牛源抗菌肽BSN-37体外的细胞毒性及抗沙门氏菌活性的研究

牛源抗菌肽BSN-37体外的细胞毒性及抗沙门氏菌活性的研究

论文摘要

面对耐药甚至多重耐药细菌种类增加所造成的人类卫生健康和食品安全双重压力,寻找新型临床治疗替代药物已经成为当务之急。抗菌肽作为生物界普遍存在的先天免疫防御系统一部分,以广泛的来源,丰富的序列结构以及其表现出的抗细菌、抗病毒、抗寄生虫、抗肿瘤和免疫调节等多样药用生物活性成为备受关注的焦点。本实验室前期研究工作中,在牛脾脏内分离到一个新抗菌肽BSN-37,内含37个氨基酸残基,富含脯氨酸和精氨酸,并经初步测定对大肠杆菌具有较低的MICs。本研究在前期试验的基础上通过BSN-37体外的生物活性试验、对沙门氏菌的作用机制和对沙门氏菌胞内增殖的影响能力,阐述抗菌肽BSN-37的生物活性,杀菌机制,并为开发抗菌肽BSN-37成为治疗沙门氏菌感染药物奠定理论基础。体外生物活性研究包括对系列模式菌株和临床分离耐药沙门氏菌MICs检测、盐离子抗性、杀菌动力学、溶血性和细胞毒性。结果发现,抗菌肽BSN-37对革兰氏阴性菌有良好的抑菌效果,对耐药菌也表现出与相应模式菌株相似MICs;除Ca2+外主要生理浓度盐离子不影响BSN-37对沙门氏菌的抑菌活性;抗菌肽BSN-37作用呈现浓度时间依赖性;抗菌肽BSN-37表现出极低的溶血性,且对VERO、CEF、RAW264.7和IPEC-J2未表现细胞毒性。总之,抗菌肽BSN-37体外对沙门氏菌抑菌活性稳定,其活性受盐离子生理浓度浓度影响较小,体细胞无细胞毒性。其次,研究BSN-37对鼠伤寒沙门氏菌CVCC541菌膜通透性、细胞膜去极化并扫描电镜和透射电镜成像。在膜损伤显著的阳性对照抗菌肽Pexiganan对比下,试验发现,抗菌肽BSN-37对细菌菌膜的通透性影响和去极化能力均较弱,通过扫描电镜和透射电镜图像发现只有在高浓度或较长时间条件下抗菌肽BSN-37可以造成沙门氏菌菌膜损伤,同杀菌曲线结果保持一致,结果表明,抗菌肽BSN-37通过非膜损伤机制作用沙门氏菌。最后,研究BSN-37对MDCK胞内沙门氏菌增殖数量影响。结果表明,在沙门氏菌共侵入的16 h内,试验组在侵入2 h加入抗菌肽BSN-37后,未处理组的MDCK胞内鼠伤寒沙门氏菌CVCC541菌数量为处理组的1.99倍,临床分离耐药鼠伤寒沙门氏菌SB217表现为2.39倍。分析表明,抗菌肽BSN-37能够显著减少沙门氏菌在MDCK细胞内的增殖量。综上所述,抗菌肽BSN-37对革兰氏阴性菌有良好抑菌活性,无细胞毒性;对沙门氏菌除Ca2+外其活性不受生理盐离子浓度影响,呈浓度时间依赖性,通过非模损伤机制作用沙门氏菌,并对细胞内沙门氏菌增殖产生影响。

论文目录

  • 缩略语表
  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 第一章 文献综述
  •   1 前言
  •   2 抗菌肽研究史
  •   3 抗菌肽的来源
  •     3.1 微生物源抗菌肽
  •     3.2 昆虫源抗菌肽
  •     3.3 植物源抗菌肽
  •     3.4 两栖动物源抗菌肽
  •     3.5 哺乳动物源抗菌肽
  •   4 抗菌肽的分类
  •     4.1 按抗菌肽生物活性
  •     4.2 按抗菌肽二级结构分类
  •   5 抗菌肽的作用机制
  •     5.1 菌膜损伤机制
  •     5.2 细胞内杀菌机制
  •     5.3 免疫调节机制
  •   6 富含脯氨酸抗菌肽的研究进展
  •   7 抗菌肽的应用前景
  •   8 本研究的目的和意义
  • 第二章 抗菌肽BSN-37 体外的抑菌活性及细胞毒性研究
  •   1 试验材料
  •     1.1 抗菌肽及试剂
  •     1.2 菌株与细胞系
  •     1.3 主要试剂配制
  •     1.4 主要试验仪器设备
  •   2 试验方法
  •     2.1 BSN-37 的抑菌活性
  •     2.2 BSN-37 的盐抗性试验
  •     2.3 BSN-37对CVCC541 的时间杀菌曲线
  •     2.4 BSN-37 的溶血性
  •     2.5 BSN-37 的细胞毒性
  •     2.6 统计分析
  •   3 结果与分析
  •     3.1 BSN-37 的体外抗菌活性
  •     3.2 盐离子对BSN-37 的影响
  •     3.3 BSN-37对CVCC541 的杀菌动力学分析
  •     3.4 BSN-37 的体细胞毒性
  •   4 讨论
  •   5 小结
  • 第三章 抗菌肽BSN-37 作用沙门氏菌菌膜研究
  •   1 试验材料
  •     1.1 抗菌肽及试剂
  •     1.2 菌株
  •     1.3 主要试剂配制
  •     1.4 主要试验仪器设备
  •   2 试验方法
  •     2.1 BSN-37 作用CVCC541 菌膜通透性检测
  •     2.2 BSN-37对CVCC541 菌膜跨膜电位的影响
  •     2.3 扫描电镜观察
  •     2.4 透射电镜观察
  •   3 结果与分析
  •     3.1 CVCC541 外膜通透性的测定结果
  •     3.2 BSN-37对CVCC541 质膜的去极化
  •     3.3 扫描电镜观察结果
  •     3.4 透射电镜观察结果
  •   4 讨论
  •   5 小结
  • 第四章 抗菌肽BSN-37 对胞内沙门氏菌的影响
  •   1 试验材料
  •     1.1 抗菌肽及试剂
  •     1.2 菌株与细胞系
  •     1.3 主要试剂配制
  •     1.4 主要试验仪器设备
  •   2 试验方法
  •     2.1 BSN-37 作用胞内沙门氏菌试验
  •     2.2 统计分析
  •   3 结果与分析
  •   4 讨论
  •   5 小结
  • 全文总结
  • 参考文献
  • 附录
  • 致谢
  • 导师简介
  • 作者介绍
  • 攻读学位期间取得的研究成果
  • 文章来源

    类型: 硕士论文

    作者: 杨磊

    导师: 胡建和

    关键词: 抗菌肽,生物活性,沙门氏菌,杀菌机制,胞内菌

    来源: 河南科技学院

    年度: 2019

    分类: 基础科学,农业科技

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 河南科技学院

    基金: 国家自然科学基金面上项目(No.31672559),河南省高等学校重点科研计划资助项目(15A230006)

    分类号: S852.61

    总页数: 75

    文件大小: 4146K

    下载量: 143

    相关论文文献

    • [1].抗菌肽在大肠杆菌中的融合表达策略[J]. 湖北农业科学 2017(15)
    • [2].抗菌肽的研究现状和挑战[J]. 中国生物工程杂志 2019(08)
    • [3].抗菌肽在生猪养殖中的应用[J]. 安徽农业科学 2019(15)
    • [4].组蛋白去乙酰化酶调控肠道抗菌肽表达的研究进展[J]. 动物营养学报 2019(10)
    • [5].抗菌肽在生猪养殖中的应用[J]. 国外医药(抗生素分册) 2017(06)
    • [6].四十年抗菌肽研究史——华西人的理解和历程[J]. 国外医药(抗生素分册) 2017(06)
    • [7].抗菌肽的生产方法与产业化分析[J]. 现代牧业 2018(01)
    • [8].抗菌肽的作用机理及应用[J]. 湖北农业科学 2018(05)
    • [9].抗菌肽的研究进展及在食品中的应用[J]. 食品科技 2018(04)
    • [10].再谈抗菌肽及其在水产养殖上的应用(中)[J]. 科学养鱼 2018(04)
    • [11].抗菌肽基因工程化研究进展[J]. 科学家 2017(11)
    • [12].抗菌肽及其在水产养殖业的应用(四)[J]. 中国水产 2019(05)
    • [13].鱼类及两栖动物抗菌肽的研究进展[J]. 生物技术通报 2017(12)
    • [14].抗菌肽生物工程及其应用研究[J]. 饮食科学 2017(22)
    • [15].家蝇生长发育各阶段抗菌肽基因表达情况的研究[J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2008(03)
    • [16].抗菌肽在动物营养上的应用及研究进展[J]. 铜仁职业技术学院学报 2013(05)
    • [17].抗菌肽快速筛选方法的研究进展[J]. 食品科学 2019(13)
    • [18].再谈抗菌肽及其在水产养殖上的应用(下)[J]. 科学养鱼 2018(05)
    • [19].水产养殖动物抗菌肽的研究进展[J]. 乡村科技 2018(06)
    • [20].抗菌肽及其在水产养殖业的应用(一)[J]. 中国水产 2019(02)
    • [21].抗菌肽的功能及发展前景[J]. 安徽农学通报 2018(12)
    • [22].鱼类抗菌肽研究进展(一)[J]. 水产养殖 2019(09)
    • [23].抗菌肽在饲料中应用的优势[J]. 国外医药(抗生素分册) 2017(06)
    • [24].传统中药及其活性成分调控抗菌肽表达及功能的研究进展[J]. 国外医药(抗生素分册) 2017(06)
    • [25].鱼类抗菌肽基因工程表达系统概述[J]. 生物学教学 2012(02)
    • [26].驯化影响下的家蚕3种抗菌肽基因的进化模式[J]. 蚕业科学 2011(01)
    • [27].直链烷基苯磺酸钠对中国林蛙抗菌肽基因表达的影响[J]. 生命科学研究 2011(05)
    • [28].转中国对虾抗菌肽基因水稻抗白叶枯病效应初析[J]. 中国水稻科学 2010(04)
    • [29].抗菌肽基因工程表达载体的研究进展[J]. 中国兽医杂志 2019(02)
    • [30].从专利角度分析微生物源抗菌肽研发现状及研发思路[J]. 沈阳药科大学学报 2019(08)

    标签:;  ;  ;  ;  ;  

    牛源抗菌肽BSN-37体外的细胞毒性及抗沙门氏菌活性的研究
    下载Doc文档

    猜你喜欢