论文摘要
目的:利用生物信息学软件评价幽门螺杆菌（Helicobacter pylori）多价表位疫苗CWAE的抗原结构,经原核表达获得高纯度CWAE蛋白,进而鉴定多价表位疫苗CWAE的免疫学性质。方法:通过生物信息学软件分析H. pylori多价表位疫苗CWAE的抗原结构;用人工合成的H. pylori多价表位肽融合基因WAE替换重组质粒pET28a-CUE中的UE基因,构建重组质粒pET28aCWAE。然后,将pET28a-CWAE转入大肠杆菌BL21（DE3）中,经IPTG诱导表达,并通过Ni-NTP镍离子亲和层析纯化抗原蛋白CWAE;利用GM1-ELISA鉴定CWAE中CTB组分的黏膜免疫佐剂活性。最后,通过ELISA和小鼠脾脏淋巴细胞增殖实验检测CWAE激发BALB/c小鼠产生抗H.pylori抗体体液免疫和淋巴细胞免疫应答的能力。结果:通过生物信息学软件证实H. pylori多价表位疫苗CWAE具有科学合理的结构;重组表达质粒pET28a-CWAE经PCR、双酶切和基因测序鉴定,融合基因CWAE与设计序列完全一致;重组基因工程菌株pET28a-CWAE/BL21（DE3）经IPTG诱导表达,抗原蛋白CWAE主要以包涵体形式存在,经Ni-NTP镍离子亲和层析纯化,纯度约达93. 2%; GM1-ELISA实验证实,CWAE中CTB组分依旧保持有较好的黏膜佐剂活性; ELISA结果证实CWAE能够激发BALB/c小鼠产生H. pylori特异性抗体,而小鼠脾脏淋巴细胞增殖实验进一步证实CWAE能够激发针对H. pylori多种致病因子的淋巴细胞免疫反应。结论:H. pylori多价表位疫苗CWAE具有科学合理的抗原结构,经原核表达可获得高纯度抗原蛋白,能够激发BALB/c小鼠产生H. pylori特异性抗体体液免疫和淋巴细胞免疫应答。为研发防治H. pylori感染的多价表位疫苗奠定实验基础。
论文目录
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 郭乐,王淑娥,何萌,张帆,刘宏鹏,刘昆梅
关键词: 幽门螺杆菌,多价表位疫苗,特异性抗体
来源: 中国生物工程杂志 2019年12期
年度: 2019
分类: 基础科学,医药卫生科技
专业: 基础医学
单位: 宁夏医科大学总医院临床病原微生物省级重点实验室,宁夏医科大学临床医学院,宁夏医科大学颅脑疾病国家重点实验室培育基地
基金: 宁夏自然科学基金(2019AAC03079)资助项目
分类号: R392
DOI: 10.13523/j.cb.20191201
页码: 1-8
总页数: 8
文件大小: 3755K
下载量: 95