导读:本文包含了毛囊培养论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:毛囊,干细胞,血清,培养基,乳头,细胞,体外。
毛囊培养论文文献综述
周玲聪,邓杨,陈碾,廖俊琳,曾丽[1]（2019）在《大鼠触须毛囊上段再生的体外培养》一文中研究指出观察大鼠触须毛囊上段组织的体外培养,筛选最优培养液,为毛乳头体外再生奠定基础。将大鼠触须毛囊上段组织分别培养于Williams E无血清培养液、含5%胎牛血清(FCS)的MEM培养液、Williams E无血清培养液+20 ng/mL EGF+10 ng/mL IGF-1、含5%FCS MEM培养液+20 ng/mL表皮生长因子(EGF)+10 ng/mL胰岛素生长因子1(IGF-1)、5%FCS MEM培养液+20 ng/mL EGF+10 ng/mL IGF-1+10~(-7) mmol/L双氢睾酮(DHT)、Williams E无血清培养液+20 ng/mL EGF+10 ng/mL IGF-1+10~(-7) mmol/L DHT共计6种不同培养液中。在37℃,5%CO_2培养箱中培养,隔日换液,在光学显微镜下观察其生长情况,并统计毛囊再生个数。相关标本制备石蜡切片,标本酶标免疫组化检测,观察α平滑肌动蛋白(α-SMA)在毛囊新生组织中的表达情况。结果显示5%FCS MEM+10~(-7) mmol/L DHT+10 ng/mL IGF-1+20 ng/mL EGF培养液是比较适合大鼠触须毛囊上段的体外培养液。该培养液中,毛囊上段组织体外再生率较高,结果可靠,可以作为研究毛囊体外再生的良好平台。(本文来源于《中南医学科学杂志》期刊2019年06期）
刘秉承[2]（2019）在《基于仿生策略的新型生物材料制备及其用于毛乳头细胞培养和毛囊重建的研究》一文中研究指出背景和目的组织工程与再生医学的发展让人们看到了秃发治疗的希望。现如今该领域面临两大挑战:(1)毛乳头细胞(dermal papilla cells,DPCs)是毛囊重建重要的种子细胞,但目前缺乏能兼顾细胞数量扩增与诱导能力维持的培养方法;(2)毛囊重建缺乏能精细化处理细胞与微环境关系的研究模型。要解决这些问题,都离不开新型生物材料所起的关键作用。近年来,仿生学在生物材料领域的运用极大的丰富了材料的实用性和功能性。仿生生物材料有多种实现形式,如直接选用模仿对象的功能性成分参与材料制备,或使用材料模拟出目标组织特定的结构或理化性能。综上所述,本实验将从两个方面进行研究(1)用仿生细胞膜包裹技术修饰具有类细胞外机制微结构的静电纺纳米纤维,探究其作为新型毛乳头细胞培养支架的可行性;(2)使用水凝胶微球和细胞成分作为功能构件,模块化构建具有仿生结构的大体积毛囊重建研究模型。上述研究以期为组织工程方向的秃发治疗研究提出一个新的综合性解决方案。方法1.细胞膜包裹纳米纤维支架材料的构建及生物功能性评价鼠DPCs作为细胞膜来源。使用静电纺丝和细胞膜包裹技术制备仿生DPCs培养支架材料。通过接触角测量、免疫印迹法、荧光表达等方法鉴定细胞膜包裹结果。使用细胞活死染色和CCK-8等方法对材料的生物相容性及DPCs的增殖表现做出评价。2.支架材料特性对DPCs生物学特性影响的研究我们使用SEM和共聚焦叁维重建等检测方法对DPCs进行形态学观察,通过对DPCs毛发诱导标记物进行基因表达分析、蛋白定性和定量表达和体内毛囊重建实验来探讨培养模型提供的细胞间交互模拟对DPCs生物学特性的影响,并根据结果进行相关机制的初步讨论。3.基于水凝胶微球模块化构建毛囊重建模型的研究使用生物相容性极好的明胶甲基丙烯酸酰氯(GelMA)作为制备水凝胶微球的原料。首先优化微球直径,微球细胞比例等参数。随后,通过悬滴法制备毛乳头细胞球,在transwell小室中依据毛囊及其微环境的结构特征,有序安排载细胞微球、毛乳头细胞球、新生鼠表皮细胞在空间上的分布,构建仿生化毛囊重建模型并进行体内验证。结果1.通过静电纺丝和细胞膜包裹技术,成功构建了仿生纳米纤维支架细胞培养模型,证实该模型有良好的生物相容性并支持DPCs增殖生长。2.仿生支架材料培养的DPCs表达与毛囊诱导能力相关特异性标记物ALP、β-catenin和Versican,且介导细胞间交互的N钙黏蛋白表达增强。经支架材料培养后的DPCs能在体内诱导毛囊再生。3.使用载细胞水凝胶微球、毛乳头细胞球和毛囊细胞作为功能构件,成功在体外构建出大体积含仿生真皮微环境的毛囊重建模型,并在移植裸鼠后实现毛囊再生。结论1.细胞膜包裹的纳米纤维支架材料是一种新型的DPCs培养模型。2.支架材料中仿生结构与细胞表面交互活性的协同作用可有效增强以非聚集性方式生长的DPCs的细胞间交互作用,使其恢复特异性标记物的表达以及诱导毛囊再生的能力,为组织工程毛囊提供了新的种子细胞培养工具。3.基于模块化的组织构建模式能有效恢复毛囊细胞与真皮微环境的位置关系,有助于构建细胞节省型的毛囊重建模型。(本文来源于《南方医科大学》期刊2019-05-17）
刘维海,王鹏,杨军[3]（2019）在《大鼠毛囊神经嵴干细胞分离培养及鉴定》一文中研究指出目的:采用显微分离+组织块贴壁法培养大鼠毛囊神经嵴干细胞(hf NCSC)。方法:显微分离SD大鼠触须部毛囊膨凸部(bugle),采用组织块贴壁法培养毛囊神经嵴干细胞,倒置显微镜下观察细胞形态。采用免疫荧光多重标记法检测Nestin和神经营养素受体p75(p75NTR)的表达。结果:用显微分离+组织块贴壁法可成功获得毛囊神经嵴干细胞,倒置显微镜下观察细胞活性好,形态多样,以梭形为主,也可见叁角形、椭圆形细胞,核大而明显,多居于胞质一侧。免疫荧光鉴定显示细胞Nestin和p75NTR双阳性。结论:从SD大鼠触须部毛囊bugle区成功分离到毛囊神经嵴干细胞。(本文来源于《神经解剖学杂志》期刊2019年02期）
夏肖雪,吕正梅,张守兵[4]（2018）在《大鼠毛囊干细胞体外无血清培养体系的建立》一文中研究指出建立大鼠毛囊干细胞的体外无血清培养体系。使用化学成分确定的Knock Out血清替代物(KSR)代替现有毛囊干细胞生长培养基中的胎牛血清,比较两种培养基培养的毛囊干细胞的形态特点和生长情况;通过毛囊重建实验证明该无血清培养基能够在体外维持毛囊干细胞的"干性";检测无血清培养基培养的毛囊干细胞中α6-整合素、角蛋白K14和P63的表达情况。毛囊干细胞在该无血清培养基中可正常生长并表达上述蛋白,将其移植到裸鼠背部,能够重建含毛囊皮肤。建立了大鼠毛囊干细胞的体外无血清培养体系并重建有毛皮肤,为毛囊干细胞的临床研究和应用提供了理论基础和技术支持。(本文来源于《安徽医科大学学报》期刊2018年10期）
张婧婧,王德光,周小兵,高晔,何晓琳[5]（2018）在《VEGF对体外培养绒山羊次级毛囊外根鞘细胞的影响》一文中研究指出本研究旨在探讨陕北白绒山羊毛囊外根鞘细胞的培养和VEGF对次级毛囊外根鞘细胞增殖、分化及细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、角蛋白10(K10)和成纤维细胞生长因子5(FGF5)mRNA表达量的影响。采集绒山羊体侧部皮肤,并利用消化等方法分离次级毛囊外根鞘细胞,置于37℃、5%CO_2、饱和湿度条件下培养;选用第5代次级毛囊外根鞘细胞,添加不同质量浓度血管内皮生长因子(VEGF),分别处理24、48h,噻唑兰比色法(MTT)检测细胞活力,EdU核酸标记技术检测细胞增殖;实时荧光定量PCR技术检测PCNA、K 10、FGF5mRNA的表达情况。结果显示:1)成功培养出次级毛囊外根鞘细胞,CK17和CK15细胞免疫组化呈阳性。2)VEGF可以促进绒山羊次级毛囊外根鞘细胞的增殖。相同浓度VEGF处理48h组的细胞活力极显着高于处理24h组(P<0.01);在48h处理组中,100ng·mL~(-1)组的细胞活力极显着高于对照组、1ng·mL~(-1)组、10ng·mL~(-1)组(P<0.01),并显着高于50ng·mL~(-1)组(P<0.05),50ng·mL~(-1)组的细胞活力显着高于对照组(P<0.05);100ng·mL~(-1)组和50ng·mL~(-1)组增殖细胞比例均极显着高于对照组、1ng·mL~(-1)组、10ng·mL~(-1)组(P<0.01),100ng·mL~(-1)组显着高于50ng·mL~(-1)组(P<0.05)。3)PCNA、K10、FGF5mRNA在次级毛囊外根鞘细胞中均有表达。在VEGF处理48h时,PCNA mRNA的表达量100ng·mL~(-1)组最高,极显着高于对照组(P<0.01),显着高于10ng·mL~(-1)组(P<0.05);K10mRNA的表达量对照组最高,极显着高于10ng·mL~(-1)组与100ng·mL~(-1)组(P<0.01);FGF5mRNA的表达量对照组最高,极显着高于100ng·mL~(-1)组(P<0.01)。综上表明,本研究成功分离培养了陕北白绒山羊次级毛囊外根鞘细胞;VEGF能够促进次级毛囊外根鞘细胞的增殖,抑制细胞的分化;VEGF可能通过抑制次级毛囊外根鞘细胞中FGF5基因的表达而促进毛囊生长。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2018年06期）
邓金[6]（2018）在《低氧模拟物去铁胺培养脂肪间充质干细胞间接促进毛囊干细胞生长机理的相关研究》一文中研究指出毛囊是一种微型器官,由外根鞘、内根鞘和毛干组成,始终处于生长期、退行期和休止期的周期性循环中。皮内脂肪组织是毛囊的一个重要的宏观环境,研究发现皮下脂肪组织与毛囊形成和功能密切相关。事实上,许多研究表明毛囊的再生循环由干细胞诱导,与脂肪组织和脂肪细胞谱系细胞密切相关。旁分泌机制被认为是目前脂肪间充质干细胞(adipose mesenchymal stem cells,ADSCs)促进毛囊组织再生的关键,其机制认为干细胞分泌的生长因子、细胞因子和趋化因子影响多种细胞的存活、增殖、迁移和基因表达,且作用效果有组织特异性。在影响ADSCs功能的众多因素中,周围环境中的氧气浓度特别是低氧环境发挥了重要作用。低氧促进ADSCs的增殖和自我更新能力显着提高,发挥再生潜力。同时可以通过增强某些生长因子的分泌来增强ADSCs的旁分泌作用。本研究选用绒山羊g ADSCs作为研究对象,以去铁胺(Deferoxamine,DFO)作为低氧模拟物培养ADSCs,模拟体内的低氧环境,确定低氧对ADSCs生长、增殖和旁分泌的影响。然后通过条件培养基培养毛囊干细胞(hair follicle stem cells,g HFSCs),检测g HFSCs生长増殖能力的变化,确定g ADSCs的旁分泌功能对g HFSCs的影响。最后对g HFSCs生长的相关信号通路进行分析,以探究g ADSCs在毛囊发育中所起的作用,进一步了解绒山羊的毛囊发育特点和分子调控机制,为深入了解绒山羊绒毛生长机理提供实验依据。一、低氧模拟物去铁胺对g ADSCs生长、增殖和旁分泌的影响本研究通过CCK-8活性法对DFO的处理浓度及处理时间进行筛选,分别配置25、50、100、200μmol/L浓度的DFO溶液,分别处理24h、48h、72h。结果表明DFO的处理浓度为25μmol/L、时间为48h时细胞活性最高。对25μmol/LDFO处理48h的ADSCs进行细胞计数法、CCK-8活性检测、细胞周期和凋亡检测。结果表明,与未经过药物处理的对照组细胞相比,25μmol/LDFO处理组G0/G1期细胞显着减少(P<0.05),S期细胞差异不显着(P>0.05),M期细胞显着增多(P<0.05),药物处理将细胞周期阻遏在M期,细胞凋亡数目显着减少(P<0.01)。ELISA定量检测DFO处理g ADSCs前后毛囊相关因子IGF-1、VEGF、b FGF和PDGF的含量变化,与对照g ADSCs相比,25μmol/LDFO处理g ADSCs48h上清中,IGF-1、PDGF含量增多,但是差异不显着(P>0.05)。VEGF、b FGF含量增多,且差异极显着(P<0.01)。检测结果表明,低氧模拟物DFO能显着增强g ADSCs的生长、增殖,对其旁分泌功能有显着的促进作用。二、ADSCs条件培养基对g HFSCs活性、细胞周期、凋亡和相关基因表达的影响本研究分别采用未经DFO处理和DFO处理48h后提取的ADSCs条件培养基对g HFSCs进行培养,然后进行细胞计数法、CCK-8活性检测、细胞周期和凋亡检测。结果表明DFO培养ADSCs 48h后提取的条件培养基培养的g HFSCs活性增强,与未经过条件培养基培养的对照组细胞相比,条件培养基培养的g HFSCs G0/G1期细胞减少,M期细胞增多,但差异不显着(P>0.05),S期细胞增多,差异显着(P<0.05)。而经过DFO处理后的条件培养基培养的g HFSCsG0/G1期细胞显着减少(P<0.05),S期和M期细胞显着增多(P<0.05),条件培养基处理将细胞阻断在S期和M期,细胞凋亡数目显着减少(P<0.01)。以实时定量PCR检测g HFSCs经过条件培养基处理前后HIF-1、VEFG和β-catenin的含量变化,结果与未经过处理、正常培养的细胞相比,条件培养基处理后的细胞中,HIF-1、VEGF和β-catenin基因转录水平均升高,且差异极显着(P<0.01)。检测结果表明,g ADSCs在毛囊发育中起重要作用,而这种效应可以由低氧效果来增强。叁、低氧模拟物DFO培养g ADSCs间接促进g HFSCs生长的分子机制本研究对DFO处理48h的g ADSCs HIF-1、VEFG和β-catenin含量变化进行实时定量PCR和蛋白免疫印迹检测。结果表明:与未经过DFO处理,正常培养的细胞相比,DFO低氧模拟物处理后的细胞中,HIF-1、VEGF和β-catenin基因转录水平均升高,且差异极显着(P<0.01)。Western blot检测结果显示HIF-1、VEFG和β-catenin蛋白含量升高。Western blot检测条件培养基培养的g HFSCs中ERK、Akt信号通路,结果表明ADSCs也可以通过在毛囊中激活增殖相关信号Akt和ERK。综上研究得出:经过低氧处理后的g ADSCs增殖活性显着增强,旁分泌作用更加突出,条件培养基可以刺激毛发生长,这种效应可以由缺氧增强。ADSCs可以通过在g HFSCs中激活增殖相关信号Akt和ERK,促进毛囊再生。(本文来源于《内蒙古大学》期刊2018-05-30）
周雅婷[7]（2018）在《绒山羊初级毛囊毛乳头细胞减血清培养条件的建立及BIO对毛乳头细胞诱导能力的影响》一文中研究指出毛乳头(dermal papilla,DP)控制着毛囊(hair follicle)的再生和大小,被认为是毛囊生长和毛囊周期的控制中枢,使其成为研究毛囊形态发生发育机制的优良模型。但是体外培养的毛乳头细胞贴壁及迁出时间较长且效率较低影响实验效率,使其作为研究毛囊周期机制的试验材料受到限制。本试验旨在探索培养毛乳头细胞最适培养基及最适血清添加比例,以此来提高其培养效率。结果如下:(1)通过显微解剖法剥离陕北白绒山羊生长期初级毛囊毛乳头并进行体外原代培养,利用细胞免疫荧光染色的方法检测毛乳头细胞中CD133、α-平滑肌激动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA),结果证实所培养的细胞为毛乳头细胞。在常规培养DMEM/F12(dulbecco's modified eagle media/nutrient mixture F-12)(1∶1)与DMEM/F-12 GlutaMAX、减血清培养基Advanced DMEM/F-12与Advanced RPMI 1640(roswell park memorial institute(RPMI)1640),四种培养基加入不同比例的血清后均可以成功培养毛乳头细胞并传代;(2)采用细胞计数、MTT、碱性磷酸酶的测定等方法证明体外培养毛乳头细胞的四种培养基添加的血清比例越高,细胞的生长、增殖速度越快,迁移、诱导能力越强。当添加10%血清时,减血清培养基培养的毛乳头细的生长增殖速率及生物学功能皆明显高于常规培养基(P<0.05)。添加6%血清的减血清培养基与添加10%血清的常规培养基的培养效果一样(P<0.05)。由此可知,减血清培养基中含有的对毛乳头细胞生长增殖、诱导能力维持或加强的有效因子相较于常规培养基,更适合于毛乳头细胞的培养。因此,建议使用血清用量较少且培养效果较好的减血清培养基体外培养毛乳头细胞。糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase,GSK-3β)抑制剂6-溴靛玉红-3-肟(6-bromoindirubin-3-oxime,BIO)能够激活Wnt信号通路,是否可以通过BIO增强毛乳头诱导能力的基因表达还有待探索。本试验结果如下:(1)利用添加不同浓度梯度BIO的培养基体外培养毛乳头细胞,采用CCK8(cell counting kit-8)比色法结果为添加BIO的浓度越高细胞增殖能力越低,而碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)测定方法得出添加浓度为1.5μM的BIO,毛乳头细胞的诱导活力明显增强的结论;(2)以β-肌动蛋白(β-actin)为内参基因,不添加BIO培养的毛乳头细胞为对照组,利用实时荧光定量PCR与蛋白免疫印迹法验证得到:添加1.5μM BIO培养的毛乳头细胞胰岛素样生长因子1基因(insulin like growth factor 1,IGF-1)、AKP、成纤维细胞生长因子受体7基因(fibroblast growth factor receptor 7,FGF7)、β-链蛋白(β-catenin)的表达量均显着上调(P<0.05),而骨形态发生蛋白4基因(bone morphogenetic protein 4,BMP4)表达量显着下调(P<0.05)。本研究首次探索出较适宜陕北白绒山羊毛乳头细胞体外培养的最佳培养基类型及血清浓度,并探究出1.5μM BIO对维持离体毛囊DP细胞诱导活性有重要作用,为进一步研究毛乳头调控毛囊周期发育的分子机制提供了理想细胞模型。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2018-05-01）
邓杨[8]（2018）在《大鼠触须毛囊上段再生的体外培养》一文中研究指出目的:分离生长期大鼠触须毛囊,获取毛囊上段组织,体外培养,筛选最优培养液;构建毛囊上段体外再生模型,为毛囊切割后毛乳头体外再生奠定基础。方法:(1)大鼠麻醉后,颈断处死,整个大鼠放入75%酒精中消毒,然后转移到超净工作台,剪下大鼠的触须部嘴唇,再次消毒,沿着毛囊平行走向将组织剪成细条状,用显微器械分离得到单个毛囊,仔细去除毛囊的周围组织,注意避免损伤到毛囊。(2)用镊子轻轻挤压毛囊上端,可见红色的含毛乳头的毛球部暴露于毛囊下端,紧贴毛球部上方用刀片将其横向切除,并拔除毛囊的毛发,最终得到大鼠触须毛囊上段标本。(3)将其分别培养于含5%胎牛血清(FCS)MEM、含5%FCS MEM+10ng·ml~(-1)胰岛素生长因子1(IGF-1)+20ng·ml~(-1)表皮生长因子(EGF)、5%FCS MEM+10~(-7)mmol/L双氢睾酮(DHT)+10ng·ml~(-1)IGF-1+20ng·ml~(-1)EGF、Williams E无血清培养液、Williams E无血清培养液+10ng·ml~(-1)IGF-1+20ng·ml~(-1)EGF、Williams E无血清培养液+10~(-7)mmol/LDHT+10ng·ml~(-1)IGF-1+20ng·ml~(-1)EGF共计6种不同培养液中,在37℃,5%CO2培养箱中培养,隔日换液,并在光学显微镜下观察其生长情况。(4)显微镜下统计毛囊再生个数,筛选培养液。(5)相关标本制备石蜡切片,HE染色,显微镜下观察。(6)标本酶标免疫组化检测,观察α-平滑肌收缩蛋白(α-SMA)在毛囊新生组织中的表达情况。结果:(1)大鼠触须毛囊较大,肉眼容易观察,大鼠触须毛囊上段获取容易,毛囊切面光滑,切除方法效果良好;拔除毛囊毛发后的毛囊上段组织,其质地较前稍微有些软化,但结构依然完好,毛囊下端的切缘平整光滑。(2)部分毛囊上段体外培养后第4天,外根鞘细胞增殖并填充拔除毛发后留下的空腔,部分外根鞘细胞突出到玻璃膜底部切缘之外。第9天,外根鞘细胞和真皮鞘细胞继续增殖,部分真皮鞘细胞移动到底部外根鞘中,毛囊断端被结缔组织包裹,结缔组织鞘基本规则,毛囊组织切缘痕迹不再明显,但没有毛乳头形成。(3)6中不同培养液相比较,5%FCS MEM+10~(-7)mmol/LDHT+10ng·ml~(-1)IGF-1+20ng·ml~(-1)EGF培养液是比较适合大鼠触须毛囊上段的体外培养液。该培养液中,毛囊上段组织再生数目最多,出现组织塌陷及细胞死亡的时间最长,差异具有统计学意义。(4)α-SMA广泛地表达于整个毛囊的各个部位,主要表达在真皮鞘及毛乳头,特别是毛囊下段紧挨着玻璃膜的真皮鞘细胞和毛乳头底部的细胞群,下段外根鞘的外层细胞中也有微弱的α-SMA表达。结论:(1)5%FCS MEM+10~(-7)mmol/LDHT+10ng·ml~(-1) IGF-1+20ng·ml~(-1)EGF培养液是比较适合大鼠触须毛囊上段的体外培养液;(2)本研究建立的大鼠触须毛囊上段体外再生的模型,毛囊体外再生率较高、结果可靠,可以作为研究毛囊体外再生的良好平台,为进一步研究毛乳头体外再生奠定基础。(本文来源于《南华大学》期刊2018-05-01）
夏肖雪[9]（2018）在《大鼠毛囊干细胞体外无血清培养体系的建立》一文中研究指出背景:皮肤是机体的重要保护屏障,能阻挡异物、病原微生物的侵入。皮肤损伤后,不同类型的干细胞增殖和分化,以替换和补充死亡的细胞,维持自平衡状态。毛囊干细胞(Hair Follicle Stem Cells,HFSC)是具有自我更新能力和多潜能性的成体干细胞,正常生理情况下可以维持毛干的生长和毛囊的再生。皮肤受损后,HFSC可以在多种信号通路的共同作用下增殖并分化形成毛囊、毛囊间表皮、皮脂腺等以维持皮肤的完整性。另外,在创伤愈合的过程中HFSC可以通过再生毛囊直接抑制伤口瘢痕的产生。HFSC在大面积皮肤损伤的临床治疗方面有着巨大的应用前景。目前,毛囊干细胞的体外培养通常需要使用添加胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的培养基,以维持干细胞的生物学特性。之前的研究已经从一根大鼠触须毛囊获取大量HFSC的方法,但是其培养基仍需添加血清。但是,使用添加血清的培养基培养的细胞用于临床治疗,会面临生物安全性问题、伦理学问题以及其他许多不确定的风险,这严重制约了毛囊干细胞的临床研究和应用,因此亟待建立不含血清的培养体系。KnockOut?血清替代物(KnockOut?Serum Replacement,KSR)是一种化学成分确定的无血清制剂,可以避免使用血清进行培养而带来的一系列问题。目前,临床胚胎干细胞多使用KSR培养,可以在维持胚胎干细胞生物学特性的同时避免许多问题。目的:用KSR取代大鼠毛囊干细胞的培养中FBS的使用,建立完全的规范的干细胞体外无血清培养体系。方法:使用化学成分确定的KnockOut血清替代物代替现有毛囊干细胞生长培养基中的胎牛血清,比较两种培养条件下的毛囊干细胞的形态特点和生长情况;通过裸鼠背部皮肤的毛囊重建实验,将无血清培养的毛囊干细胞与新生大鼠的真皮细胞按比例混合后移植到裸鼠背部的新鲜伤口处,明确该无血清培养基培养的干细胞能否在体外维持毛囊干细胞的“干性”,重建包括毛囊等皮肤附属器在内的功能性皮肤;使用免疫荧光方法检测在HFSC中高表达的蛋白(α6-整合素、角蛋白K14和P63)在无血清培养基培养的干细胞中的表达情况。结果:HFSC在该无血清培养基中可正常生长;将无血清培养的毛囊干细胞其移植到裸鼠背部,能够重建含毛囊的功能性皮肤;无血清培养的HFSC也能表达α6-整合素、角蛋白K14和P63。结论:本研究在前期研究的基础上,初步建立了大鼠毛囊干细胞的体外无血清培养体系,维持了自我更新和多潜能性的干细胞特性,为毛囊干细胞的临床研究和应用提供了理论基础和技术支持。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2018-03-01）
周雅婷,马森,李金朋,高旭红,陈玉林[10]（2018）在《绒山羊毛囊毛乳头细胞体外培养条件的优化》一文中研究指出毛乳头细胞(dermal papilla cells,DPCs)是毛囊(hair follicle,HF)底部一种特化的具有诱导毛囊再生能力的细胞,是诱导毛囊重建、传导毛发生长信号的重要结构。本研究通过采集陕北白绒山羊(Capra hircus)生长期皮肤组织样本,使用显微解剖法剥离毛乳头(dermal papilla,DP)并进行体外原代培养,利用细胞免疫荧光染色法检测DPCs中α-平滑肌激动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和CD133/prominin-1(5_transmembrane,5_TM)的表达,然后采用细胞计数、MTT(3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-diphenytetrazoliumromide)比色法、碱性磷酸酶(alkaline phosphatas,AKP)的测定等方法比较DPCs在不同血清比例下的常规培养DMEM/F12(dulbecco's modified eagle media/nutrient mixture F-12)(1∶1)与DMEM/F-12 Gluta MAX、减血清培养基Advanced DMEM/F-12与Advanced RPMI 1640(roswell park memorial institute 1640)的体外培养效果。结果显示:(1)细胞免疫组化染色证实所培养的细胞为DPCs,在供试的4种培养基中加入不同比例的血清后,均可成功培养DPCs并传代;(2)体外培养DPCs的4种培养基中,添加的血清比例越高,细胞的生长、增殖速度越快,细胞活力、细胞诱导能力越强;(3)当添加10%血清时,减血清培养基培养的DPCs的生长增殖速率及生物学功能均明显高于常规培养基(P<0.05);(4)添加4%~6%血清的减血清培养基与添加10%血清的常规培养基的培养效果无显着性差异(P>0.05)。由此可知,减血清培养基相较于常规培养基,含有对DPCs生长增殖、细胞活力、细胞诱导能力维持或加强的有效因子,因此添加4%~6%血清的减血清培养基更适合于DPCs培养。本研究首次提出利用减血清培养基体外培养DPCs,并探究出较适宜陕北白绒山羊DPCs体外培养的最佳培养基类型及血清浓度,为进一步研究毛乳头在毛囊周期发育中的分子机制提供了理想细胞模型参考。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2018年02期）
毛囊培养论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景和目的组织工程与再生医学的发展让人们看到了秃发治疗的希望。现如今该领域面临两大挑战:(1)毛乳头细胞(dermal papilla cells,DPCs)是毛囊重建重要的种子细胞,但目前缺乏能兼顾细胞数量扩增与诱导能力维持的培养方法;(2)毛囊重建缺乏能精细化处理细胞与微环境关系的研究模型。要解决这些问题,都离不开新型生物材料所起的关键作用。近年来,仿生学在生物材料领域的运用极大的丰富了材料的实用性和功能性。仿生生物材料有多种实现形式,如直接选用模仿对象的功能性成分参与材料制备,或使用材料模拟出目标组织特定的结构或理化性能。综上所述,本实验将从两个方面进行研究(1)用仿生细胞膜包裹技术修饰具有类细胞外机制微结构的静电纺纳米纤维,探究其作为新型毛乳头细胞培养支架的可行性;(2)使用水凝胶微球和细胞成分作为功能构件,模块化构建具有仿生结构的大体积毛囊重建研究模型。上述研究以期为组织工程方向的秃发治疗研究提出一个新的综合性解决方案。方法1.细胞膜包裹纳米纤维支架材料的构建及生物功能性评价鼠DPCs作为细胞膜来源。使用静电纺丝和细胞膜包裹技术制备仿生DPCs培养支架材料。通过接触角测量、免疫印迹法、荧光表达等方法鉴定细胞膜包裹结果。使用细胞活死染色和CCK-8等方法对材料的生物相容性及DPCs的增殖表现做出评价。2.支架材料特性对DPCs生物学特性影响的研究我们使用SEM和共聚焦叁维重建等检测方法对DPCs进行形态学观察,通过对DPCs毛发诱导标记物进行基因表达分析、蛋白定性和定量表达和体内毛囊重建实验来探讨培养模型提供的细胞间交互模拟对DPCs生物学特性的影响,并根据结果进行相关机制的初步讨论。3.基于水凝胶微球模块化构建毛囊重建模型的研究使用生物相容性极好的明胶甲基丙烯酸酰氯(GelMA)作为制备水凝胶微球的原料。首先优化微球直径,微球细胞比例等参数。随后,通过悬滴法制备毛乳头细胞球,在transwell小室中依据毛囊及其微环境的结构特征,有序安排载细胞微球、毛乳头细胞球、新生鼠表皮细胞在空间上的分布,构建仿生化毛囊重建模型并进行体内验证。结果1.通过静电纺丝和细胞膜包裹技术,成功构建了仿生纳米纤维支架细胞培养模型,证实该模型有良好的生物相容性并支持DPCs增殖生长。2.仿生支架材料培养的DPCs表达与毛囊诱导能力相关特异性标记物ALP、β-catenin和Versican,且介导细胞间交互的N钙黏蛋白表达增强。经支架材料培养后的DPCs能在体内诱导毛囊再生。3.使用载细胞水凝胶微球、毛乳头细胞球和毛囊细胞作为功能构件,成功在体外构建出大体积含仿生真皮微环境的毛囊重建模型,并在移植裸鼠后实现毛囊再生。结论1.细胞膜包裹的纳米纤维支架材料是一种新型的DPCs培养模型。2.支架材料中仿生结构与细胞表面交互活性的协同作用可有效增强以非聚集性方式生长的DPCs的细胞间交互作用,使其恢复特异性标记物的表达以及诱导毛囊再生的能力,为组织工程毛囊提供了新的种子细胞培养工具。3.基于模块化的组织构建模式能有效恢复毛囊细胞与真皮微环境的位置关系,有助于构建细胞节省型的毛囊重建模型。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
毛囊培养论文参考文献
[1].周玲聪,邓杨,陈碾,廖俊琳,曾丽.大鼠触须毛囊上段再生的体外培养[J].中南医学科学杂志.2019
[2].刘秉承.基于仿生策略的新型生物材料制备及其用于毛乳头细胞培养和毛囊重建的研究[D].南方医科大学.2019
[3].刘维海,王鹏,杨军.大鼠毛囊神经嵴干细胞分离培养及鉴定[J].神经解剖学杂志.2019
[4].夏肖雪,吕正梅,张守兵.大鼠毛囊干细胞体外无血清培养体系的建立[J].安徽医科大学学报.2018
[5].张婧婧,王德光,周小兵,高晔,何晓琳.VEGF对体外培养绒山羊次级毛囊外根鞘细胞的影响[J].畜牧兽医学报.2018
[6].邓金.低氧模拟物去铁胺培养脂肪间充质干细胞间接促进毛囊干细胞生长机理的相关研究[D].内蒙古大学.2018
[7].周雅婷.绒山羊初级毛囊毛乳头细胞减血清培养条件的建立及BIO对毛乳头细胞诱导能力的影响[D].西北农林科技大学.2018
[8].邓杨.大鼠触须毛囊上段再生的体外培养[D].南华大学.2018
[9].夏肖雪.大鼠毛囊干细胞体外无血清培养体系的建立[D].安徽医科大学.2018
[10].周雅婷,马森,李金朋,高旭红,陈玉林.绒山羊毛囊毛乳头细胞体外培养条件的优化[J].农业生物技术学报.2018
论文知识图
