表面等离子共振技术快速测定蛋白A与抗人T细胞单克隆抗体结合的反应常数

表面等离子共振技术快速测定蛋白A与抗人T细胞单克隆抗体结合的反应常数

论文摘要

采用表面等离子共振(SPR)技术,建立了测定两种抗人T细胞单克隆抗体(抗人TCRγδ和抗人CD3-PE)分别与蛋白A反应的动力学和热力学参数的方法。在双通道SPR仪(SR 7500DC)上,将抗人TCRγδ或抗人CD3-PE溶液流过偶联蛋白A的传感芯片,实时监测这两种抗体与蛋白A的结合和解离过程,并对其反应模式和反应常数进行分析。两种抗体与蛋白A的结合速率常数ka、结合平衡常数Ka和活化能Ea比较接近,但焓变ΔH有些差异。SPR适宜用作蛋白A与抗人T细胞单克隆抗体结合的反应常数的测定。该方法不需对分析物进行标记、专属性强,是检测和分析抗体和蛋白质A相互作用较理想的方法之一。

论文目录

  • 1 实验部分
  •   1.1 仪器与试剂
  •   1.2 实验方法
  •   1.3 数据处理
  • 2 结果与讨论
  •   2.1 TCRγδ或CD3-PE抗体与蛋白A反应条件选择
  •     2.1.1 酸度对抗体与蛋白A反应的影响
  •     2.1.2 离子强度对抗体与蛋白A反应的影响
  •   2.2 方法重现性实验
  •   2.3 TCRγδ或CD3-PE抗体与蛋白A特异性结合的ka和kd的测定
  •   2.4 TCRγδ或CD3-PE抗体与蛋白A反应活化能 (Ea) 、焓变 (ΔH) 的测定
  •     2.4.1 抗体与蛋白A反应Ea的测定
  •     2.4.2 抗体与蛋白A反应ΔH的测定
  • 3 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 张晖,薛洪宝,陈飞剑,王杰,王充,李柏青

    关键词: 表面等离子共振,蛋白,单克隆抗体,反应常数

    来源: 分析科学学报 2019年01期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑,医药卫生科技

    专业: 化学,临床医学

    单位: 蚌埠医学院化学教研室,蚌埠医学院感染与免疫安徽省重点实验室

    基金: 国家自然科学基金(No.21601004),安徽省高校自然科学研究重点项目(No.KJ2016A485,KJ2018A0230),安徽省高校科研平台创新团队建设项目(No.2016-40)

    分类号: O652;R446.6

    DOI: 10.13526/j.issn.1006-6144.2019.01.012

    页码: 65-69

    总页数: 5

    文件大小: 488K

    下载量: 308

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