导读:本文包含了抗旋毛虫抗体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:旋毛虫病,肌幼虫,抗体检测,免疫层析
抗旋毛虫抗体论文文献综述
王静[1]（2019）在《旋毛虫病荧光免疫层析抗体检测试纸条的建立》一文中研究指出旋毛虫是一种在全球广泛分布的人兽共患寄生虫,其对各种哺乳动物均有较高的感染性,而人如果生食或半生食寄生有旋毛虫肌幼虫的肉类则会感染。目前旋毛虫检验主要采用镜检法和人工消化法,两种方法各有一定的优缺点和适用范围。对比可知镜检法的敏感性较低,而人工消化法相对耗费时间和人力,且敏感性仍有待提高。因此,开发适用于现场的高效、灵敏的旋毛虫检测方法,能有效地缩短旋毛虫的检验时间,并为旋毛虫的防治提供方法和技术支持。(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医食品卫生学分会第十五次学术交流会论文集》期刊2019-12-12）
张胜兰,刘琰,李岩松,刘晓雷,白雪[2]（2019）在《旋毛虫Ts-Sp-7蛋白的表达纯化及其多克隆抗体的制备》一文中研究指出为给旋毛虫病的诊断及疫苗研制提供备选抗原,对本实验室获得的旋毛虫Ts-Sp-7基因(GenBank登录号EU263332.1)进行PCR扩增,构建原核表达载体,进行表达纯化,Western-blot分析。制备多克隆抗体进行间接免疫荧光分析。通过PCR扩增出1 372 bp的Ts-Sp-7基因。SDS-PAGE结果显示,该蛋白大小为46 ku左右,与理论分子质量一致。Western-blot结果显示,该目的蛋白与10 000条/头感染剂量不同感染时间的猪阳性血清均呈现特异性条带。制备的多克隆抗体效价为1∶350 000。Ts-Sp-7多克隆抗体的间接免疫荧光鉴定结果显示,Ts-Sp-7蛋白在旋毛虫肌幼虫期存在于虫体表面。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2019年11期）
王春,张平平,赵勇,唐斌,刘晓雷[3]（2019）在《上转发光免疫层析技术快速检测猪抗旋毛虫IgG抗体方法的建立》一文中研究指出基于上转发光免疫层析(UPT-LF)技术,旨在建立UPT-LF快速检测猪抗旋毛虫IgG抗体的方法。采用间接法制备UPT-LF试纸条,通过共价偶联使二抗山羊抗猪IgG和上转发光纳米颗粒(UCP)结合,并加入样品垫和被检血清结合,以旋毛虫肌幼虫丝氨酸蛋白酶抑制因子基因(WM5)表达的蛋白WM5为猪抗旋毛虫IgG特异性结合抗原,WM5(2 g/L)与兔抗山羊IgG(0.5 g/L)喷点于分析膜上作为UPT-LF试纸条检测带(T)与质控带(C),该试纸条命名为Tsp-UPT-LF。Tsp-UPT-LF通过对95份阴性血清检测,确定Tsp-UPT-LF的Cutoff值为0.099。Tsp-UPT-LF和ELISA分别对273份旋毛虫感染猪血清样本进行检测,总符合率为92.31%,一致性系数Kappa(K)值为0.837,表明两种方法具有高度一致性。Tsp-UPT-LF检测旋毛虫、猪囊虫、华支睾吸虫感染的猪血清Tsp-UPT-LF呈现对旋毛虫良好的特异性。Tsp-UPT-LF检测感染50 000条旋毛虫肌幼虫28 d猪血清为阳性,T/C值0.109,122 d阳性最强,T/C值为0.207,至425 d时阳性值有所下降,抗旋毛虫IgG阳性率为71.4%。本研究建立了基于UPT-LF技术快速检测猪抗旋毛虫IgG抗体的方法,为猪旋毛虫即时感染检测、确保食品安全提供了一种可参考的检测方法。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2019年05期）
张小波[4]（2018）在《旋毛虫病荧光免疫层析抗体检测试纸条的建立》一文中研究指出旋毛虫是一种重要的人兽共患寄生虫病,能严重危害人类的健康,给公共卫生安全带来极大威胁。因此,开发适用于现场的高效、灵敏的旋毛虫检测方法,能有效地缩短旋毛虫的检验时间,并为旋毛虫的防治提供方法和技术支持。在本研究RPMI1640培养液培养旋毛虫肌幼虫而获得肌幼虫排泄分泌(ES)抗原,并通过其检测不同感染条件下的猪阳性血清,所得结果作为试纸条检测准确性的参照。同时应用肌幼虫ES抗原作为诊断抗原,通过对各种固相材料的选择和反应体系及反应条件的优化,建立了一种基于荧光微球标记山羊抗猪IgG的旋毛虫免疫层析试纸条,并应用于猪旋毛虫感染的血清学检测。经过体外培养得到浓度为2mg/ml的肌幼虫ES抗原。ES抗原经Western blot鉴定可以与旋毛虫感染阳性猪血清发生特异性结合。利用喷涂有1mg/ml ES抗原和0.625mg/ml兔抗山羊IgG的NC膜、喷涂有时间分辨荧光微球标记的山羊抗猪IgG的结合垫Ahistrom8964,并连同XQ-Y8样品垫、荧光专用黑色底板和吸水纸H5072进行旋毛虫荧光免疫层析试纸条的组装。该试纸条可检测到1:100稀释的猪血清中的抗旋毛虫抗体,与抗猪囊虫、华支睾吸虫等血清无交叉反应;应用该试纸条与OIE认定的旋毛虫血清学标准检测方法酶联免疫吸附方法(ELISA)进行检测比较,结果表明试纸条的检测效果较标准血清学检测方法在感染剂量为1000条时晚10天,但不同感染量不同感染天数的阳性血清IgG抗体水平趋势大致相同。结果表明,本研究建立的旋毛虫荧光免疫层析试纸条具有良好的特异性、灵敏性和重复性等,能够快速检测出猪血清中的旋毛虫抗体,并可应用于现场初筛。(本文来源于《吉林大学》期刊2018-06-01）
王金鹏,宫鹏涛,李建华,杨举,杨正涛[5]（2017）在《旋毛虫7TR蛋白人源单链抗体抗A549肿瘤作用研究》一文中研究指出本实验首先对旋毛虫与肺癌A549细胞相关抗原旋毛虫7TR蛋白进行原核表达,重组蛋白经纯化、复性后,进行了Tomlinson(I+J)人源单链抗体库的的筛选,并用ELISA验证筛选所得阳性抗体分泌菌株。对阳性抗体分泌株所分泌抗体进行纯化后,采用间接免疫荧光抗体检验阳性抗体与A549细胞的结合活性,并采用CCK-8法度检测不同浓度的抗体对A549细胞的生长抑制活性。最后通过荷瘤裸鼠的治疗实验评价抗旋毛虫7TR蛋白人源单链抗体对A549肺癌肿瘤细胞的治疗效果,通过免疫组化分析单链抗体抑制A549细胞的机制。结果成功获得了纯化并复性的重组旋毛虫7TR蛋白。经过四轮针对7TR蛋白的噬菌体抗体富集后,随机挑选2000个侵染了噬菌体的E.coli HB2151单菌落,通过IPTG诱导后取得的上清,经ELISA检验,当样品OD490试≥3OD490阴时,视样品为阳性,进过叁轮平行验证以及对p ET-32a标签抗体和奶粉抗体的去除,此过程中最终共筛选出9株阳性克隆:1A2、2B1、2B8、4C7、5D1、6D2、7H5、7H9、8G5。经ELISA初步检测,其中只有8G5具有较好的A549结合活性。纯化8G5抗体后,通过激光共聚焦观察间接免疫荧光结果,发现8G5单链抗体具有较好的A549结合活性。经Ig blast分析,8G5为完整的人源单链抗体。采用CCK-8法检测抗旋毛虫7TR蛋白人源单链抗体的体外抗A549肺癌作用,结果发现当单链抗体对A549细胞的最高生长抑制率为23.29%。体内抗A549肿瘤实验结果显示,单链抗体的最高抑瘤率为59.10%。利用免疫组化分析抗旋毛7TR人源单链抗体治疗后肿瘤组织癌细胞增殖凋亡相关基因PCNA、VEGF、Bcl-2的表达情况,结果表明经旋毛虫7TR人源单链抗体治疗后,PCNA、VEGF表达均下调,Bcl-2基因表达无明显变化。并且,HE染色结果显示,7TR单链抗体在治疗A549肿瘤后,裸鼠的心、肝、脾、肺、肾均未出现病理组织学变化。(本文来源于《中国动物学会寄生虫学专业委员会第十六次全国学术会议暨第七次国际寄生虫学学术研讨会论文摘要集》期刊2017-10-13）
王金鹏[6]（2017）在《旋毛虫7TR蛋白人源单链抗体抗A549肿瘤作用研究》一文中研究指出目前国内外许多研究已经证实,旋毛虫感染对动物体内的肿瘤生长具有抑制作用,但其具体抗肿瘤机制尚不明确。本实验室先前通过对旋毛虫c DNA文库的筛选,已发现旋毛虫与乳腺癌、结肠癌、肝癌、肺癌等多种癌细胞存在相关抗原,并且针这些相关抗原所制备的鼠源高免血清和单克隆抗体均在裸鼠荷瘤模型的治疗实验中取得了较好的抗肿瘤作用。其中本实验室前期以旋毛虫与A549肺癌细胞相关抗原旋毛虫7TR蛋白为抗原制备的鼠源高免血清,在裸鼠荷A549的肿瘤动物模型的治疗实验中,取得了64.77%的抑瘤率。左绍志等利用旋毛虫与肝癌的相关抗原制备的单抗,也在H7402的肿瘤动物模型的治疗实验中获得了良好的治疗效果。但是,鼠源抗体因为高昂的成本而难以大规模生产应用。更重要的是,鼠源抗体在疾病治疗中还没达到满意的效果,多克隆抗体和单克隆抗体都会在人体引起较强的人抗鼠抗体(human anti-mouse antibody,HAMA)反应;而嵌合抗体和CDR移植抗体等改型抗体也存在着治疗效果有限、排斥反应和技术复杂等问题。Huston J S等和Bird R等采用DNA重组技术制备的单链抗体(sc Fv),具有完整的抗原结合位点,分子量只有常规抗体的约1/6,穿透组织能力强,在血液中代谢清除快,全部筛选过程可在体外进行。更重要的是sc Fv能在工程菌中表达,易于基因改造和规模化生产,并可连接抗肿瘤效应分子,构建抗肿瘤融合蛋白,从而将药物导向肿瘤,在肿瘤显像和肿瘤靶向性治疗中具有广阔的应用前景。近几年报道中,已有人将单链抗体直接用于实体瘤治疗的动物实验中,并取得了较好的治疗效果,这也证明了单链抗体药物新的应用潜力。本实验首先对旋毛虫与肺癌A549细胞相关抗原旋毛虫7TR蛋白进行原核表达,表达后的重组蛋白经纯化、复性后,进行了Tomlinson(I+J)人源单链抗体库的的筛选,并用ELISA验证筛选所得阳性抗体分泌菌株。对阳性抗体分泌株所分泌抗体进行纯化后,采用间接免疫荧光抗体检验阳性抗体与A549细胞的结合活性,并采用CCK-8法度检测不同浓度的抗体对A549细胞的生长抑制活性。最后通过荷瘤裸鼠的治疗实验评价抗旋毛虫7TR蛋白人源单链抗体对A549肺癌肿瘤细胞的治疗效果,通过免疫组化分析单链抗体抑制A549细胞的机制。旋毛虫7TR蛋白的原核表达、纯化与复性根据NCBI公布的旋毛虫7TR基因,设计特异性引物,以旋毛虫c DNA为模板,PCR扩增目的基因,并将目的基因克隆到p ET-32a载体,并转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达。对表达蛋白进行DEAE弱离子交换柱柱上复性,并对复性后蛋白进行Cu2+螯合柱亲合层析,最后得到纯化并复性的重组旋毛虫7TR蛋白。Tomlinson(I+J)人源单链噬菌体抗体库的筛选经过四轮针对7TR蛋白的噬菌体抗体富集后,随机挑选2000个侵染了噬菌体的E.coli HB2151单菌落,通过IPTG诱导后取得的上清,经ELISA检验,当样品OD490试≥3OD490阴时,视样品为阳性,进过叁轮平行验证以及对p ET-32a标签抗体和奶粉抗体的去除,此过程中最终共筛选出9株阳性克隆:1A2、2B1、2B8、4C7、5D1、6D2、7H5、7H9、8G5。经ELISA初步检测,其中只有8G5具有较好的A549结合活性。7TR阳性抗体的A549结合活性检测纯化8G5抗体后,通过激光共聚焦观察间接免疫荧光结果,发现8G5单链抗体具有较好的A549结合活性。经Ig blast分析,8G5为完整的人源单链抗体。7TR蛋白人源单链抗体体内外抗A549肿瘤作用采用CCK-8法检测抗旋毛虫7TR蛋白人源单链抗体的体外抗A549肺癌作用,结果发现当单链抗体对A549细胞的最高生长抑制率为23.29%。体内抗A549肿瘤实验结果显示,单链抗体的最高抑瘤率为59.10%。利用免疫组化分析抗旋毛7TR人源单链抗体治疗后肿瘤组织癌细胞增殖凋亡相关基因PCNA、VEGF、Bcl-2的表达情况,结果表明经旋毛虫7TR人源单链抗体治疗后,PCNA、VEGF表达均下调,Bcl-2基因表达无明显变化。并且,HE染色结果显示,7TR单链抗体在治疗A549肿瘤后,裸鼠的心、肝、脾、肺、肾均未出现病理组织学变化。(本文来源于《吉林大学》期刊2017-06-01）
王金鹏,张国利,张海英,鹿香云,宫鹏涛[7]（2017）在《与A549细胞相关的旋毛虫抗原蛋白7TR单链抗体的筛选》一文中研究指出目的筛选可与A549细胞相互作用的抗旋毛虫7TR单链抗体。方法 PCR法克隆旋毛虫7TR基因,连接至表达载体p ET-32a,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导后,将表达的7TR蛋白进行复性及亲合层析纯化;以纯化后的旋毛虫7TR蛋白为抗原,筛选Tomlinson(I+J)人源噬菌体单链抗体库,筛选并纯化阳性抗体,免疫荧光试验检测抗体与A549细胞的结合活性。结果重组表达质粒p ET-32a-7TR经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的旋毛虫7TR蛋白相对分子质量约50 000。共获得2株稳定分泌抗旋毛虫7TR蛋白单链抗体的E.coli HB2151菌株,命名为4C7和8G5;8G5可与重组7TR蛋白发生特异性结合,具有良好的反应原性,也可与A549细胞发生特异性结合。结论筛选出了与A549细胞具有结合活性的抗7TR单链抗体,为后续的临床应用奠定了基础。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2017年05期）
于海波,宋铭忻,李晓云,刘畅,王泽[8]（2017）在《旋毛虫单克隆抗体复苏鉴定及ES抗原的组织定位》一文中研究指出为了深入了解旋毛虫ES抗原的致病机制,试验采用杂交瘤细胞技术制备单克隆抗体(Mab),对旋毛虫ES抗原进行组织定位;采用间接ELISA方法对复苏的单克隆抗体进行检测;采用SDSPAGE及Western-blot技术对ES抗原中的蛋白组分进行分析。结果表明:获得的2株杂交瘤细胞系A11和B13经Western-blot证实能与49 ku处的ES抗原反应,能够稳定分泌抗体,且效价高。说明试验成功确定了旋毛虫ES抗原在组织中的位置,旋毛虫肌幼虫ES抗原中的49 ku蛋白组分为旋毛虫肌幼虫的特异性抗原。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2017年05期）
于海波[9]（2016）在《旋毛虫免疫金标单克隆抗体试纸条的研制》一文中研究指出旋毛虫病是世界许多地区重要的食源性寄生虫人畜共患病。人类感染是由于摄取含有感染性旋毛形线虫幼虫的生或半熟肉。在重度感染下,旋毛虫病可能是致命的。从2004年到2009年,人类旋毛虫病爆发15次包括1 387例,死亡4例。所以,旋毛虫病,不仅通过影响患者危害公众健康,而且带来猪动物生产和食品安全的经济问题。旋毛虫病现阶段临床诊断还是主要依靠肌肉活体检测,但是这种检测方法对前期感染者效果甚微,还有这种方法对晚期感染者也存在活性检测率不高的现象。因此,本研究针对旋毛虫病的血清学诊断方法进行了大量研究,其中尤为突出的是胶体金免疫层析法(colloidal gold immunochr-omatographic assay,GICA),这是一种新的免疫学检测技术,相对于其它检测方法更为简便快速,本试验单克隆抗体复苏技术将本教研室的A11和B13两株单抗单抗成功复苏,并且运用间接ELISA方法检测其效价达到1:50 200,然后利用辛酸-饱和硫酸铵法和亲和层析柱联合法纯化单克隆抗体,可以分别用于检测和标记。对ES抗原蛋白进行纯化,采用Western-blot方法对ES抗原蛋白进行分析,结果显示复苏的单克隆抗体可以有效识别ES抗原蛋白且条带单一。上述结果显示本研究得到的ES抗原蛋白具有良好的免疫原性,可以使感染者产生高效且特异性较高的免疫应答。并且对旋毛虫5日龄小鼠肌幼虫的ES抗原蛋白免疫组织化学方法定位发现,在虫体的体内发现有ES抗原蛋白的分布。采用枸橼酸钠法制备20 nm胶体金,外观呈酒红色,透明均匀。可以应用到标记单克隆抗体方面。然后把二抗喷涂在玻璃纤维素膜上构成检测线(T);将金标单抗A11作为检测试剂,喷涂在玻璃纤维膜上。在加样垫处涂抹旋毛虫ES抗原的样品,抗原和金标单抗A11结合为络合物,上移,在T上,络合物中的抗原与二抗结合,因为过量的沉积于T,导致其变红;如果检测样品没有ES抗原不会有红线出现。本试验研究结果表明,旋毛虫ES抗原蛋白可以诱导机体产生良好的免疫反应。本研究以免疫层析法为基础,并且应用抗原—抗体的特性,应用胶体金标记本试验复苏成功的单克隆抗体A11和B13,将其制成试纸条并进行大量检测,达到预期效果。旋毛虫ES抗原可以作为旋毛虫感染早期诊断的抗原,并且这种抗原可以应用到疫苗研发和药物生产方面。同时,也为旋毛虫入侵宿主相关机制的阐明奠定一定的理论基础。(本文来源于《东北农业大学》期刊2016-06-01）
李雁萍[10]（2016）在《免疫层析试纸条检测实验感染猪旋毛虫抗体的研究》一文中研究指出旋毛虫又称"旋毛形线虫",感染此病而诱发的旋毛虫病对人体危害大。目前,检验肉质中旋毛虫的方法,有肌肉压片镜检法和人工消化法,因各有弊端难以推广使用。笔者推荐免疫层析试纸条检测猪旋毛虫,方法:制备免疫层析试纸条,实验用猪30头,均采购本地规模猪场。分为2组,1组为感染组,20头;1组为正常组,10头。感染组,每头经5000条旋毛虫幼虫感染,试纸条进行血清及肉汁抗体检测,并与镜检法进行比较。结果:使用的免疫层析试纸条,具有操作简单、便捷快速、不需专业技能等优点,更便于推广应用。而且,更适合试纸条检测肉汁中旋毛虫抗体可用于新鲜肉及冷冻猪肉中旋毛虫检疫的初筛。(本文来源于《中国畜牧兽医文摘》期刊2016年04期）
抗旋毛虫抗体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为给旋毛虫病的诊断及疫苗研制提供备选抗原,对本实验室获得的旋毛虫Ts-Sp-7基因(GenBank登录号EU263332.1)进行PCR扩增,构建原核表达载体,进行表达纯化,Western-blot分析。制备多克隆抗体进行间接免疫荧光分析。通过PCR扩增出1 372 bp的Ts-Sp-7基因。SDS-PAGE结果显示,该蛋白大小为46 ku左右,与理论分子质量一致。Western-blot结果显示,该目的蛋白与10 000条/头感染剂量不同感染时间的猪阳性血清均呈现特异性条带。制备的多克隆抗体效价为1∶350 000。Ts-Sp-7多克隆抗体的间接免疫荧光鉴定结果显示,Ts-Sp-7蛋白在旋毛虫肌幼虫期存在于虫体表面。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
抗旋毛虫抗体论文参考文献
[1].王静.旋毛虫病荧光免疫层析抗体检测试纸条的建立[C].中国畜牧兽医学会兽医食品卫生学分会第十五次学术交流会论文集.2019
[2].张胜兰,刘琰,李岩松,刘晓雷,白雪.旋毛虫Ts-Sp-7蛋白的表达纯化及其多克隆抗体的制备[J].中国兽医科学.2019
[3].王春,张平平,赵勇,唐斌,刘晓雷.上转发光免疫层析技术快速检测猪抗旋毛虫IgG抗体方法的建立[J].中国兽医学报.2019
[4].张小波.旋毛虫病荧光免疫层析抗体检测试纸条的建立[D].吉林大学.2018
[5].王金鹏,宫鹏涛,李建华,杨举,杨正涛.旋毛虫7TR蛋白人源单链抗体抗A549肿瘤作用研究[C].中国动物学会寄生虫学专业委员会第十六次全国学术会议暨第七次国际寄生虫学学术研讨会论文摘要集.2017
[6].王金鹏.旋毛虫7TR蛋白人源单链抗体抗A549肿瘤作用研究[D].吉林大学.2017
[7].王金鹏,张国利,张海英,鹿香云,宫鹏涛.与A549细胞相关的旋毛虫抗原蛋白7TR单链抗体的筛选[J].中国生物制品学杂志.2017
[8].于海波,宋铭忻,李晓云,刘畅,王泽.旋毛虫单克隆抗体复苏鉴定及ES抗原的组织定位[J].黑龙江畜牧兽医.2017
[9].于海波.旋毛虫免疫金标单克隆抗体试纸条的研制[D].东北农业大学.2016
[10].李雁萍.免疫层析试纸条检测实验感染猪旋毛虫抗体的研究[J].中国畜牧兽医文摘.2016