中信湘雅生殖与遗传专科医院生殖中心湖南长沙410078
【摘要】目的：探讨组织型纤溶酶原激活剂（tPA）、纤溶酶原激活物抑制因子-1（PAI-1）、tPA/PAI-1比值在RPL患者中的表达及意义方法：收集我院2005-2006年反复自然流产RPL病例85例，选取27例O型血高效价RPL患者（抗A（B）－IgG抗体效价≥1：128）作为组1；37例非O型血RPL患者作为组2；22例正常生育者作为对照组3，采用酶联免疫吸附实验（Elisa）检测外周血tPA、PAI-1含量。结果：（1）自身为O型血、丈夫为非O型血的RPL女性48例，抗A（B）－IgG效价≥1：128的RPL患者达31例，占O型血反复自然流产患者的65％。（2）O型血高效价RPL患者tPA比对照组低（P<0.05），PAI－1比对照组高（P<0.05），tPA/PAI－1比值显著低于对照组（P<0.05）。结论：O型血高效价的RPL患者存在纤溶异常。
【关键词】反复自然流产；tPA；PAI-1
自然流产系指妊娠不到28周、胎儿体重不足1000g而自然终止者。当自然流产连续发生3次以上时则称为反复自然流产（recurrentpregnancyloss，RPL），发病率约占妊娠总数的15％，是妇产科常见的疾病。RPL病因复杂，其中ABO血型不合因素占9.1％～11.5％[1]。血型不合常导致胎盘部位血栓形成，被认为可能是造成反复自然流产的一个重要原因。本研究收集我院2005-2006年治疗的RPS患者64例为研究对象，旨在探讨tPA、PAI-1、tPA/PAI-1比值在RPL患者中的表达及意义。
1材料和方法
1.1血型资料
收集中信湘雅生殖与遗传专科医院就诊的反复自然流产患者血型病历资料，并对自身为O型血、丈夫为非O型血的RPL女性进行抗A（B）-IgG抗体效价测定。
1.2研究对象及分组
外周血标本：在2005年3月～2006年2月在中信湘雅生殖与遗传专科医院就诊的反复自然流产患者中，选取年龄在20岁～40岁之间，均排除染色体、内分泌、生殖系统解剖异常、糖尿病、高血压，采样前10天内未服用影响凝血和纤溶活性药物，如阿司匹林、潘生丁、肝素等药物的女性作为研究对象。将这些患者分成1组和2组，1组27名患者，为O型血，抗A（B）－IgG抗体效价≥1：128的反复自然流产患者；2组37名患者为非O血型的反复自然流产患者。将健康已生育22名妇女作为对照组第3组。
1.3实验方法
1.3.1血标本的收集与处理
随机抽取肘静脉血2毫升，置于EDTA抗凝的硅化玻璃管中，常温下以3000rpm离心10分钟，收集上层液（血浆，黄色，尽可能去除血小板），置-70度冰箱保存待测，所有标本同批测定。
1.3.2检测母体外周血IgG抗体效价
在中信湘雅生殖与遗传专科医院化验室行微柱凝胶免疫法检测。
1.3.3酶联免疫实验（ELISA）检测tPA、PAI-1值
按照试剂盒操作经试剂重建、加样、洗涤、加酶标抗体、洗涤、显色、终止、比色等步骤，最后以A490对tPA和PAI-1标准品浓度（ng/ml）在双对数坐标系上作标准曲线，待测样品tPA和PAI-1含量（ng/ml）可从标准曲线上查出。
1.4统计方法
实验数据采用SPSS11.5软件进行处理，以α＝0.05为显著性检验水准，血浆tPA及PAI的含量用均数±标准差（X±SD）表示，组间比较采用单因素方差分析。
2结果
2.1我院2005年3月至2006年2月就诊的反复自然流产患者中O型血高效价（效价≥1：128）患者比例调查调查中信湘雅生殖与遗传专科医院就诊的反复自然流产患者共85例，其中自身为O型血、丈夫为非O型血的RPL女性48例，抗A（B）－IgG效价≥1：128的RPL患者达31例，占O型血反复自然流产患者的65％。
2.2ELISA检测tPA在三组间的表达
1组tPA含量为25.62.±10.02（ng/ml），2组的tPA含量为24.46±11.34（ng/ml），3组tPA含量为32.11±10.26（ng/ml）。1组、2组tPA含量显著低于3组（P<0.05），见表1。
表1外周血标本tPA在三组间的表达（ng/ml）
3.讨论
反复自然流产是妇产科常见疾病，ABO血型不合因素在反复自然流产和新生儿溶血中日益受到重视。本研究旨在探讨ABO血型不合的RPL患者妊娠纤溶环境行初步研究。
通过对中信湘雅2005年3月至2006年2月所能收集到的RPL患者血型调查发现，在O型血的RPL患者中，抗A（B）－IgG抗体效价升高的占到了65％。提示，抗A（B）－IgG抗体效价升高可能是导致流产、尤其是O型血RPL妇女流产的原因之一。
我们对O型血高效价RPL患者、非O型血RPL患者、正常对照组外周血检测结果为O型血高效价RPL患者tPA比对照组低（P<0.05），PAI－1比对照组高（P<0.05），tPA/PAI－1比值显著低于对照组（P<0.05）。提示O型血高效价的RPL患者存在纤溶异常。Sheppard等已在妊娠合并症妇女的生产子宫静脉血和胎盘组织提取物中检测到PAI水平明显高于正常妇女，且胎儿宫内发育迟缓时，滋养层细胞PAI－1呈高水平表达[2]。Buchholz报道RPL女性存在纤溶酶原激活物活性降低[3]，SartoA等则发现，在早期反复流产和在助孕过程中反复胚胎移植后着床失败的妇女中，纤维蛋白溶解力低下是推断早期流产的一个重要参考[16]。纤溶能力低下，从而导致血栓形成倾向，促发流产[4，5]，这些均与我们的研究结果一致。但是，针对ABO血型不合的RPL患者纤溶情况的研究少见。究竟流产是患者全身性纤溶异常在妊娠局部的反映，还是妊娠局部纤溶的异常导致外周血的相应改变，还有待进一步调查研究。
参考文献：
[1]李大金，朱颖，王明燕等.反复自然流产的免疫流行病学研究.中华医学杂志，1998，78（2）：94－97.
[2]SheppardBL，BonnarJ.Uteroplacentalhemostasisinintrauterinefetalgrowthretardation.SeminThrombHemost，1999，25（5）：443-446.
[3]SartoA，RochaM，MartinezM，SergioPasqualiniR.Hypofibrinolysisandotherhemostaticdefectsinwomenwithantecedentsofearlyreproductivefailure.Medicina（BAires），2000，60（4）：441-447.
[4]LeeGS，ParkJC，RheeJH，KimJI.EtiologiccharacteristicsandindexpregnancyoutcomesofrecurrentpregnancylossesinKoreanwomen.ObstetGynecolSci.2016Sep；59（5）：379-87.
[5]PatilR，GhoshK，VoraS，ShettyS.InheritedandacquiredthrombophiliainIndianwomenexperiencingunexplainedrecurrentpregnancyloss.BloodCellsMolDis.2015Oct；55（3）：200-5.