钱锦京徐绚华
（上海信谊药厂有限公司制药二厂201200）
【摘要】目的：建立高效液相色谱法测定去痛片中四种活性成分的含量测定方法。方法：采用C18色谱柱，0.02mol/L磷酸二氢钾（以三乙胺调节pH为7.5）-乙腈-甲醇（65：20：15）为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为215nm。结果：氨基比林、非那西丁、咖啡因、苯巴比妥之间的分离度良好，在一定浓度范围内线性关系良好，回收率符合规定。结论：本方法简便准确，耐用性好，可用于去痛片的含量测定。
【关键词】去痛片；含量测定；高效液相色谱法
【中图分类号】R927.1【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2015）24-0295-02
去痛片是由氨基比林、非那西丁、咖啡因与苯巴比妥组成的复方制剂，具有解热镇痛作用，质量标准至今仍沿用1989年卫生部药品标准（标准号：WS1-15(B)-89）[1]，该分析方法需要提取和多次转移等操作，繁琐耗时，精准度较差，难以有效控制产品质量。本文参考有关文献[2-5]，采用反相高效液相色谱法同时测定去痛片中四个主成分的含量，方法简便、快捷，结果准确可靠，可有效控制去痛片的质量。
1.仪器与试药
1.1仪器
Aglient1200型高效液相色谱仪（四元泵，紫外检测器），MTXP105DR电子天平，PHSJ-3F酸度计。
1.2试药
咖啡因对照品（批号：171215-201010，中检所），苯巴比妥对照品（批号：171222-200605，中检所），氨基比林对照品（批号：100503-200301，中检所），非那西丁对照品（批号：H-1，USP），去痛片（上海信谊药厂有限公司，批号：081202、110901、111001、111101），甲醇、乙腈和三乙胺为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。
2.方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱：①DikmaTechnologiesDiamonsilC18（2）②WelchMaterialsXB-C18③BetasilC18，流动相：0.02mol/L磷酸二氢钾（用三乙胺调节pH至7.5）-乙腈-甲醇（65：20：15）为流动相；流速为1.0ml/min；检测波长为215nm；柱温：30℃，进样量20?l。
2.2对照品溶液的制备
分别取四种对照品适量，精密称定，加流动相适量溶解并制成含苯巴比妥45ug/ml、咖啡因150ug/ml、氨基比林450ug/ml和非那西丁450ug/ml的对照品溶液。
2.3供试品溶液的制备
取本品20片，研细，取约165mg，精密称定，置100ml量瓶中，加流动相适量溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml于50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2.4辅料溶液：按处方量制备不含咖啡因、苯巴比妥、氨基比林和非那西丁的辅料样品，照供试品溶液的制备方法制备辅料溶液。
2.5专属性试验
在上述色谱条件下，分别吸取上述3种溶液，注入高效液相色谱仪，结果，咖啡因、苯巴比妥、氨基比林和非那西丁的保留时间分别为2.849min、6.396min、7.620min和8.762min，理论板数按咖啡因计算为10715，辅料溶液在苯巴比妥、咖啡因、氨基比林和非那西丁相应的保留时间处均未出现色谱峰，供试品溶液中咖啡因、苯巴比妥、氨基比林、非那西丁和相邻色谱峰间均能达到基线分离，分离度大于2.0。见图1。
2.6定量限
取对照品溶液逐级稀释若干倍进样，按峰高为基线噪声的10倍（S/N=10）计算，测得咖啡因、苯巴比妥、氨基比林和非那西丁的定量限分别为0.06μg/ml、0.18μg/ml、0.39μg/ml和0.48μg/ml。
2.7线性关系考察
精密称取咖啡因、苯巴比妥、氨基比林和非那西丁适量，加流动相溶解并稀释得到不同浓度的系列溶液，进样20ul，记录色谱图，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程，得到：咖啡因y=86.72x+3.6022（线性范围0.1～80.0ug/ml，r=0.9999）；苯巴比妥y=54.84x+8.0488（线性范围0.5～230.0ug/ml，r=1.0000）；氨基比林y=47.44x+5.9415（线性范围0.5～250.0ug/ml，r=1.0000）；非那西丁y=29.67x+24.3995（线性范围2.5～480.0ug/ml，r=0.9999）。
2.8进样精密度试验
取对照品溶液，连续进样5次，记录咖啡因、苯巴比妥、氨基比林和非那西丁峰面积，计算RSD分别为0.13%、0.08%、0.06%、0.12%。
2.9重复性试验
取同一批样品（批号：081202）各6份，由不同日期、不同人员分别测定，按2.3项下的方法制备供试品溶液，按2.1项下的色谱条件测定，结果RSD均小于2.0%。
2.10稳定性试验
取2.2、2.3项下的对照品溶液和供试品溶液，分别在0，2，4，8，12，18和24小时测定，结果对照品溶液和供试品溶液的各峰面积RSD均小于0.5%，表明在24小时内稳定。
2.11准确度试验
按处方比例称取辅料，再分别称取咖啡因、苯巴比妥、氨基比林和非那西丁对照品，相当于处方量的80%、100%、120%，每个浓度各3份，加入相应量的辅料，按2.3项下方法制备，测定回收率，分别为100.4%RSD=0.4%，100.4%RSD=0.4%，100.7%RSD=0.3%，100.7%，RSD=0.4%。
2.12耐用性试验
取2.2项的对照品溶液，以四种成分的分离度以及含量测定为指标，考察了不同流动相组成比例（0.02mol/L磷酸二氢钾±3%、乙腈±5%、甲醇±7%）、不同柱长和品牌的色谱柱、不同柱温（±5℃）、不同流速（±20%）、不同pH值（±0.2）对检测结果的影响，结果各组分间分离度均大于2.0，测定结果RSD均小于0.5%，表明方法耐用性良好。
3.讨论
3.1检测波长的选择
四种组分中，苯巴比妥的处方量最小，而且仅在200nm波长处有末端吸收，考虑溶剂的末端吸收效应，选择215nm波长，经试验比对，各组分在该波长处的响应适中。
3.2流动相的选择
本实验主要对流动相进行了优化，使得系统压力较低，出峰时间较快，峰形和柱效俱佳。
文献报道中磷酸二氢钾的浓度大都为0.05mol/L，本实验采用0.02mol/L，较低的盐浓度能够有效降低系统压力，减少实验中色谱柱的损耗。
流动相的对氨基比林和苯巴比妥的色谱行为影响较大，显著影响各组分间的分离度。耐用性试验显示，pH7.1和pH7.5的试验条件下个组分的分离度均大于2.0，所以选择7.3pH值可以保证各组分间的分离度，且出峰顺序不变。
通过比对甲醇和乙腈的比对试验发现，在相同条件下，以甲醇为有机相，氨基比林和非那西丁的分离度耐用性差，且系统压力大，系统噪音大；以乙腈为有机相，苯巴比妥和氨基比林的分离度耐用性差。本实验中采用甲醇-乙腈为混合有机相，使得四个组分的分离度相对稳定，而且降低了系统噪音。
3.3本实验中采用了25cm和15cm的色谱柱，综合考虑柱效、系统压力、出峰时间等因素，20cm的色谱柱更为值得推荐。
【参考文献】
[1]：卫生部药品标准化学药品及制剂[S].第一册,WS1-15(B)-89,1989:20-20.
[2]：季申.去痛片中四组分的HPLC测定[J].中国医药工业杂志，1997,28(10)，455-457.
[3]：杨直，刘思恩.HPLC-ELSD法测定去痛片中氨基比林、咖啡因、苯巴比妥和非那西丁的含量[J].药物分析杂志，2006,26（12），1845-1847.
[4]：武谷，钟淮滨.HPLC法测定去痛片中四种成分的含量[J].中国药品标准,2005,311(31),31-33.
[5]：施捷,段永生,刘晓阳,周立春.高效液相色谱法测定去痛片中四种成分的含量[J].中国药物应用与监测,2006年,6,24-27.