禽脑脊髓炎病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

禽脑脊髓炎病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

论文摘要

利用禽脑脊髓炎病毒(Avian encephalomyelitis virus,AEV)YBF02株VP1基因序列设计一对特异性引物,通过对反应体系条件的确定和阳性质粒标准曲线的建立,建立了用于快速检测AEV含量的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR。结果显示:该方法能特异性地检测AEV YBF02株,且与其他禽类病毒无交叉反应;敏感性试验表明,该方法最低能检出10拷贝的AEV RNA模板,为普通PCR的100倍;使用该方法和鸡胚半数感染量(EID50)法对样品进行检测,二者具有良好的线性关系,且重复性试验的变异系数均小于4%。研究表明,建立的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR敏感性高、特异性强、重复性好,为AEV含量的快速检测提供了一种新的技术手段。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 病毒株及样品
  •   1.2 主要试剂和仪器
  •   1.3 引物设计
  •   1.4 重组质粒的构建
  •   1.5 荧光定量RT-PCR方法的建立
  •     1.5.1 反应体系和条件
  •     1.5.2 阳性质粒标准曲线的建立
  •     1.5.3 特异性试验
  •     1.5.4 敏感性试验
  •     1.5.5 重复性试验
  •     1.5.6 CT值与EID50相关性的建立
  •     1.5.7 样品的检测
  • 2 结果与分析
  •   2.1 阳性质粒标准曲线建立
  •   2.2 特异性试验
  •   2.3 敏感性试验
  •   2.4 重复性试验
  •   2.5 Ct值与EID50相关性的建立
  •   2.6 样品检测
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 薄智勇,楚电峰,刘秋云,刘文亭,李智超,姚丹,冯嫣芳

    关键词: 荧光定量,病毒含量

    来源: 中国家禽 2019年22期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 青岛易邦生物工程有限公司

    基金: 青岛市动物保健品行业智库联合基金二期(18-6-3-1-jch)

    分类号: S852.65

    DOI: 10.16372/j.issn.1004-6364.2019.22.005

    页码: 22-25

    总页数: 4

    文件大小: 2262K

    下载量: 45

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