一步法微滴数字PCR检测生菜中GII型诺如病毒

论文摘要

目的:采用逆转录微滴数字聚合酶链式反应（reverse transcription droplet digital polymerase chain reaction,RT-ddPCR）技术和QX200 Droplet Digital PCR System,建立一步法RT-ddPCR高灵敏快速检测生菜中GII型诺如病毒（norovirus genegroup II,NoV GII）的方法。方法:优化RT-ddPCR检测NoV GII的反应体系;通过10倍梯度稀释的NoV GII线性阳性质粒确定RT-ddPCR的检测范围;利用其他常见的肠道病毒核酸（非GII型诺如病毒）作为反应模板,与NoV GII核酸同时进行RT-ddPCR,判定反应体系的特异性,并通过不同时间多次检测样品的方式判断该检测方法的稳定性。采用ISO/TS 15216-1:2013食品中诺如病毒RNA提取方法,对人工染毒不同水平（高、中、低）的NoVGII生菜样品进行检测,同时研究去除抑制物前后对RT-ddPCR检测的影响,并与逆转录定量聚合酶链式反应（reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR）进行检测回收率的对比,探究RT-ddPCR在食品中NoV GII快速与定量检测上的发展潜力与应用前景。结果:RT-ddPCR的最高检测限为8.47×104 copies/μL,最低检测限为2.12 copies/μL,RT-ddPCR扩增效率为95.44%,标准曲线相关系数为0.997 3。在不同浓度人工染毒生菜样品中,抑制物的存在对ddPCR回收率检测结果没有显著性差异。在高、中染毒浓度下,抑制物对RT-qPCR与RT-ddPCR回收率检测结果影响不显著。低浓度下,未去除抑制物的RT-qPCR法平均回收率仅1.43%,与去除抑制物后的RT-qPCR检测结果（平均回收率为9.71%）有显著差异,且与RT-ddPCR的检测结果（未去除抑制物的RT-ddPCR平均回收率为11.80%,去除抑制物后平均回收率为12.53%）存在显著性差异。结论:生菜抑制物对RT-ddPCR的检测影响不显著,利用RT-ddPCR可有效测出低浓度的受污染样品,避免用现有的RT-qPCR方法因抑制物带来的"假阴性"检测结果。本实验建立的RT-ddPCR方法能高效、灵敏地检测出受污染食品中NoV GII的低病毒含量,在食源性病毒检测中具有可观的发展潜力和应用前景。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈嘉茵,方苓,吴诗微,唐书泽,张志强,李晖,吴希阳

关键词: 一步法,型诺如病毒,生菜,回收率

来源: 食品科学 2019年04期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 暨南大学理工学院食品科学与工程系,广东省疾病预防控制中心病原微生物检验所,香港中文大学生命科学学院食品及营养学部

基金: 2015年度广东省公益研究与能力建设专项(2015A030401042),2015年广东省国际合作项目(2015A050502030),2016年广东省前沿与科技创新专项粤港联合创新项目(2016A050503031)

分类号: TS255.7

页码: 332-337

总页数: 6

文件大小: 1452K

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