列，设计了一对引物，以含有新城疫病毒 F48E9 株 F 基因的质粒 pz1/z2 为模板，将扩增的 F 基因(1 678bp)片段克隆到真核表达载体 pIRES 中，构建成表达 F 基因的载体 pIRESF。再根据 GenBank己发表的载体 pIRES 基因序列，设计了一对引物，以载体 pIRESF 为模板将扩增的包含 F 基因及其上游的内含子和下游的 polyA 的 2 900bpDNA 片段，再克隆入包含马立克氏病病毒的 gB 启动子的 pBluescriptⅡSK 载体中，并使其克隆到 gB 启动子 580bp的下游，最后将包含gB 启动子和F基因表达盒3 500bp克隆到马立克氏病病毒CVI988非必需区 US10 基因中，并命名为 pUS10F。 在试验中，我们选择 CVI988 疫苗株作为病毒载体来构建重组病毒，原因是致弱的 MDVI 型疫苗如 CVI988，它们的免疫效果明显优于 HVT，同时疫苗株 MDVI 型与 vvMDV的抗原有较高的同源性，理论上可以比其他血清型更能诱导具有针对性的免疫应答反应，特别是针对 vvMDV 和 vv+MDV。为进一步提高重组病毒的表达水平，将成功构建的转移质粒载体转染 293T 细胞后，对转染条件进行了优化，通过利用转染后 293T细胞的基因组作为模板进行 PCR，结果说明真核细胞中已有带 F 基因的细胞存在，质粒载体已经进入细胞 DNA。间接免疫荧光检测结果表明，转染质粒载体后的 293T 细胞可特异性地表达 NDV 的 F 基因，所表达基因的抗原性较好，能够与抗 NDV 的标准血清反应。从而说明转移质粒载体中的基因表达盒可以在细胞中有效地表达，为进一步开发新型的抗 ND 和 MD 疫苗的研究打下基础。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2004-06-01）
孙公军,李银,刘宇卓,张则斌,马玉玲[5]（2003）在《含MDV部分gb基因、鸡γ—干扰素基因和EGFP基因表达盒HVT转移质粒载体pTu-gB-chIFN的构建》一文中研究指出近年来,基因工程活载体苗的研究十分活跃,国内外的学者相继报道了能够成功表达外源基因的多种重组活载体疫苗,如禽痘病毒、疱疹病毒、腺病毒、沙门氏菌等等。但对于这些重组活载体疫苗来说,除了考虑它们的安全性以外,抗原量表达不高也是其难以推广应用的限制性因素。因此,如何提高活载体的免疫效果成为了国内外的研究热点。后来,随着研究的深入,人们渐渐地意识到细胞因子可以(本文来源于《中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集（下）》期刊2003-10-01）
黄伟坚,陈德胜,姜焱,芦银华,张雪莲[6]（2003）在《伪狂犬病病毒蛋白激酶基因部分序列的克隆和序列测定及转移质粒载体的构建》一文中研究指出以伪狂犬病病毒SH株细胞培养物为模板 ,用PCR方法扩增蛋白激酶 (PK)基因部分片段 ,克隆到pCDNA3中 ,序列测定显示所扩增的PK基因片段长 90 7bp ,与PRVNIA_3株的核苷酸同源性为 99.6%。把PK基因克隆到pUC1 9上 ,利用PK基因中间的SalI酶切位点 ,插入带有绿色荧光蛋白 (EGFP)的基因表达盒 ,构成了含EGFP的转移载体 ,为今后研究PK基因的功能和构建PK缺失株奠定了基础。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2003年04期）
钱莺娟,张雪莲,陈德胜,陈溥言[7]（2002）在《不同方式表达马立克氏病病毒糖蛋白B重组鸡痘病毒转移质粒载体的构建》一文中研究指出根据现有文献及DNAstar软件分析.选取马立克氏病病毒(MDV)GA株糖蛋白B 250-460位氮基酸为目的片段。根据Genbank发表的序列设计五条引物Primer(U1)、Primer(U2)、Primer(D1)、Primer(D2)和Primer(LD).分别以Primer(U1)和Primer(U2)、Primer(D1)和Primer(D2)、Primer(U1)和Primer(D2)以及Primer(L/D)和Primer(D2)为引物对.PCR扩增出gB(U)、gB(D)、gB(S)和gB(L/D)。将PCR产物分别克隆入pBluescriptsKII+,构建成pSKgB(U1、pSKgB(D)、pSKgB(S)和pSKgB(L/D)。从pSKgB(U)以XbaI+BamHI酶切出gB(U),分别克隆入pSKgB(D)和pSkgB(L/D).构建成pSKgB(U/D)和pSKgB(U/L/D)。从pSKgB(S)、pSKgB(U/D)和pSKgB(U/L/D)中以XbaI+PstI酶切出gB(S)、gB(U/D)和gB(U/L/D).分别克隆入pEFgptl2S.构建成pEFMDgB(S)、pEFMDgB(U/D)和pEFMDgB(U/L/D)叁个鸡痘病毒转移质粒载体.用于下一步与鸡痘病毒进行同源重组构建叁种表达MDV GA株gB主要抗原决定簇基因的预防马立克氏病的重组鸡痘苗。(本文来源于《中国畜牧兽医学会禽病学分会第十一次学术研讨会论文集》期刊2002-10-01）
张雪莲,魏荣,陈溥言[8]（2001）在《新城疫病毒F_(48)E_9株病毒F基因表达盒的火鸡疱疹病毒转移质粒载体构建》一文中研究指出将新城疫病毒 (NDV)F4 8E9株融合蛋白 (F)基因 170 0bp克隆到真核表达载体 pcDNA3 中 ,构建成表达F基因的载体 pc3F。然后将包含F基因及其上游的细胞巨化病毒启动子和增强子的 3 80 0bpDNA片段再克隆入包含火鸡疱疹病毒 (HVT)非必须片段载体 pTK2 B中 ,构建成功含有F基因表达盒的HVT转移质粒载体 pTK3 F。经限制性内切酶酶切分析 ,F基因表达盒的插入方向与pTK2 B中TK基因转录方向一致。该研究为进一步在细胞中转染并获得表达F基因的HVT重组病毒奠定了基础(本文来源于《中国兽医科技》期刊2001年08期）
转移质粒载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为进一步提高重组病毒的表达水平,用构建的含gB启动子和NDV F48E9株F基因的MDV CVI988株转移质粒载体pUS10F转染293T细胞,通过PCR和接免疫荧光(IFA)法研究了其在真核中的表达,并确定最佳的转染条件。结果表明,真核细胞中带有F基因,转移质粒载体已经进入细胞DNA;转染转移质粒载体 pUS10F后的293 T细胞所表达的NDV F基因产物抗原性较好,能够与抗NDV的标准血清反应。确定的最佳转染条件为:DNA 3μg／mL,转染后48 h外源基因在细胞中的表达量最高,在6孔板和96孔板中细胞数量分别以 2×105／孔和1×101／孔的转染效果最好。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
转移质粒载体论文参考文献
[1].蒙建州.嗜酸性硫杆菌高效接合转移质粒载体及抗砷工程菌的构建[D].山东大学.2009
[2].苏春霞,苏鑫铭,张彦明,曹瑞兵,周斌.含NDVF48E9株F基因的MDVCVI988株转移质粒载体的真核表达[J].西北农林科技大学学报(自然科学版).2006
[3].苏春霞,张彦明,张雪莲,徐学清,陈溥言.表达NDVF48E9株F基因的MDVCVI988株转移质粒载体的构建[J].西北农林科技大学学报(自然科学版).2005
[4].苏春霞.含NDVF基因的MDVCVI988株转移质粒载体的构建及表达[D].西北农林科技大学.2004
[5].孙公军,李银,刘宇卓,张则斌,马玉玲.含MDV部分gb基因、鸡γ—干扰素基因和EGFP基因表达盒HVT转移质粒载体pTu-gB-chIFN的构建[C].中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集（下）.2003
[6].黄伟坚,陈德胜,姜焱,芦银华,张雪莲.伪狂犬病病毒蛋白激酶基因部分序列的克隆和序列测定及转移质粒载体的构建[J].中国预防兽医学报.2003
[7].钱莺娟,张雪莲,陈德胜,陈溥言.不同方式表达马立克氏病病毒糖蛋白B重组鸡痘病毒转移质粒载体的构建[C].中国畜牧兽医学会禽病学分会第十一次学术研讨会论文集.2002
[8].张雪莲,魏荣,陈溥言.新城疫病毒F_(48)E_9株病毒F基因表达盒的火鸡疱疹病毒转移质粒载体构建[J].中国兽医科技.2001
论文知识图
