导读:本文包含了条件基因打靶论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:基因,条件,特异性,载体,蛋白,家蚕,位点。
条件基因打靶论文文献综述
龙定沛,郝占章,刘丹丹,代静,向仲怀[1]（2018）在《家蚕条件基因打靶技术的建立及应用研究进展》一文中研究指出条件基因打靶技术是通过借助位点特异性重组酶和预先引入宿主基因组的重组酶特异识别位点,在宿主特定发育阶段的组织或细胞中实现目标基因时空特异性定点插入、删除、替换和倒位等突变操作的技术。目前条件基因打靶技术已被广泛应用于拟南芥(Arabidopsis thaliana)、水稻(Oryza sativa)、小鼠(Mus musculus)和果蝇(Drosophila melanogaster)等高等真核模式生物的功能基因研究,并逐渐成为转基因动植物研究领域进行基因操作的强有力工具。近年来,国内外多个研究机构系统地开展了家蚕(Bombyx mori)条件基因打靶技术的开发研究,目前已经建立了较为完善的基于多种不同位点特异性重组系统的家蚕条件基因打靶技术平台。本文较为全面地介绍目前最为常用的位点特异性重组系统的组成和作用原理,系统概述基于位点特异性重组系统的家蚕条件基因打靶策略及其应用,并对家蚕条件基因打靶技术存在的主要问题和发展趋势进行讨论。(本文来源于《蚕业科学》期刊2018年01期）
王越,金镇,孙磊,郑晋华[2]（2015）在《小鼠性激素结合球蛋白条件基因打靶载体的构建》一文中研究指出目的构建小鼠性激素结合球蛋白(Shbg)条件基因打靶载体。方法运用ET克隆的方法构建Shbg基因第4-7号外显子两侧插入loxp位点的条件性剔除载体。首先以BAC DNA为模板克隆出Shbg及其上、下游基因并打靶质粒载体(p BR322-MKAB),利用该质粒和BAC克隆,通过同源重组方式,获得套取质粒(p BR322-Shbg-Re);再分别以PL452及PL451为模板扩增出含Neo片段,经过再一轮的Red/ET重组成功实现条件性基因敲除打靶载体(p BR322-MK-SHBG-cko)的构建。结果经多个限制性内切酶酶切鉴定和测序证实,构建的p BR322-MK-AB、p BR322-Shbg-Re、SHBG-Ln重组质粒和Shbg条件基因打靶载体(p BR322-MK-SHBG-cko)结构正确,与设计相符。结论成功构建了小鼠Shbg条件基因打靶载体,为后续Shbg基因条件敲除小鼠模型的构建奠定了基础。(本文来源于《中国医科大学学报》期刊2015年03期）
滕艳,杨晓[3]（2011）在《条件基因打靶技术在组织稳态研究中的应用》一文中研究指出基因打靶技术作为最有效的定向修饰小鼠基因组的技术手段在揭示基因的生理功能、研究人类疾病的遗传机制以及寻找新的药物靶标的过程中发挥重要的作用.基于Cre-LoxP定位重组系统的条件基因打靶技术的发展使得基因失活可以限制在特定发育阶段的特定组织或细胞内,这一优势使得条件基因打靶技术成为解析哺乳动物基因功能的主要研究手段.本文将主要介绍军事医学科学院在建立小鼠条件基因打靶技术平台,以及应用这一技术研究TGF-β/Smad等重要信号通路在维持组织稳态和抑制疾病的生理功能和机制方面的主要进展.(本文来源于《中国科学:生命科学》期刊2011年10期）
林福玉,杨晓[4]（2011）在《条件基因打靶研究存在的主要问题及对策》一文中研究指出基于Cre-loxP等位点特异性重组系统的条件基因打靶技术在解析基因功能和制备疾病小鼠模型方面发挥着极其重要的作用。但包括Cre重组酶转基因的表达模式不理想、重组效率存在差异、Cre重组酶的毒性等在内的Cre-loxP重组系统相关的缺陷以及条件基因打靶技术本身存在的问题,如遗传背景、育种策略、实验对照、基因代偿等方面的影响往往被忽略,严重影响基因功能和小鼠表型解析的准确性。针对这些问题,精细调控实现Cre重组酶的理想时空特异性表达、详尽地分析Cre重组酶的重组效率、降低Cre重组酶的毒性、遗传背景单一化、优化育种策略、设立严格实验对照、多基因联合条件基因打靶等诸多解决方案应予以采纳。(本文来源于《遗传》期刊2011年05期）
康赟,林福玉,滕艳,侯宁,程萱[5]（2010）在《小鼠Bpi条件基因打靶载体的构建和鉴定》一文中研究指出目的构建小鼠Bpi条件基因打靶载体,为建立Bpi条件基因打靶小鼠模型和深入研究Bpi基因功能奠定基础。方法采用Cre/LoxP系统,选择小鼠Bpi基因第2、3外显子作为条件性敲除的目的片段,并在其两侧插入LoxP位点;运用LA-PCR技术,以129品系小鼠ES细胞基因组DNA为模板分步扩增包括Bpi第2、3外显子(中间同源臂)和上游同源臂在内的3.1 kb基因片段以及下游同源臂4.9 kb基因片段;构建pBSKⅡ-5SLoxP和ploxPFRTNeo-3L重组质粒,将前者酶切产物(3.1 kb)与酶切后的ploxPFRTNeo-3L质粒相连获得Bpi条件基因打靶载体。结果经多个限制性内切酶酶切鉴定和测序证实,构建的pBSKⅡ-5SLoxP、ploxPFRTNeo-3L重组质粒和Bpi条件基因打靶载体结构正确,与设计相符。结论成功构建了小鼠Bpi条件基因打靶载体。(本文来源于《实验动物科学》期刊2010年04期）
周光迪[6]（2009）在《利用条件基因打靶技术研究新型锌指蛋白ZBTB20对软骨发育的调控作用》一文中研究指出锌指蛋白在个体的生长发育、细胞的增殖和分化、凋亡等生命活动过程中发挥重要作用。锌指蛋白ZBTB20是从人树突状细胞中发现的BTB/POZ锌指蛋白家族新成员,广泛表达于脑、脾脏、胰腺和肝脏等正常组织,但其生物学功能尚不清楚。本课题组利用基因打靶技术,成功建立了ZBTB20全身性基因敲除小鼠模型,发现其存在生长发育迟缓等严重表型,提示ZBTB20对个体生长发育具有重要调节作用,其机理有待深入研究。为此,本课题首先制备了ZBTB20的单克隆抗体,建立了检测人和鼠ZBTB20蛋白敏感度高、特异性强和稳定性好的检测分析方法。采用多肽抗原免疫和骨髓瘤细胞融合技术,通过四轮亚克隆筛选,最终得到一株稳定分泌ZBTB20单克隆抗体的杂交瘤细胞株;通过制备杂交瘤腹水、亲和层析柱纯化,成功制备了可用于ELISA、免疫组化、免疫印迹和免疫沉淀检测的抗ZBTB20单克隆抗体,命名为9A10。和已有的ZBTB20多克隆抗体相比,该单抗具有更高的检测灵敏度、特异性和稳定性,为深入研究ZBTB20的体内生物学功能提供了技术支持。利用该单克隆抗体,我们优化了免疫组化检测方法,并用此方法检测了ZBTB20在多种组织器官中的表达,发现ZBTB20在小鼠软骨细胞中特异性高表达,提示ZBTB20可能在软骨发育中起到调控作用;进一步通过定点交配取得野生型小鼠胚胎期及出生后各发育阶段腿骨标本并制样,对软骨细胞中ZBTB20的时空表达特征进行了系统分析。结果表明,ZBTB20于胚胎软骨发育的E14.5天开始表达,并特异表达于软骨生长板的肥大区。为研究ZBTB20在软骨发育过程中的调控作用,我们利用Cre/LoxP条件基因打靶技术,建立了ZBTB20的软骨细胞特异性基因敲除小鼠模型, Alcian Blue-Fast Red染色分析显示,软骨细胞特异性敲除ZBTB20导致软骨生长板中软骨细胞过度增生、形态结构发生紊乱,初生期软骨生长板肥大区变厚,成年后肥大区由规则板状结构变为不规则团状结构。上述结果表明,ZBTB20是软骨生长板肥大区特异表达的锌指蛋白,对软骨发育具有重要调节作用。(本文来源于《第二军医大学》期刊2009-05-01）
张鸿声[7]（2009）在《NPM条件基因打靶载体的构建及中靶ES细胞的筛选和鉴定》一文中研究指出条件性基因打靶是在常规基因打靶的基础上,结合重组酶介导的位点特异性重组技术发展而来的一种基因打靶技术。它可以将对特定基因的修饰限制于特定类型的细胞、组织甚至小鼠发育的特定阶段。基于Cre/LoxP系统的条件基因打靶,通常借助同源重组将两个LoxP序列置于靶基因重要功能域两侧的内含子中,希望获得表型正常的条件基因打靶小鼠;而后将该小鼠与细胞或组织特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠杂交后,可望获得组织特异性基因剔除小鼠。其中,Cre重组酶只在特定的细胞或组织中表达,并且Cre/LoxP位点依赖的重组会将该细胞中的靶基因剔除,而其它类型细胞中由于没有Cre重组酶的表达,靶基因不会被删除而仍然保持原有的表达模式。这样,就为我们研究某些删除后导致胚胎期致死的基因功能提供了很好的研究工具。NPM是一种多功能蛋白,主要位于核仁区,能穿梭于核仁、核质和胞质之间,参与核糖体前体运输和合成及中心体的复制等过程,从而调控细胞的周期进程与生物机体发育。人类NPM基因位于染色体5q35,全长约23Kb,包含12个外显子。整个蛋白包含叁个功能域:寡聚化分子伴侣功能域、组蛋白结合功能域和核酸结合功能域,并且具有一系列的定位信号序列(如核输出信号、核定位信号以及核仁定位信号等)及磷酸化位点。研究结果表明,在血液肿瘤中NPM经常发生突变,暗示它可能是一种肿瘤抑制基因。也有研究发现它在另外一些肿瘤细胞(如胃癌、结肠癌、卵巢癌、前列腺癌和肝癌)中过表达,也暗示NPM可能是一种致癌基因。究竟NPM在这些肿瘤发生发展过程中发挥了怎么样的作用还有待进一步的研究。鉴于NPM完全基因剔除小鼠的胚胎在发育中期死亡。为了进一步研究NPM在成体各组织器官及肿瘤发生发展中的生物学功能,我们试图建立NPM条件基因剔除小鼠模型,而建立小鼠模型的首要任务就是构建NPM条件基因剔除载体,基于NPM的N端和中间区域的重要性以及实验操作的可行性,我们将两个LoxP序列分别置于NPM基因组序列N端和中间功能域两侧内含子中。首先,我们从小鼠基因组BAC质粒中克隆了一段包含NPM全部基因组序列在内的13Kb的片段,连接至pBS KS [pBluescript II KS(+)]载体上,命名为pBSKS-NPM。然后我们再次从该段序列上克隆了大小为8 kb和1.8 kb的两条片段,分别作为NPM条件基因打靶载体的5’和3’同源臂,也分别连接到pBS KS载体上,选取插入方向正确的克隆。之后再将3’同源臂克隆到pGEX-KG载体上,并在此载体上通过Kpn I单酶切位点在第6个内含子处插入LoxP3。最后把两条同源臂分别克隆至通用打靶载体pLoxP I上,形成NPM基因第2-6个外显子被LoxP序列锚定的条件基因打靶载体,命名为pLoxP-NPM。PCR筛选、酶切鉴定和序列测定结果证明NPM条件基因打靶载体与预期结构一致。最后,将打靶载体Not I线性化后电击转染ES细胞,在含G418和Gancyclovir的选择性培养基中筛选7天后挑取抗性克隆53个。经PCR初步鉴定21个克隆为阳性克隆,对这些阳性克隆需进一步进行扩增后提取基因组DNA用Hind III酶切,用打靶载体的3’端外侧探针进行Southern blot,野生型将出现13kb条带,而NPM中靶等位基因由于插入NPM内含子中LoxP序列携带一个Hind III位点,中靶细胞将出现13kb和7232bp两条带。中靶ES细胞的成功获得将为进一步建立NPM组织特异性剔除小鼠模型奠定了基础。(本文来源于《福建农林大学》期刊2009-04-01）
刘英,刘运强,周钦,陶大昌,彭艳[8]（2007）在《小鼠锌指蛋白基因Znf230条件基因打靶载体的构建》一文中研究指出目的构建用于小鼠锌指蛋白基因Znf230条件基因打靶的载体,为产生Znf230基因敲除的小鼠模型准备条件。方法设计和合成引物,经PCR从小鼠的基因组中扩增出5′同源臂、3′同源臂及锚定序列,长度分别为4,4,1kb的片段,反向插入pBS载体的neo基因的两侧,从而构建小鼠Znf230条件基因打靶载体Znf230-pBS(5)。结果经过限制性内切酶及DNA测序鉴定,证实该条件基因打靶载体含有的同源序列与Genebank公布的基因序列一致,表明载体构建成功。结论PCR技术和定向克隆技术是构建条件基因打靶载体简单而可靠的方法。运用该技术可获得小鼠锌指蛋白基因Znf230的条件基因打靶载体。(本文来源于《福建医科大学学报》期刊2007年02期）
周江,程萱,孙彦洵,黄培堂,黄翠芬[9]（2001）在《基于Cre/LoxP系统的Smad2条件基因打靶小鼠的建立》一文中研究指出Ｓｍａｄｓ家族是转化生长因子ＴＧＦ－β信号转导途径中一个重要的新基因家族．ＳＭＡＤ２属于受体激活的ＳＭＡＤｓ．Ｓｍａｄ２基因在多种肿瘤中发生突变，是一种可能的肿瘤抑制基因．Ｓｍａｄ２基因完全剔除导致小鼠在胚胎期６、５ ｄ死亡．为了研究Ｓｍａｄ２在脊椎动物成体各组织器官及肿瘤发生中的可能作用，利用Ｃｒｅ／ＬｏｘＰ系统构建了Ｓｍａｄ２条件基因打靶载体，将两个方向相同的ＬｏｘＰ序列置于编码ＳＭＡＤ２蛋白Ｃ末端功能域序列两侧的内含子中，并在组成型表达Ｃｒｅ重组酶的大肠杆菌中检测了ＬｏｘＰ位点的功能；用打靶载体电击转染小鼠胚胎干细胞，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交筛选到３株发生正确同源重组的中靶ＥＳ细胞克隆；通过囊胚显微注射将中靶ＥＳ细胞导入受体小鼠囊胚腔，获得了ＥＳ细胞种系嵌合体；对高嵌合度小鼠与Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ的子代小鼠进行基因型鉴定，成功地获得了Ｓｍａｄ２条件基因打靶小鼠．(本文来源于《中国科学(C辑:生命科学)》期刊2001年04期）
条件基因打靶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的构建小鼠性激素结合球蛋白(Shbg)条件基因打靶载体。方法运用ET克隆的方法构建Shbg基因第4-7号外显子两侧插入loxp位点的条件性剔除载体。首先以BAC DNA为模板克隆出Shbg及其上、下游基因并打靶质粒载体(p BR322-MKAB),利用该质粒和BAC克隆,通过同源重组方式,获得套取质粒(p BR322-Shbg-Re);再分别以PL452及PL451为模板扩增出含Neo片段,经过再一轮的Red/ET重组成功实现条件性基因敲除打靶载体(p BR322-MK-SHBG-cko)的构建。结果经多个限制性内切酶酶切鉴定和测序证实,构建的p BR322-MK-AB、p BR322-Shbg-Re、SHBG-Ln重组质粒和Shbg条件基因打靶载体(p BR322-MK-SHBG-cko)结构正确,与设计相符。结论成功构建了小鼠Shbg条件基因打靶载体,为后续Shbg基因条件敲除小鼠模型的构建奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
条件基因打靶论文参考文献
[1].龙定沛,郝占章,刘丹丹,代静,向仲怀.家蚕条件基因打靶技术的建立及应用研究进展[J].蚕业科学.2018
[2].王越,金镇,孙磊,郑晋华.小鼠性激素结合球蛋白条件基因打靶载体的构建[J].中国医科大学学报.2015
[3].滕艳,杨晓.条件基因打靶技术在组织稳态研究中的应用[J].中国科学:生命科学.2011
[4].林福玉,杨晓.条件基因打靶研究存在的主要问题及对策[J].遗传.2011
[5].康赟,林福玉,滕艳,侯宁,程萱.小鼠Bpi条件基因打靶载体的构建和鉴定[J].实验动物科学.2010
[6].周光迪.利用条件基因打靶技术研究新型锌指蛋白ZBTB20对软骨发育的调控作用[D].第二军医大学.2009
[7].张鸿声.NPM条件基因打靶载体的构建及中靶ES细胞的筛选和鉴定[D].福建农林大学.2009
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[9].周江,程萱,孙彦洵,黄培堂,黄翠芬.基于Cre/LoxP系统的Smad2条件基因打靶小鼠的建立[J].中国科学(C辑:生命科学).2001
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