导读:本文包含了蛋白质原核表达论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:蛋白质谷氨酰胺酶,原核表达,多克隆抗体,免疫学检测
蛋白质原核表达论文文献综述
田敏,曲瑞丹,刘英杰,陈浩喆,林青楠[1]（2019）在《蛋白质谷氨酰胺酶成熟肽基因mpg原核表达及其多克隆抗体的制备》一文中研究指出蛋白质谷氨酰胺酶(Protein-glutaminase,简称PG)是一种新型蛋白质脱酰胺酶,在蛋白质改性领域具有广阔的应用前景。但是,目前关于蛋白质谷氨酰胺酶的测定方法主要是通过苯酚-次氯酸盐反应测定铵离子含量指示蛋白质谷氨酰胺酶的酶活,该方法精确度和灵敏度有限。因此,利用原核表达系统表达解朊金黄杆菌(Chryseobacterium proteolyticum)分泌的蛋白质谷氨酰胺酶成熟肽基因mpg,纯化后制备其多克隆抗体用于检测解朊金黄杆菌分泌的蛋白质谷氨酰胺酶的含量。首先以解朊金黄杆菌基因组为模板扩增出成熟肽基因mpg,将其与pET32a载体连接构建重组质粒pET32a-mpg,转化至大肠杆菌BL21(DE3)。在25℃条件下,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导6 h,目的蛋白表达量最高、呈可溶性蛋白。通过Ni-NTA柱纯化的重组蛋白mPG-His_6,将其作为抗原,免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。间接酶联免疫法检测其效价,所得抗体效价为1∶5 000。蛋白质免疫印迹实验结果说明,该多克隆抗体特异性良好。最后使用该多克隆抗体对解朊金黄杆菌的发酵上清液进行蛋白质免疫印迹反应,检测天然蛋白质谷氨酰胺酶,结果表明该抗体特异性良好,可用于检测解朊金黄杆菌分泌的蛋白质谷氨酰胺酶,为深入研究蛋白质谷氨酰胺酶的生物学功能、建立蛋白质谷氨酰胺酶高产菌株的高通量筛选方法奠定了基础。(本文来源于《工业微生物》期刊2019年05期）
翁宏飚,沈卫锋,牛宝龙,孟智启[2]（2016）在《家蚕胆碱激酶基因的原核表达与蛋白质纯化及在农药残留检测中的应用》一文中研究指出乙酰胆碱酯酶(Ach E)是有机磷(OP)和氨基甲酸酯类农药的作用靶蛋白,在体外胆碱激酶(choline kinase)可专一性地以叁磷酸腺苷(ATP)作为磷酸的供体,催化Ach E的酶促反应产物氯化胆碱发生磷酸化。依据家蚕基因组数据库中的胆碱激酶基因(Bmcok)序列(Gen Bank登录号:AK378994.1)设计合成特异引物,从家蚕5龄第3天幼虫头部克隆了家蚕胆碱激酶基因,在大肠杆菌中进行原核表达并纯化目的蛋白质,获得质量浓度约1.03 mg/m L的家蚕胆碱激酶液。纯化的家蚕胆碱激酶在30℃、p H 9.5时的活性最高,约为115.6 U/mg。通过耦合Ach E和家蚕胆碱激酶的酶催化反应,并结合ATP-荧光素发光反应,建立酶抑制-发光快速检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的方法。该方法对甲胺磷残留的检测限可达0.05μg/m L,灵敏度高于现有的酶抑制色卡法和酶抑制分光光度计法,初步表明了将家蚕胆碱激酶应用于有机磷和氨基甲酸酯类农药残留快速检测的可行性。(本文来源于《蚕业科学》期刊2016年01期）
谢珊珊,黄金,杨发龙[3]（2015）在《绵羊肺炎支原体P109蛋白质分子特征、原核表达及其免疫反应性》一文中研究指出为了研究绵羊肺炎支原体P109蛋白质的结构与功能,本试验对p109基因进行生物信息学分析,并对其部分基因片段进行了PCR扩增、克隆和原核表达,采用Western-blot方法对其免疫反应性进行分析。结果显示,P109基因与猪肺炎支原体黏附相关基因mhp384高度同源。重组蛋白质在大肠杆菌Rosetta(DE3)工程菌中成功获得表达,以包涵体的形式存在;经纯化的重组蛋白质与山羊抗绵羊肺炎支原体全菌血清发生结合反应,表明P109蛋白质是绵羊肺炎支原体的免疫原之一。(本文来源于《江苏农业学报》期刊2015年04期）
陈雪梅,张天伍,李鸣,薛博涵,任秀花[4]（2015）在《hSAMP32原核表达载体的构建和蛋白质结构的生物信息学预测》一文中研究指出精子抗原的免疫避孕疫苗技术的发展将有利于人口的控制。研究结果表明hSSMP32蛋白有望成为新型男性免疫避孕的靶抗原。本实验目的在于获得hSAMP32原核表达的蛋白,预测hSAMP32蛋白空间结构和抗原表位。本研究在已获得hSAMP32基因和氨基酸序列的基础上,构建hSAMP32原核表达载体pGEX-4T3-hSAMP32在大肠杆菌BL21中进行原核表达。菌落PCR和双酶切鉴定原核表达载体pGEX-4T3-hSAMP32均可见882bp的目的片段。(本文来源于《中国解剖学会2015年年会论文文摘汇编》期刊2015-08-08）
谢伟民[5]（2015）在《拟南芥IAA1的原核表达载体构建及蛋白质表达与纯化》一文中研究指出植物激素是植物体内合成的一系列微量有机化合物,对植物的生长发育和环境应答具有重要的作用,植物激素在植物体内含量极低,易分解和氧化,其超微定量是制约植物激素研究的瓶颈之一,利用植物激素信号途径中能与之高亲和结合的响应因子创建某一激素的特异分离纯化方法可能是解决该问题的有效途径。因此,本研究从拟南芥获得生长素抑制蛋白基因IAA1的编码序列,以pGEX-KG为基本骨架构建IAA1原核表达载体,优化IAA1在叁种大肠杆菌中表达条件,获得大量的IAA1重组蛋白为构建一种高效的生长素分离纯化方法奠定基础。主要试验结果如下：(1)获得了IAA1基因的扩增产物。以野生拟南芥为材料,提取拟南芥总RNA,反转录成cDNA,根据GeneBan数据库中公布的IAAlcDNA序列设计引物,以cDNA为模板,获得IAA1基因片段。(2)构建了IAA1原核表达载体。将IAAl基因与T载体连接,经过质粒PCR鉴定和双酶切鉴定筛选出阳性克隆,结果测序比对,确认获得正确的IAA1基因。连接质粒pGEX-KG后,转入DH5a大肠杆菌感受态细胞中,经过质粒PCR鉴定和双酶切鉴定筛选出阳性重组子。(3)确定了IAA1蛋白质的最佳表达菌株。将构建好的pGEX-KG-IAA1重组表达载体转入叁种不同的表达菌株细胞中,加入异丙基-P-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,结果表明,Rosetta (DE3)为IAA1蛋白质的最佳表达菌株。(4)确定了IAA1蛋白最佳诱导温度。设定不同诱导温度对不同诱导温度条件下的总量样、上清样和结合样进行蛋白质电泳分析,结果表明,IAA1蛋白的最佳诱导温度为25℃。(5)获得了IAA1蛋白最佳诱导剂浓度。结果表明,IAA1蛋白的最佳诱导剂浓度为06mmol/L。(本文来源于《湖南农业大学》期刊2015-06-01）
张岩,赵玢,杨中正,申杰,胡伟[6]（2015）在《原核表达过程中非目标蛋白质识别与确认的方法:NRSF/REST蛋白功能结构域ZnF2-8原核表达过程中β-内酰胺酶的确认（英文）》一文中研究指出大肠杆菌常被用来大量快速制备重组蛋白质.但是,在原核表达目标蛋白质时非目标蛋白质经常会意外表达.有时这些非目标蛋白质也非常有使用价值,但是最终确认这些非目标蛋白质的过程昂贵又及其耗时.基于此,该文发展了一个新的基于二维核磁共振波谱技术、X-单晶衍射技术、结合其他生物化学方法,确认在原核表达神经限制性沉默因子NRSF/REST蛋白(该蛋白能够特异性识别神经限制性沉默因子RE1ds DNA及神经限制性激活因子ds RNA,以调节神经元干细胞的发育)功能结构域Zn F2-8时非目标蛋白β-内酰胺酶(β-lactamase).(本文来源于《波谱学杂志》期刊2015年01期）
毛立,刘霞,李文良,杨蕾蕾,张纹纹[7]（2015）在《边界病病毒E2蛋白质的原核表达及间接ELISA检测方法的建立》一文中研究指出边界病病毒(Border disease virus,BDV)是导致绵羊和山羊繁殖障碍的重要病原。为了建立检测BDV特异抗体的ELISA方法,本研究将BDV基因克隆入原核表达载体p ET-32a(+),并构建重组表达菌,经SDS-PAGE和Western blot鉴定目的蛋白质。以纯化的重组表达蛋白质为抗原,建立间接ELISA(r E2-ELISA)检测方法。通过反应条件优化,确定抗原包被浓度4.0μg/ml;封闭液为20 g/L BSA;血清最佳稀释度为1∶50,孵育1 h;二抗最佳稀释倍数为1∶30 000,作用45 min;以TMB为底物显色10 min。用该ELISA方法检测瘟病毒属的CSFV、BVDV阳性血清,结果均为阴性。对187份山羊血清样品进行临床检测,与Svanova试剂盒检测结果阳性符合率为76.25%,总符合率为74.87%;上述检测方法同时与Western blot鉴定结果进行比较,结果显示,Western blot结果与r E2-ELISA检测结果的符合率为79.55%,高于与Svanova试剂盒检测的符合率(72.73%)。表明建立的间接ELISA检测方法可适用于临床BDV血清样品的抗体检测。(本文来源于《江苏农业学报》期刊2015年01期）
许炼,高焕娟,潘志针,朱育菁,陈清西[8]（2014）在《小菜蛾中肠氨肽酶基因PxAPN5的克隆、原核表达及蛋白质同源建模分析》一文中研究指出【目的】克隆和表达小菜蛾Plutella xylostella氨肽酶基因,并进行基因序列分析和同源建模分析。【方法】以小菜蛾中肠c DNA为模板克隆分析氨肽酶基因序列,原核表达氨肽酶蛋白并进行酶活性测定,应用配体印迹分析氨肽酶与Cry2Ab蛋白的结合,通过蛋白质建模对突变位点进行分析。【结果】从小菜蛾中肠c DNA扩增出氨肽酶基因,该基因全长2 853 bp,编码950个氨基酸,预测蛋白分子量为107.3871 k Da,等电点为5.24;进化树分析显示,克隆得到的氨肽酶基因属于APN家族5,将其命名为Px APN5(Gen Bank登录号:KM034756)。Px APN5蛋白具有鳞翅目昆虫氨肽酶蛋白的保守性特征,即含有N-糖基化位点、O-糖基化位点和GPI锚定位点,具有"HEXXH"锌蛋白酶结构域和C端跨膜区域。在大肠杆菌Escherichia coli中原核表达Px APN5,表达产物经SDS-PAGE电泳,在110 k Da附近出现特异性条带;酶活性测试显示菌体破碎上清液具有氨肽酶活性,比活力为1 047.2 U/g。配体印迹结果显示表达的Px APN5能与Cry2Ab蛋白特异性结合。多序列比对结果表明,与其他已报道的小菜蛾氨肽酶相比,Px APN5氨基酸序列有3个保守性位点发生了突变,并通过蛋白质建模的方式表征突变位点。【结论】本研究成功克隆和表达了具有氨肽酶活性的小菜蛾氨肽酶,并发现其能与Cry2Ab蛋白特异性结合;通过蛋白质建模对氨肽酶突变位点的特征及功能进行了预测。这些结果对小菜蛾氨肽酶的功能性研究提供了理论基础。(本文来源于《昆虫学报》期刊2014年11期）
李辉,陈蓉,应诗家,施振旦,赵伟[9]（2014）在《鹅生长激素基因的克隆、原核表达及其重组蛋白质的离子交换纯化》一文中研究指出为了克隆鹅生长激素基因并表达其重组蛋白质,采集生长期鹅垂体组织,并利用TRIzol快速提取的总RNA为模板,反转录为c DNA。根据鹅生长激素基因编码的成熟肽序列(Gen Bank号:AY149895.2)设计1对引物,分别在上、下游引物的5'端引入Nhe I和Hind III酶切位点。经反转录扩增获得鹅生长激素基因的编码的成熟肽全序列。通过双酶切和连接将鹅生长激素编码区插入原核表达载体pRSET-A的Nhe I和Hind III位点之间,构建重组表达质粒pRSET-g GH并转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)。转化的菌株经IPTG诱导后表达重组鹅生长激素蛋白质,分子量约为2.93×104。经过DEAE-650M弱阴离子交换树脂纯化获得较高纯度的重组鹅生长激素蛋白质。(本文来源于《江苏农业学报》期刊2014年06期）
胡茂龙,孔令娜,龙卫华,高建芹,浦惠明[10]（2014）在《油菜乙酰羟基酸合酶基因BnAHAS1的克隆及其重组蛋白质的原核表达》一文中研究指出利用RT-PCR技术从甘蓝型油菜宁油16号(Brassica napus L.)中克隆到乙酰羟基酸合酶基因BnAHAS1的cDNA序列,该序列含有1个1 968 bp的开放阅读框,编码蛋白质655个氨基酸,分子量约为7.1×104,预测等电点为6.16。将该基因克隆到原核表达载体pCold II中,经酶切和测序鉴定后,将正确的重组质粒pCold IIBnAHAS1导入大肠杆菌BL21(DE3)。在15℃下以终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导12 h后,获得预期大小的重组蛋白质His-BnAHAS1,并用Western blot确定此重组蛋白质为目的蛋白质。(本文来源于《江苏农业学报》期刊2014年05期）
蛋白质原核表达论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
乙酰胆碱酯酶(Ach E)是有机磷(OP)和氨基甲酸酯类农药的作用靶蛋白,在体外胆碱激酶(choline kinase)可专一性地以叁磷酸腺苷(ATP)作为磷酸的供体,催化Ach E的酶促反应产物氯化胆碱发生磷酸化。依据家蚕基因组数据库中的胆碱激酶基因(Bmcok)序列(Gen Bank登录号:AK378994.1)设计合成特异引物,从家蚕5龄第3天幼虫头部克隆了家蚕胆碱激酶基因,在大肠杆菌中进行原核表达并纯化目的蛋白质,获得质量浓度约1.03 mg/m L的家蚕胆碱激酶液。纯化的家蚕胆碱激酶在30℃、p H 9.5时的活性最高,约为115.6 U/mg。通过耦合Ach E和家蚕胆碱激酶的酶催化反应,并结合ATP-荧光素发光反应,建立酶抑制-发光快速检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的方法。该方法对甲胺磷残留的检测限可达0.05μg/m L,灵敏度高于现有的酶抑制色卡法和酶抑制分光光度计法,初步表明了将家蚕胆碱激酶应用于有机磷和氨基甲酸酯类农药残留快速检测的可行性。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
蛋白质原核表达论文参考文献
[1].田敏,曲瑞丹,刘英杰,陈浩喆,林青楠.蛋白质谷氨酰胺酶成熟肽基因mpg原核表达及其多克隆抗体的制备[J].工业微生物.2019
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[3].谢珊珊,黄金,杨发龙.绵羊肺炎支原体P109蛋白质分子特征、原核表达及其免疫反应性[J].江苏农业学报.2015
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[10].胡茂龙,孔令娜,龙卫华,高建芹,浦惠明.油菜乙酰羟基酸合酶基因BnAHAS1的克隆及其重组蛋白质的原核表达[J].江苏农业学报.2014