导读:本文包含了胆固醇流出论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:胆固醇,受体,动脉,脂蛋白,蛋白,细胞,粥样。
胆固醇流出论文文献综述
许晓婷[1]（2019）在《柚皮素在调节巨噬细胞内质网应激ATF6活性以及胆固醇流出中作用的研究》一文中研究指出目的:柚皮素可改善脂蛋白谱,防止心血管疾病。ATF6是一种内质网应激传感器,与胆固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)具有相同的激活过程。临床数据显示ATF6水平与血浆胆固醇水平相关。本研究主要分析柚皮素是否参与调节胆固醇流出并测试柚皮素相关作用与内质网应激ATF6的联系。方法:1、对小鼠巨噬细胞(RAW264.7)和单核细胞(THP-1)进行体外培养,以80μg/ml的oxLDL或荧光标记胆固醇诱导,并以不同浓度(10,25,50 μM)的柚皮素处理RAW264.7和THP-1细胞,用荧光定量酶标仪检测胆固醇流出情况,荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)和Western blot检测相关蛋白质的表达情况;柚皮素作用于经内质网应激诱导剂衣霉素(TM),抑制剂4-苯基丁酸(PBA)或ATF6特异性siRNA处理的RAW264.7和THP-1细胞,Western blot检测相关蛋白质的表达情况;柚皮素作用于经PI3K抑制剂LY294002处理的RAW264.7细胞,Western blot检测相关蛋白质的表达情况。2、将8周龄的ApoE-A小鼠随机分为四组,并进行如下处理:正常饮食组(ND)、高脂模型组(HFD)、柚皮素组(HFD+柚皮素 100mg/kg/day)、TM 组(HFD+柚皮素 100mg/kg/day+TM,5 mg/kg/day)。柚皮素通过灌胃给药,TM进行腹腔注射,处理结束后分别用荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)和Western blot分别检测相关蛋白质的mRNA和蛋白含量。并对小鼠心脏进行病理分析。结果:1、结果显示柚皮素增强apoA-I和rHDL通道介导的胆固醇流出并且使RAW264.7巨噬细胞中ABCA1、ABCG1和LXRα基因表达上调。柚皮素抑制游离ATF6向核内转移并抑制靶基因GRP78和XBP-1的表达;最终表明柚皮素促进胆固醇流出的功能是通过抑制内质网应激ATF6途径介导的。柚皮素可促进Akt磷酸化,PI3K抑制剂LY294002处理增加了核内ATF6表达并减少由柚皮素增强的胆固醇流出和ABCA1表达。2、结果显示经柚皮素处理的HFD-ApoE-/-小鼠的原代腹腔巨噬细胞胆固醇流出能力比仅HFD的小鼠增加了 1.5倍以上。TM处理又显着降低了这种胆固醇流出能力的增加。柚皮素可降低主动脉和腹腔巨噬细胞的核内ATF6、GRP78和XBP-1表达水平,并减少主动脉根部的动脉粥样硬化病变,这一作用可被TM逆转。这些证实了内质网应激ATF6与柚皮素促进胆固醇流出的作用密切联系。结论:柚皮素可以调节胆固醇流出,并且调节是由内质网应激ATF6分支和PI3K/Akt通路介导的。(本文来源于《贵州医科大学》期刊2019-05-01）
曾召林[2]（2019）在《FGF21上调RACK1诱导自噬介导胆固醇流出抗动脉粥样硬化》一文中研究指出脂代谢紊乱导致大量脂质在大中动脉中沉积是动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)的主要病理生理学基础,而巨噬细胞摄取过量的修饰脂蛋白,导致细胞内总胆固醇(Total cholesterol,TC)和甘油叁酯(Triglyceride,TG)以脂滴形式积聚并形成泡沫细胞,是发生AS的重要过程。成纤维细胞生长因子21(Fibroblast growth factor21,FGF21)是一种内分泌因子,可降低血浆TC、TG、低密度脂蛋白胆固醇(Low-density lipoprotein cholesterol,LDL-c),并提高高密度脂蛋白胆固醇(High density lipoprotein cholesterol,HDL-c)水平,因而具有抗AS潜力。本课题组前期研究发现FGF21可以减少泡沫细胞中的脂质蓄积,然而,潜在的机制仍不清楚。脂质蓄积是泡沫细胞形成的核心,泡沫细胞的脂滴代谢和胆固醇外流将减少泡沫细胞的形成。因此,深入探讨FGF21调节泡沫细胞脂质代谢的机制对AS的防治具有重要意义。自噬可以通过酸性脂肪酶降解脂滴,促进胆固醇流出,从而维持脂质代谢平衡;而自噬受损将抑制胆固醇逆转运,促进动脉粥样硬化的发生和发展。因此,本研究的目的是探讨FGF21是否可以通过调节自噬影响巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇代谢抗AS,并探讨其潜在机制。第一部分:FGF21对高脂饮食apo E~(-/-)小鼠AS病变的影响【目的】观察FGF21对高脂饮食apo E~(-/-)小鼠AS病变的影响。【方法】60只成年雄性apo E~(-/-)小鼠随机分成4组:(1)对照组:普通正常饮食(Normal diet,ND);(2)AS1:高脂饮食组,喂食高脂饮食(High fat diet,HFD);(3)AS2:HFD+腹腔注射(Intraperitoneal,ip)与AS3等量的生理盐水(Normal saline,NS);(4)AS3:HFD+FGF21 ip(10mg/kg.d)。每周记录体重和食物摄入量。注射12周后,在戊巴比妥诱导的全身麻醉下处死小鼠并收集血液,检测TC、TG、HDL-c和LDL-c的血浆浓度。苏丹IV染色观察主动脉AS病变。取小鼠主动脉窦作冰冻切片,苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)和油红O染色检测主动脉窦AS病变情况。通过上述动物实验明确FGF21对HFD apo E~(-/-)小鼠血脂谱及AS病变的影响。【结果】与对照组相比,AS1、AS2组小鼠血浆TG、TC和LDL-c水平明显升高,HDL-c明显降低(P<0.05),HE、油红O染色显示小鼠主动脉窦有明显的AS斑块,苏丹IV染色可见主动脉有明显的脂质沉积,提示造模成功,并且腹腔给药途径(NS)对AS病变无明显作用(AS2与AS1比较)。HFD+FGF21组与HFD组相比,其TG、TC和LDL-c较低,HDL-c较高,AS病变面积减少,并且体重低于HFD组。【结论】FGF21可改善HFD apo E~(-/-)小鼠脂质谱并抑制apo E~(-/-)小鼠AS病变。第二部分:FGF21抗动脉粥样硬化的分子机制【目的】探讨FGF21抗AS病变的分子机制。【方法】首先明确FGF21抗AS的作用是否依赖于调节自噬的作用:90只apo E~(-/-)小鼠分为6组:(1)对照组:ND;(2)AS1:HFD;(3)AS2:HFD+NS ip;(4)AS3:HFD+FGF21 ip;(5)AS4:HFD+3-MA ip(30mg/kg.d);(6)AS5:HFD+FGF21 ip+3-MA ip。通过Western Blot检测自噬相关蛋白,HE和油红O染色检测小鼠AS病变。进而在细胞水平观察FGF21对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞自噬(流)的影响,实验分为四组:(1)对照组;(2)Baf A1组(20n M);(3)FGF21组;(4)FGF21+Baf A1组。采用Western Blot、激光共聚焦检测GFP-LC3、MDC染色和电镜检测分析FGF21对自噬(流)的影响。进一步分析FGF21对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响,FGF21以不同浓度(0-400ng/ml)和不同时间(0-48h)处理THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞后通过油红O染色和3H胆固醇标记分析脂质蓄积和胆固醇流出情况。为明确FGF21促进胆固醇流出是否依赖于其调节自噬的作用,采用HPLC、油红O染色和液体闪烁计数测量3H胆固醇含量分析3-MA和ATG5 si RNA抑制自噬后脂质蓄积和胆固醇流出的情况。进一步探讨FGF21上调自噬促进胆固醇流出抗AS的作用是否与蛋白激酶C受体1(Receptor for activated C kinase 1,RACK1)有关。首先通过免疫组化、RT-PCR和Western Blot检测对照组、HFD组、HFD+NS ip组和HFD+FGF21 ip组apo E~(-/-)小鼠主动脉斑块中RACK1的表达。然后,我们构建了RACK1 sh RNA慢病毒给予HFD+sh RNA组小鼠尾静脉注射,实验结束后通过Western Blot分析各组小鼠自噬水平,HE染色、油红O染色分析小鼠AS病变情况。然后,在THP-1细胞中转染RACK1 si RNA分析RACK1敲低后对自噬(流)和胆固醇流出的影响,通过Western Blot、激光共聚焦检测GFP-LC3、MDC染色和透射电镜检测自噬(流),HPLC、油红O染色、液体闪烁计数测量培养基和细胞中的3H胆固醇含量分析泡沫细胞中脂质蓄积和胆固醇流出情况。最后检测FGF21对AMPK磷酸化和ABCA1表达的影响,并明确其作用是否与调节RACK1有关。【结果】FGF21 ip(AS3)组与HFD组(AS1)比较LC3 Ⅱ/Ⅰ比率、Beclin1表达增加,P62表达减少;HE和油红O染色结果显示FGF21 ip组(AS3)AS病变程度低于HFD组(AS1)。3-MA+FGF21 ip(AS5)与FGF21 ip组(AS3)比较LC3 Ⅱ/Ⅰ比率、Beclin1表达水平均减少,P62表达水平增加;而HE和油红O染色结果显示自噬抑制剂3-MA+FGF21 ip组(AS5)与FGF21 ip组(AS3)相比其AS病变程度明显加重。综合以上结果表明:FGF21可通过上调HFD apo E~(-/-)自噬水平抑制AS,自噬受损削弱FGF21对AS的抑制作用。GFP-LC3、MDC染色和透射电镜测定结果显示FGF21可诱导泡沫细胞中自噬体形成。泡沫细胞与巴弗洛霉素A1共孵育时,LC3-I至LC3-II转化率相对于对照组显着增加。相对于仅用巴弗洛霉素A1或FGF21孵育组,巴弗洛霉素A1+FGF21组的LC3-I至LC3-II转化率进一步增加。因此,这些结果表明FGF21诱导泡沫细胞中的自噬流。HPLC测定结果显示,与对照组相比,200ng/ml和400ng/ml FGF21处理24小时以及200ng/ml FGF21处理24 h和48 h显着降低TC、FC和CE水平。同时,油红O染色和3H胆固醇测定结果显示FGF21促进泡沫细胞胆固醇流出、抑制脂质蓄积。3-MA或ATG5 si RNA干预处理可显着减弱FGF21促进LC3-I向LC3-II转化的作用,并相应增加P62表达。自噬体形成也被3-MA或ATG5si RNA抑制。HPLC检测表明抑制自噬明显减弱FGF21降低TC、FC和CE的作用。油红O染色和胆固醇流出检测结果显示抑制自噬减弱FGF21促进胆固醇流出并减少泡沫细胞中脂质蓄积的作用。与对照组和HFD组相比FGF21腹腔注射的HFD apo E~(-/-)小鼠RACK1蛋白和m RNA水平显着增加。与HFD+FGF21 ip apo E~(-/-)小鼠相比,HFD+FGF21ip+RACK1敲低组其LC Ⅱ/Ⅰ比率和Beclin1表达水平降低,P62表达水平增加;且与HFD+FGF21 ip apo E~(-/-)小鼠相比,RACK1敲低组其AS病变加重。在体外实验中,RACK1 si RNA抑制LC3-I向LC3-II的转化以及beclin-1的表达,同时上调P62表达水平,抑制自噬体形成。此外,RACK1敲低明显减弱FGF21对TC、FC和CE水平的降低作用,以及FGF21促进泡沫细胞中胆固醇流出的作用。Western Blot结果显示FGF21可以活化AMPK增加ABCA1的表达,并且当转染RACK1 si RNA后明显减弱FGF21促进AMPK磷酸化和ABAC1表达的作用。上述结果表明,FGF21上调自噬及促进泡沫细胞中胆固醇流出的作用部分依赖于RACK1。【结论】FGF21通过上调RACK1促进自噬(流)及泡沫细胞中胆固醇流出抑制apo E~(-/-)小鼠AS病变。(本文来源于《南华大学》期刊2019-05-01）
安童,张小奕,李红霞,满永,窦琳[3]（2019）在《G蛋白偶联受体120激动剂促进巨噬细胞胆固醇流出的研究》一文中研究指出目的:探讨G蛋白偶联受体120(GPR120)在巨噬细胞胆固醇流出中的作用及机制。方法:培养Raw264.7巨噬细胞,以50-200μmol/L的GPR120激动剂GW9508处理Raw264.7细胞18h。NBD-胆固醇负载法检测细胞胆固醇的流出率;MTS方法检测细胞的存活率;定量PCR和Western blot方法检测胆固醇流出相关转运体ABCA1、ABCG1和SR-B1的mRNA及蛋白表达水平;定量PCR检测核受体LXRα、LXRβ和PPARα、PPARγ的mRNA水平。结果:与对照组相比,100、150和200μmol/L的GW9508均提高Raw264.7细胞NBD-胆固醇流出率,分别提高了8%、10%和18%;ABCA1的蛋白水平分别上调了1.4倍、1.8倍和4.8倍, ABCG1的蛋白水平分别上调了1.3倍、3.2倍和5.1倍,但是不影响SR-B1的蛋白水平;而且,100和200μmol/L的GW9508分别上调ABCA1的mRNA水平3.6倍和6.8倍,上调ABCG1的mRNA水平1.6倍和3.3倍;同时,LXRα的mRNA水平也分别上调了0.6倍和1.25倍,且差异有统计学意义;但是不影响SR-B1及LXRβ、PPARα和PPARγ的mRNA水平。另外,50-200μmol/L的GW9508均不影响Raw264.7细胞的存活率。结论:GPR120通过LXRα上调ABCA1和ABCG1的表达而促进Raw264.7巨噬细胞的胆固醇流出。(本文来源于《心肺血管病杂志》期刊2019年02期）
赵胜娟,向进乐,陈树兴,费鹏,徐云凤[4]（2019）在《石榴皮多酚对胆固醇流出及相关蛋白表达的影响》一文中研究指出利用Raw264.7巨噬细胞源性泡沫细胞模型,阐明石榴皮多酚对高密度脂蛋白(High density lipoprotein,HDL)介导Raw264.7泡沫细胞胆固醇流出的调控作用,并采用蛋白质免疫印迹法(Western blotting,WB),分析石榴皮多酚对巨噬细胞胆固醇流出相关蛋白清道夫受体B1(Scavenger receptor B1,SR-B1)、酰基辅酶A1:胆固醇酰基转移酶(acyl-coenzyme A1:cholesterol acyltransferase,ACAT1)和胆固醇酯水解酶(cholesteryl ester hydrolase,nCEH)表达的影响,揭示细胞ACAT1和nCEH活性的变化。结果表明:石榴皮多酚可促进HDL介导的胆固醇流出,显着上调胆固醇流出相关蛋白SRB1的表达(P<0.05);此外,石榴皮多酚对nCEH和ACAT1蛋白表达影响不显着(P>0.05),但可显着降低ACAT1的酶活(P<0.05),提高nCEH酶活性(P<0.05),从而有利于细胞内胆固醇酯向游离胆固醇的转化和流出。(本文来源于《食品与机械》期刊2019年02期）
衣晓峰,生利健,李丽云[5]（2018）在《胆固醇流出可加速斑块缩小》一文中研究指出科技日报哈尔滨10月7日电 （通讯员衣晓峰 生利健 记者李丽云）利用声动力学疗法可以加强动脉粥样硬化斑块中胆固醇（脂质）的流出，从根源上促进粥样硬化斑块的缩减和消退。由哈尔滨医科大学第一医院心内科主任田野教授团队完成的一项科研成果，9月30日被最新一期国(本文来源于《科技日报》期刊2018-10-08）
邹瑾,赵真旺,吴洁,王刚,唐朝克[6]（2018）在《荷叶碱对巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达与胆固醇流出的影响及机制》一文中研究指出目的观察荷叶碱(NF)对巨噬细胞源性泡沫细胞ATP结合盒转运体A1(ABCA1)表达和胆固醇流出的影响及机制。方法体外培养人源性THP-1单核细胞,使用佛波酯(160 nmol/L)对其进行诱导,促进其分化为巨噬细胞,并在50 mg/L氧化低密度脂蛋白处理下,使其荷脂形成泡沫细胞,进行常规体外培养细胞。高效液相色谱检测泡沫细胞内脂质成分,液体闪烁计数仪检测泡沫细胞胆固醇流出的水平;实时荧光定量PCR和Western blot检测ABCA1表达情况。PPARγ抑制剂GW9662和LXRα抑制剂GGPP分别处理泡沫细胞,通过荧光定量PCR和Western blot检测荷叶碱对泡沫细胞PPARγ、LXRα和ABCA1表达的影响。结果荷叶碱显着减少泡沫细胞内的脂质成分,增加ABCA1表达与胆固醇流出水平。PPARγ抑制剂GW9662处理细胞后,显着降低了PPARγ、LXRα和ABCA1的表达。泡沫细胞在LXRα抑制剂GGPP处理下,也明显降低了LXRα和ABCA1表达。结论荷叶碱通过PPARγ/LXRα途径上调巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1的表达,促进胆固醇流出,减少细胞内脂质蓄积。(本文来源于《中国动脉硬化杂志》期刊2018年09期）
田苗,王凤荣,张冰,王帅,刘英楠[7]（2018）在《通脉降浊煎剂含药血清对泡沫细胞胆固醇流出率的影响》一文中研究指出目的研究通脉降浊煎剂含药血清(TDMS)对泡沫细胞胆固醇流出率的影响及可能机制。方法采用50mg/L ox-LDL诱导巨噬细胞48h,建立巨噬细胞源泡沫细胞模型,添加TDMS,将细胞分为对照组(正常巨噬细胞),ox-LDL组(50mg/L ox-LDL),β-环糊精(β-CD)组(50mg/L ox-LDL+10mmol/Lβ-CD),正常血清(CS)组(50mg/L ox-LDL+等体积正常血清),TDMS组(50mg/L oxLDL+5%TDMS)。检测细胞内总胆固醇、游离胆固醇含量和细胞胆固醇流出率;采用Western blot方法检测细胞内叁磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)蛋白表达;Real-time PCR方法检测细胞内ABCA1、miR-33a、miR-33bmRNA表达。结果与对照组比较,ox-LDL组细胞内总胆固醇、游离胆固醇含量和胆固醇流出率均增加(P<0.05,P<0.01),ABCA1mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.01),miR-33a和miR-33bmRNA表达水平均升高(P<0.01)。与ox-LDL组比较,β-CD组与TDMS组细胞内总胆固醇和游离胆固醇含量均下降,胆固醇流出率增大(P<0.05,P<0.01),ABCA1mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.01),细胞内miR-33a和miR-33bmRNA表达水平均降低(P<0.01)。结论 TDMS通过调节miR-33a/b和ABCA1表达,从而提高胆固醇流出率,降低泡沫细胞内胆固醇含量。(本文来源于《中国中西医结合杂志》期刊2018年09期）
李娆,朱利勇,李伟正,嵇光年,邱先杰[8]（2018）在《GLP-1对胆固醇流出的影响》一文中研究指出糖尿病及心血管疾病等代谢相关疾病是全球化公共健康问题,2014年Lancet发文指出中国糖尿病患者人数已达9800多万,成为主要公众健康威胁之一[1]。据世界卫生组织(World Health Organization,WHO)报道[2],心血管疾病造成的死亡占每年全球死亡人数的1/3,这些疾病带来了严峻的卫生经济负担。胆固醇是动物组织细胞不可缺少的重要物质,它不仅参与细胞膜的形成,也在代谢过程中起重要作用,与(本文来源于《中华肥胖与代谢病电子杂志》期刊2018年03期）
高嘉慧,莫中成,唐朝克[9]（2018）在《apoA-Ⅰ的α螺旋在胆固醇流出中的作用》一文中研究指出血浆载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)的水平与动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)性心血管疾病的风险呈负相关.ApoA-Ⅰ经载脂形成高密度脂蛋白(HDL),HDL通过促进胆固醇逆向转运(RCT),使细胞内的多余胆固醇流出.α螺旋是apoA-Ⅰ载脂的主要结构,在apoA-Ⅰ参与的胆固醇流出中具有重要作用.模拟α螺旋建立的apoA-Ⅰ模拟肽能通过不同方式发挥抗AS的作用.本文就α螺旋在胆固醇流出中的作用作一综述,以便进一步探索apoA-Ⅰ的结构对胆固醇流出的影响,为以apoA-Ⅰ为靶点防治AS提供理论基础.(本文来源于《生物化学与生物物理进展》期刊2018年06期）
曹海明,毛思颖,陈仁华,江巍[10]（2018）在《护心方对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出及ABCA1表达的影响》一文中研究指出目的观察护心方对THP-1细胞源性泡沫细胞Apo AI介导的胆固醇流出及ABCA1表达的影响。方法 THP-1细胞诱导分化成巨噬细胞后,在ox-LDL刺激48 h,使巨噬细胞转化为泡沫细胞,以护心方含药血清作用24 h。采用液体闪烁计数法观察细胞内胆固醇的流出,Western blot检测细胞ABCA1的蛋白表达水平,q PCR检测细胞ABCA1的mRNA表达水平。结果护心方含药血清可增加泡沫细胞胆固醇的流出且呈时间依赖性(P<0.05),同时能上调诱导后的泡沫细胞ABCA1蛋白水平(P<0.05),但对ABCA1 mRNA的表达水平无影响。结论护心方可通过提高泡沫细胞ABCA1蛋白表达水平,增加细胞内Apo AI介导的胆固醇流出,是其临床治疗动脉粥样硬化的机制之一。(本文来源于《时珍国医国药》期刊2018年06期）
胆固醇流出论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
脂代谢紊乱导致大量脂质在大中动脉中沉积是动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)的主要病理生理学基础,而巨噬细胞摄取过量的修饰脂蛋白,导致细胞内总胆固醇(Total cholesterol,TC)和甘油叁酯(Triglyceride,TG)以脂滴形式积聚并形成泡沫细胞,是发生AS的重要过程。成纤维细胞生长因子21(Fibroblast growth factor21,FGF21)是一种内分泌因子,可降低血浆TC、TG、低密度脂蛋白胆固醇(Low-density lipoprotein cholesterol,LDL-c),并提高高密度脂蛋白胆固醇(High density lipoprotein cholesterol,HDL-c)水平,因而具有抗AS潜力。本课题组前期研究发现FGF21可以减少泡沫细胞中的脂质蓄积,然而,潜在的机制仍不清楚。脂质蓄积是泡沫细胞形成的核心,泡沫细胞的脂滴代谢和胆固醇外流将减少泡沫细胞的形成。因此,深入探讨FGF21调节泡沫细胞脂质代谢的机制对AS的防治具有重要意义。自噬可以通过酸性脂肪酶降解脂滴,促进胆固醇流出,从而维持脂质代谢平衡;而自噬受损将抑制胆固醇逆转运,促进动脉粥样硬化的发生和发展。因此,本研究的目的是探讨FGF21是否可以通过调节自噬影响巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇代谢抗AS,并探讨其潜在机制。第一部分:FGF21对高脂饮食apo E~(-/-)小鼠AS病变的影响【目的】观察FGF21对高脂饮食apo E~(-/-)小鼠AS病变的影响。【方法】60只成年雄性apo E~(-/-)小鼠随机分成4组:(1)对照组:普通正常饮食(Normal diet,ND);(2)AS1:高脂饮食组,喂食高脂饮食(High fat diet,HFD);(3)AS2:HFD+腹腔注射(Intraperitoneal,ip)与AS3等量的生理盐水(Normal saline,NS);(4)AS3:HFD+FGF21 ip(10mg/kg.d)。每周记录体重和食物摄入量。注射12周后,在戊巴比妥诱导的全身麻醉下处死小鼠并收集血液,检测TC、TG、HDL-c和LDL-c的血浆浓度。苏丹IV染色观察主动脉AS病变。取小鼠主动脉窦作冰冻切片,苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)和油红O染色检测主动脉窦AS病变情况。通过上述动物实验明确FGF21对HFD apo E~(-/-)小鼠血脂谱及AS病变的影响。【结果】与对照组相比,AS1、AS2组小鼠血浆TG、TC和LDL-c水平明显升高,HDL-c明显降低(P<0.05),HE、油红O染色显示小鼠主动脉窦有明显的AS斑块,苏丹IV染色可见主动脉有明显的脂质沉积,提示造模成功,并且腹腔给药途径(NS)对AS病变无明显作用(AS2与AS1比较)。HFD+FGF21组与HFD组相比,其TG、TC和LDL-c较低,HDL-c较高,AS病变面积减少,并且体重低于HFD组。【结论】FGF21可改善HFD apo E~(-/-)小鼠脂质谱并抑制apo E~(-/-)小鼠AS病变。第二部分:FGF21抗动脉粥样硬化的分子机制【目的】探讨FGF21抗AS病变的分子机制。【方法】首先明确FGF21抗AS的作用是否依赖于调节自噬的作用:90只apo E~(-/-)小鼠分为6组:(1)对照组:ND;(2)AS1:HFD;(3)AS2:HFD+NS ip;(4)AS3:HFD+FGF21 ip;(5)AS4:HFD+3-MA ip(30mg/kg.d);(6)AS5:HFD+FGF21 ip+3-MA ip。通过Western Blot检测自噬相关蛋白,HE和油红O染色检测小鼠AS病变。进而在细胞水平观察FGF21对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞自噬(流)的影响,实验分为四组:(1)对照组;(2)Baf A1组(20n M);(3)FGF21组;(4)FGF21+Baf A1组。采用Western Blot、激光共聚焦检测GFP-LC3、MDC染色和电镜检测分析FGF21对自噬(流)的影响。进一步分析FGF21对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响,FGF21以不同浓度(0-400ng/ml)和不同时间(0-48h)处理THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞后通过油红O染色和3H胆固醇标记分析脂质蓄积和胆固醇流出情况。为明确FGF21促进胆固醇流出是否依赖于其调节自噬的作用,采用HPLC、油红O染色和液体闪烁计数测量3H胆固醇含量分析3-MA和ATG5 si RNA抑制自噬后脂质蓄积和胆固醇流出的情况。进一步探讨FGF21上调自噬促进胆固醇流出抗AS的作用是否与蛋白激酶C受体1(Receptor for activated C kinase 1,RACK1)有关。首先通过免疫组化、RT-PCR和Western Blot检测对照组、HFD组、HFD+NS ip组和HFD+FGF21 ip组apo E~(-/-)小鼠主动脉斑块中RACK1的表达。然后,我们构建了RACK1 sh RNA慢病毒给予HFD+sh RNA组小鼠尾静脉注射,实验结束后通过Western Blot分析各组小鼠自噬水平,HE染色、油红O染色分析小鼠AS病变情况。然后,在THP-1细胞中转染RACK1 si RNA分析RACK1敲低后对自噬(流)和胆固醇流出的影响,通过Western Blot、激光共聚焦检测GFP-LC3、MDC染色和透射电镜检测自噬(流),HPLC、油红O染色、液体闪烁计数测量培养基和细胞中的3H胆固醇含量分析泡沫细胞中脂质蓄积和胆固醇流出情况。最后检测FGF21对AMPK磷酸化和ABCA1表达的影响,并明确其作用是否与调节RACK1有关。【结果】FGF21 ip(AS3)组与HFD组(AS1)比较LC3 Ⅱ/Ⅰ比率、Beclin1表达增加,P62表达减少;HE和油红O染色结果显示FGF21 ip组(AS3)AS病变程度低于HFD组(AS1)。3-MA+FGF21 ip(AS5)与FGF21 ip组(AS3)比较LC3 Ⅱ/Ⅰ比率、Beclin1表达水平均减少,P62表达水平增加;而HE和油红O染色结果显示自噬抑制剂3-MA+FGF21 ip组(AS5)与FGF21 ip组(AS3)相比其AS病变程度明显加重。综合以上结果表明:FGF21可通过上调HFD apo E~(-/-)自噬水平抑制AS,自噬受损削弱FGF21对AS的抑制作用。GFP-LC3、MDC染色和透射电镜测定结果显示FGF21可诱导泡沫细胞中自噬体形成。泡沫细胞与巴弗洛霉素A1共孵育时,LC3-I至LC3-II转化率相对于对照组显着增加。相对于仅用巴弗洛霉素A1或FGF21孵育组,巴弗洛霉素A1+FGF21组的LC3-I至LC3-II转化率进一步增加。因此,这些结果表明FGF21诱导泡沫细胞中的自噬流。HPLC测定结果显示,与对照组相比,200ng/ml和400ng/ml FGF21处理24小时以及200ng/ml FGF21处理24 h和48 h显着降低TC、FC和CE水平。同时,油红O染色和3H胆固醇测定结果显示FGF21促进泡沫细胞胆固醇流出、抑制脂质蓄积。3-MA或ATG5 si RNA干预处理可显着减弱FGF21促进LC3-I向LC3-II转化的作用,并相应增加P62表达。自噬体形成也被3-MA或ATG5si RNA抑制。HPLC检测表明抑制自噬明显减弱FGF21降低TC、FC和CE的作用。油红O染色和胆固醇流出检测结果显示抑制自噬减弱FGF21促进胆固醇流出并减少泡沫细胞中脂质蓄积的作用。与对照组和HFD组相比FGF21腹腔注射的HFD apo E~(-/-)小鼠RACK1蛋白和m RNA水平显着增加。与HFD+FGF21 ip apo E~(-/-)小鼠相比,HFD+FGF21ip+RACK1敲低组其LC Ⅱ/Ⅰ比率和Beclin1表达水平降低,P62表达水平增加;且与HFD+FGF21 ip apo E~(-/-)小鼠相比,RACK1敲低组其AS病变加重。在体外实验中,RACK1 si RNA抑制LC3-I向LC3-II的转化以及beclin-1的表达,同时上调P62表达水平,抑制自噬体形成。此外,RACK1敲低明显减弱FGF21对TC、FC和CE水平的降低作用,以及FGF21促进泡沫细胞中胆固醇流出的作用。Western Blot结果显示FGF21可以活化AMPK增加ABCA1的表达,并且当转染RACK1 si RNA后明显减弱FGF21促进AMPK磷酸化和ABAC1表达的作用。上述结果表明,FGF21上调自噬及促进泡沫细胞中胆固醇流出的作用部分依赖于RACK1。【结论】FGF21通过上调RACK1促进自噬(流)及泡沫细胞中胆固醇流出抑制apo E~(-/-)小鼠AS病变。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
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