LHRH介导的TAT蛋白核心肽PTD的制备及跨膜研究

论文摘要

为了研究促黄体激素释放激素（LHRH）介导的TAT蛋白核心肽PTD的跨膜作用,测定目的蛋白的转导效率,试验以pET28a-PTD-GFP质粒为模板,设计含LHRH基因序列的特异性PCR引物,经PCR扩增后双酶切,并克隆到原核表达载体pET28a中,构建重组质粒并在E.coli BL21（DE3）感受态细胞中诱导表达,超声破碎后进行硫酸铵梯度沉淀,取上清液用Phenyl-HP疏水层析柱和Q阴离子交换层析柱纯化,将纯化后的目的蛋白加到体外培养的HeLa细胞中,观察转导情况,分析目的蛋白浓度对转导效率的影响。结果表明:PCR扩增得到目的基因LHRH-PTD-GFP,并成功构建出重组质粒pET28a-LHRH-PTD-GFP,在E.coli BL21（DE3）感受态细胞中成功诱导表达出目的蛋白,经Phenyl-HP疏水层析柱和Q阴离子交换层析柱成功纯化出目的蛋白,在荧光显微镜下HeLa细胞内显现明显的绿色荧光,经分析转导效率与目的蛋白浓度之间呈正相关,回归系数为0.096 6,决定系数（R2）为0.937 8。说明LHRH介导的TAT蛋白核心肽PTD具有很好的跨膜特性,转导效率对目的蛋白浓度具有依赖性,在一定浓度范围内随着目的蛋白浓度的增加转导效率增大。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 马洪圆,岳玉环,李泽鸿,张国利,田园,吴广谋,刘雨玲,余晓颖,杨雯棋,陈云雨

关键词: 核心肽,转促黄体激素释放激素,目的蛋白,转导效率,绿色荧光,跨膜

来源: 黑龙江畜牧兽医 2019年01期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 吉林农业大学生命科学学院,军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所,皖南医学院药学院新药筛选与评价中心

基金: 国家重点研发计划项目(2016YFD0501002),安徽省自然科学基金青年科学基金项目(1808085QH265)

分类号: Q51

DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2018.03.0250

页码: 8-12+175

总页数: 6

文件大小: 342K

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标签：核心肽论文;  转促黄体激素释放激素论文;  目的蛋白论文;  转导效率论文;  绿色荧光论文;  跨膜论文;