解肝磷脂土地杆菌(Pedobacter heparinus)源唾液酸醛缩酶基因的异源表达及其活性研究

论文摘要

为发掘新型唾液酸醛缩酶,使其在大肠杆菌中得到高效表达,本研究首次从菌株Pedobacter heparinus中克隆疑似编码唾液酸醛缩酶的PhNeuLy3300基因片段,并构建可自主表达异源蛋白的组成型表达载体pRSF-EM5。在此基础上将克隆的目的基因分别导入该pRSF-EM5载体和常用的诱导型载体p ET-30a,构建重组质粒pET30aPhNeuLy3300和pRSF-EM5-PhNeuLy3300,经大肠杆菌表达系统异源表达目的蛋白,并进一步对两种重组蛋白酶进行电泳分析和活性研究。结果表明:编码唾液酸醛缩酶的基因片段全长为945 bp,共编码314个氨基酸残基;聚丙烯酰胺凝胶电泳显示两种重组蛋白表观分子量约为36.4 kDa,纯化后的pET30a-Ph Neu Ly3300重组蛋白浓度为3.29 mg/mL,证明经异源表达获得了两种重组目的蛋白酶;活性研究显示两种重组唾液酸醛缩酶均能在1 h内催化N-乙酰神经氨酸生成N-乙酰甘露糖胺,证明两种重组蛋白酶均具有较高的活性。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 郭娟,曹翠,李玉泉,刘丽,Josef Voglmeir

关键词: 唾液酸醛缩酶,诱导型启动子,组成型启动子,大肠杆菌表达,活性鉴定

来源: 食品工业科技 2019年05期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学

单位: 南京农业大学食品科学技术学院糖组学与糖生物工程实验室

基金: 国家自然科学基金(31471703)

分类号: Q78

DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2019.05.023

页码: 136-143

总页数: 8

文件大小: 1962K

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