鸭源新型鹅细小病毒分离鉴定与荧光定量PCR检测方法的建立

论文摘要

研究现状及研究意义:从2015年3月以来,在我国江苏、安徽、山东等地养鸭场陆续出现了以喙舌发育不良、舌头外露、生长缓慢、痢疾、瘫痪等为特征的传染性疾病,被称为“短喙-侏儒综合征”。据统计肉鸭死亡率为2%6%,感染率在10%30%,发病率严重的鸭场甚至能够达到50%,发病鸭由于喙舌发育不良而造成饮食困难,从而造成严重消瘦,体重比正常鸭降低20%30%,由于生产性能的下降,严重威胁着肉鸭养殖业的经济效益。研究方法和结果:本研究通过琼脂扩散试验,PCR扩增试验及测序方法从泰安某病鸭场分离到1株鸭源新型鹅细小病毒。通过同源性分析,发现本试验获得的SD01毒株与国内外15个参考毒株的同源性在79.6%-98.5%之间。通过血凝试验,发现鸭源新型鹅细小病毒不能够凝集鸡、鸭和鹅的红细胞。由于检测鸭源新型鹅细小病毒的方法目前还不够完善,为提高其准确性和效率,本研究选择鸭源新型鹅细小病毒N-GPV基因作为目标基因,以阳性重组质粒作标准曲线,构建鸭源新型鹅细小病毒的荧光定量PCR检测方法。结果发现荧光定量PCR的溶解曲线均出现了窄而尖的单峰,说明引物具有特异性,可用于荧光定量PCR的扩增。N-GPV表现出良好的线性关系,相关系数R2=0.993,扩增曲线呈现出良好的S型曲线,通过荧光定量PCR的特异性试验发现其具有特异性,只能扩增N-GPV基因。通过人工感染雏鸭试验来评估感染鸭源新型鹅细小病毒后对各个组织造成的病理变化以及研究荧光定量PCR的应用效果。研究结果发现,鸭源新型鹅细小病毒主要造成肠绒毛受损较严重,这可能与鸭的腹泻有关,另外研究还发现鸭源新型鹅细小病毒能够造成肝脏的肝细胞变形坏死,肾脏的肾小管空泡化。结论及应用前景:利用本研究建立的荧光定量PCR方法能够快速准确的检测鸭源鹅细小病毒,可应用于临床检测。

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文章来源

类型: 硕士论文

作者: 张欣欣

导师: 常维山

关键词: 鸭源新型鹅细小病毒,琼脂扩散试验,血凝试验,分离鉴定,荧光定量

来源: 山东农业大学

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 山东农业大学

分类号: S852.65

总页数: 45

文件大小: 2421K

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