凌旭[1]2003年在《体外白细胞—内皮细胞动态粘附模型及其定量方法的建立》文中认为内皮细胞在心血管疾病、炎症反应、动脉粥样硬化等的发病机制中起着至关重要的作用。其功能的研究及与各类疾病的相关性一直以来都是生物医学工程研究的重点。尤其剪切力条件下内皮细胞功能与心血管疾病的关系成为当前研究的热点。 本文在内皮细胞培养技术、细胞荧光显微技术的基础上，通过体外模拟血流，建立了一套研究内皮细胞与白细胞在剪切力条件下的粘附的新方法。整套系统包括平板流动小室系统部分和细胞荧光显微成像及显微图象处理部分。通过平板流动小室装置(Parallel Plate Flow Chamber System)产生剪切力，利用倒置荧光显微镜成像，结合计算机图象处理技术，定量地研究了流动状态下白细胞与内皮细胞的相互作用，并且分析了药物地塞米松的抗粘附作用。针对实验得到的大量图像的测量和统计，本设计编制了一个实用的图像处理和分析的软件，利用数学形态学方法和图像分割技术等对获得的图像中粘附的白细胞加以识别和计数，并测量白细胞在内皮细胞上滚动的速度，从而可以定量、客观的研究白细胞与内皮细胞的粘附。该实验模型及定量分析方法的建立，为今后深入研究内皮细胞功能，炎症反应和一些心血管疾病中血细胞与内皮细胞间的相互作用打下一定的基础。
葛亚坤[2]2009年在《内皮氧化损伤体外分析系统的建立及在药效评价中的应用》文中研究表明内皮细胞是覆盖在血管腔内表面的单层细胞，可以通过分泌多种活性物质参与心血管系统功能的调节。许多心血管疾病及危险因素均可以导致内皮功能损伤，而内皮功能损伤又常伴发和加重心血管疾病。引起内皮细胞损伤的原因很多，氧化应激引起的内皮细胞氧化损伤是引起内皮功能障碍的一个重要原因。本课题利用细胞阻抗微阵列传感器及计算机图像处理等工程手段在体外建立了单核细胞-内皮静态粘附及动态粘附定量分析模型，同时结合流式细胞术、激光共聚焦显微技术、免疫细胞化学、活体细胞染色等多种传统生化技术手段，较为系统和全面的建立了体外内皮氧化损伤分析系统，并将此系统应用于药效评价中，对金丝桃苷药效做以研究。为心血管疾病相关药物筛选提供了一个高效、定量、敏感的平台，也为筛选出的药物的开发提供理论依据。本研究在体外建立了利用基于细胞阻抗分析白细胞-内皮细胞静态粘附分析模型。利用RT-CES系统，观察研究白细胞粘附过程中内皮细胞与胞外基质间粘附性的变化，并通过与传统生化方法的比较，验证了此方法的可行性和准确性。在体外建立了单核细胞-内皮细胞动态粘附模型。利用流动小室系统和荧光标记技术，在体外模拟血流动力学条件，结合图像处理技术，定量分析了单核细胞运动速度等参数。通过内皮细胞代谢活性、凋亡坏死、线粒体功能及凋亡相关蛋白表达几个方面，建立了体外氧化损伤致内皮凋亡的定量分析模型。在此模型上，研究了金丝桃苷对氧化损伤所致内皮细胞凋亡坏死的作用及可能的作用途径。结果表明金丝桃苷可以抑制氧化损伤造成的内皮细胞的凋亡和坏死、线粒体功能紊乱及Bax表达增高，并可以增强Bcl-2的表达，证明抑制细胞凋亡坏死是金丝桃苷的内皮保护作用的重要机制，而Bax和Bcl-2则是金丝桃苷抑制内皮细胞凋亡的重要途径之一。利用基于细胞阻抗分析的单核细胞-内皮细胞静态粘附体外分析模型，研究了金丝桃苷对氧化损伤后内皮细胞表面粘附分子ICAM-1和E-Selectin表达的作用及对单核细胞粘附个数、内皮细胞阻抗变化的影响。利用单核细胞-内皮细胞动态粘附模型体外定量分析系统，研究了剪切力条件下，金丝桃苷对氧化损伤引起的单核细胞-内皮细胞粘附的影响。发现金丝桃苷可以降低两种粘附分子的表达，减少单核细胞静态粘附个数及增高粘附过程中内皮细胞细胞指数(cellindex，CI)值，同时金丝桃苷还可以提高动态粘附条件下单核细胞的慢速滚动速度，减少慢速滚动和牢固粘附的单核细胞的数目。提示金丝桃苷下调内皮细胞表面粘附分子，从而减少单核细胞静／动态粘附个数，增加内皮细胞与胞外基质的粘附性、加快单核细胞滚动速度是金丝桃苷发挥其内皮保护作用另一重要机制。综上，本课题的主要创新之处在于：1.利用RT-CES系统，建立了基于细胞阻抗分析的单核细胞-内皮细胞静态粘附体外分析模型，研究单核细胞粘附过程中内皮细胞与胞外基质间粘附性变化，较之传统的生化分析手段，具有免标记、实时动态、操作简便等优点。2.利用流动小室系统及图像处理技术，建立了单核细胞-内皮细胞动态粘附模型，并定量分析了单核细胞运动速度等运动参数。3.利用上述模型并结合传统生化分析手段，在体外建立了内皮氧化损伤定量分析系统，并将此系统应用于金丝桃苷的药效评价。研究结果表明金丝桃苷具有一定的内皮保护作用，该作用可能是通过抑制Bax表达和增强Bcl-2的表达，同时在抑制细胞线粒体膜电势损失、降低胞内自由基含量和增强细胞抗氧化性损伤等作用的共同参与下，抑制动脉粥样硬化发生过程中内皮细胞的凋亡和继发性的坏死；通过抑制损伤处内皮细胞表面粘附分子的表达及增加内皮细胞与胞外基质的粘附性，减少单核细胞向内膜下的迁移，继而减少巨噬细胞源泡沫细胞的形成。
李柳应[3]2007年在《细胞粘附压电传感能耗检测研究》文中指出压电细胞传感器(Pizeozelectric Cell-based Sensor)是以生活细胞作为传感元件,通过检测生活细胞的基本功能信息,细胞对化合物的响应等,实时、定量地确定细胞的生活状态和被分析物性质的技术。由于具有实时、原位、批量检测以及低成本检测等独特优点,因此已成为生命科学和环境科学以及医疗科学领域必不可少的工具。细胞粘弹性是与细胞运动和变形能力有关的重要的生物物理特性,它是指细胞不但具有液体的粘滞性,在流动过程中要克服内摩擦而必须消耗能量,而且还具有固体的弹性特征。它的改变较大地影响了细胞的侵袭、转移和细胞及其所在微环境之间的交互作用。因此,利用压电细胞传感器技术来研究细胞粘弹性有着十分重要意义。研究目的:构建新型的压电细胞传感器能耗检测(Piezoelectric Cell-based Sensor Dissipation,PCSD)技术平台,并以该平台为基础,在理论和实验方面阐明细胞粘附的压电传感声阻抗响应特性;以细胞作为传感元件,探索此技术平台在细胞-基底相互作用、细胞-药物相互作用、细胞粘弹性以及药物筛选等初步应用。此研究开创了细胞粘弹性和药物筛选的压电传感能耗检测方法,也为其应用提供了有力的理论基础,同时也对细胞生物学领域做了有益的探索。研究方法:将压电传感技术、瞬时损耗技术和体外细胞培养技术结合进行压电细胞传感能耗检测平台的构建;在性能测试过程中则是利用PCSD系统的实时分析技术实时动态监测细胞与基底间、细胞与药物间相互作用的力学行为信息,并结合倒置显微镜和扫描电子显微镜(SEM)进行细胞行为的形貌观察;应用研究则利用PCSD系统的实时分析技术与噻唑蓝比色分析(MTT)和荧光显微技术等传统的生物学方法进行同步实验的比较分析。研究结果:①结合细胞粘附的特性和压电传感器多层复合模型,并引入压电传感响应与负载声学参数的关系,即:Δf/f=Im(Z_L)/πZ_(cq)和ΔD=Re(Z_L)/πZ_(cq),建立起细胞粘附模型的压电传感响应声阻抗理论;在传感器透深范围内,对细胞粘附体系中各层的声阻抗方程进行近似求解,并对细胞粘附引起的传感响应进行分析。②构建了压电细胞传感能耗检测技术平台,并进行系统性能的稳定性、重现性测试,获得气相介质中谐振频率和耗散因子的稳定性为0.32±0.13 Hz·min~(-1)、0.13±0.02×10~(-7)和液相介质中谐振频率和耗散因子的稳定性为0.29±0.09Hz·min~(-1)、5.21±0.14×10~(-7);获得相对标准偏差为6.55×10~(-7)的最佳容积范围的信号重现性。③利用PCSD对人脐静脉内皮细胞HUEVC、人肝癌细胞HepG2的粘附行为进行了24h实时跟踪监测,比较了正常细胞与肿瘤细胞的压电传感响应差异;用EGTA分离出细胞单层、EDTA分离残留在芯片表面的细胞外基质,对细胞与基底的相互作用以及介质的浓度对细胞粘附的影响进行了分析,进一步验证了细胞粘附的分层模型;结合细胞体系各阻抗方程近似解在物理意义上分析细胞行为的压电传感响应。④构建了以人肝癌细胞HepG2为传感元件的PCSD,应用于药物筛选的初探,对紫杉醇(Pacitaxel,PTX)、长春新碱(Vincristine,VCR)和阿霉素(Adriamycin,ADM)3种药物与HepG2细胞的相互作用和药效进行了跟踪检测,得到药物对细胞骨架作用的强弱排序为PTX>VCR>ADM。同步对各种药物的药效进行了MTT比色分析和形貌观察,得到抑制HepG2细胞生长能力强弱排序为PTX>ADM>VCR。这种差异反映了PCSD对细胞粘附行为检测的灵敏度,即作用于细胞骨架,从而影响细胞的粘附行为的药物更适合于PCSD的检测研究。上述研究结果的取得,为利用压电细胞传感能耗检测技术进行细胞研究提供了有力的理论指导;特别是对肿瘤细胞的研究,为抗癌药物的筛选提供了坚实的实验基础;通过细胞粘附模型压电传感响应声阻抗理论的建立,也为细胞水平大量信息的获取打开了方便之门,压电细胞传感能耗检测技术必将以其独有的优势得到更为广泛的应用。
龙东平[4]2008年在《基于粘弹性模型的血液润滑性能研究》文中指出人工心脏、人工心肺机等人工器官的研制和使用过程中机械部件的磨损严重影响着其寿命和可靠性,良好的润滑不仅可以减小人工器官的磨损,延长其使用寿命,还可以保证病人的生命安全,提高生活质量。利用患者自身血液作为这类人工器官的润滑剂,可解决上述难题。血液是具有生理活性的流体,其组分复杂,流动性特殊,这就使得血液润滑带来优越性的同时也带来了一定的难度,加之以往对血液的研究主要集中在生理和病理等临床医学领域,将其作为机械部件的润滑剂是前人所未作过的尝试性探索研究。在血液流变学的基础上,探讨血液的各理化指标,结合血液的特殊流变性,利用线性粘弹性模型—Maxwell流变模型来描述血液的宏观的非牛顿流体特征和血细胞的微观粘弹性特征。在此模型的基础上,从微观和宏观两个方面对血液的润滑特性进行研究。本文针对血液的特殊性,分析讨论了影响血液润滑的因素—红细胞的聚集、变形、组分变化、摩擦界面的表面性能及温度变化等因素。针对血液润滑的特殊性,提出了评价血润滑性能的判定指标:(1)生物相容的指标—血栓;(2)生理限制的指标—溶血;(3)反映润滑性能的能承载能力;(4)温度限制。材料的表面性能决定了血细胞在摩擦界面的吸附特征及润滑过程中的表现。血细胞在材料表面的吸附会对血液的润滑性能产生影响。本文利用原子力显微镜研究了吸附在钛合金表面和云母表面的红细胞形态变化。从微观细胞力学的角度探讨在润滑过程血细胞的吸附特性和微观力学行为,在细胞力学的基础上建立了血细胞的粘附模型。基于所建立的粘附模型,从微摩擦的角度探讨血细胞的微摩擦机理,首次利用原子力显微镜研究生物细胞表面的微摩擦力及摩擦系数,从微观上研究血液的润滑提供了条件。针对血液粘弹性的特征,从分析血液组分出发,研究了红细胞比积的变化对血液粘弹性及润滑性能的影响,对不同红细胞比积的血液的承载能力进行了实验研究,发现红细胞的比积大小影响着血液的承载能力,红细胞比积越大,血液的承载能力越强。结合宏观摩擦实验,对原来建立的血液宏观粘弹性模型进行了修正,并在此基础上建立了红细胞比积和血液承载能力的关系模型;结合血液组分的动态变化和润滑间隙的动态变化,研究了血液润滑状态的变化,针对不同的血液润滑状态建立了血液润滑状态模型。推导了基于血液宏观Maxwell粘弹性模型的雷诺方程,并将此雷诺方程应用于微型轴流式血泵的仿真分析,得出了相应结论,为进一步研究血液的润滑和血泵结构的优化提供了基础。
陈元维[5]2007年在《组织工程支架材料及其降解产物血管化功能的体外研究及表征方法的建立》文中进行了进一步梳理本论文课题来源为国家自然科学基金项目“可降解生物材料与内皮细胞界面反应对内皮细胞功能蛋白表达的影响及机理研究”(No．30370411)。理想的组织工程材料应具有可控的生物降解性。要解决组织生长和材料降解的匹配问题，必须了解材料在使用中的生物学过程，并阐明材料降解与细胞生长和组织构建的相互作用机制。这是一个材料学与生命科学交叉的课题，也是生物材料研究中的难点。血管化问题是组织工程取得成功的关键环节，研究生物材料对组织血管化过程的影响和机理，设计和开发促血管化的支架材料是组织工程对生物材料的挑战。已有研究表明，材料的叁维结构和表面性质可显着影响血管形成，但材料降解产物会不会影响以及如何影响血管形成目前尚不清楚。本论文针对以上问题，借鉴医学领域的研究方法，建立了组织工程材料降解产物血管化功能的表征体系。在此基础上，研究了组织工程材料降解产物的血管化功能，结合对材料降解产物的表征和降解规律的研究，探讨了降解时间及降解产物组分与血管化功能之间的关系。同时还研究了改性对材料／细胞界面上内皮细胞行为的影响。1．建立了组织工程材料降解产物血管化功能表征体系。依据血管形成过程及其分子调节机制，选择内皮细胞形成血管的叁大步骤(包括增殖、迁移和血管样结构TLS的形成)为细胞水平指标，调节血管形成的VEGF、MMP-2的基因表达和F-actin重组作为分子水平指标，建立了组织工程材料降解产物血管化功能细胞水平和分子水平的的表征体系。新建了细胞迁移定量检测方法CMQM；新建了TLS的定量检测方法TLSQM；选择MTT比色法检测细胞增殖，实时荧光定量RT-PCR技术检测VEGF和MMP-2 mRNA的表达；BODIPYFL标记的鬼笔环肽标记F-actin，在荧光显微镜下观察其组装情况。2．研究了叁类组织工程材料降解产物的血管化功能。分别以壳聚糖、聚乳酸和掺锶聚磷酸钙为例，以生理盐水为降解介质和对照，采用上述表征体系对天然高分子、合成高分子及生物陶瓷叁大类组织工程材料降解产物的血管化功能进行了研究。结果表明，叁类材料在生理盐水中均可降解，降解产物随时问累积，改变细胞生长的微环境，并对内皮细胞形成血管的重要步骤和调节血管形成的功能蛋白表达以及细胞骨架重构都有显着影响：可抑制也可促进血管化，取决于材料的种类和降解时间。且细胞水平和分子水平结果基本一致(掺锶聚磷酸钙的研究还表明体内动物实验和体外表征结果一致)。但降解时间的影响以及降解产物中单体所起的作用都各有不同。分述如下：(1)天然高分子壳聚糖(CS)降解产物的血管化功能降解时间的影响：在120天的降解时间内，细胞反应受到抑制不是在降解后期，而是在降解中期(20天～60天)。提示，天然高分子材料CS降解时间的延长和降解产物的累积不是影响内皮细胞行为的决定因素。不同时期产生的降解产物可能具有不同的分子结构，从而具有不同的生物活性。氨基葡萄糖(GS)单体的作用：在120天的降解时间内，CS降解液中GS浓度介于0.05～0.37mmol／L范围内。该浓度下，单纯的GS对内皮细胞增殖和迁移无显着影响，对TLS的作用效果也不同于降解液。提示，CS的降解产物中，影响内皮细胞行为的主要因素不是GS单体及其量的累积，而可能是GS齐聚物或与GS单体的共同作用。(2)合成高分子聚乳酸(PLA)降解产物的血管化功能降解时间的影响：降解初期(前7天)，对细胞增殖、迁移和TLS的形成均无不良影响，或有一定促进。但随着降解时间的延长，细胞行为受到抑制：降解30天后显着抑制细胞迁移和TLS形成，降解90天显着抑制细胞增殖。提示，对合成材料PLA，适量的降解产物有促血管化功能，而过量累积则会严重破坏细胞生态环境，抑制其生长。乳酸(LA)单体的作用：120天的降解时间内，PLA降解液中LA单体浓度介于(16.13～431.32)mmol／L之间，碱水解后LA总浓度介于(63.91～799.91)mmol／L之间。该浓度下单纯的LA已显着抑制细胞行为，但PLA降解液中LA浓度达到190mmol／L时才对细胞增殖有显着抑制。提示，乳酸齐聚物的存在可降低高浓度单分子乳酸对细胞的毒性作用。(3)生物陶瓷掺锶聚磷酸钙(SCPP)的血管化功能降解时间的影响：与生理盐水和聚磷酸钙(CPP)比较，SCPP90天的降解产物对内皮细胞行为几乎都有促进作用。锶元素的作用：单纯的锶元素对细胞迁移无明显影响，但浓度在10nmol／L～1mmol／L范围内可不同程度地提高细胞增殖和形成TLS能力。SCPP90天降解产物中锶元素浓度介于3.92μmol／L～20.65μmol／L之间，对血管化有明显的促进作用。3．组织工程材料改性对材料／细胞界面上内皮细胞行为的影响对本论文重点研究的叁种生物材料(CS、PLA以及CPP)分别进行改性，研究改性前后材料的细胞毒性和材料／细胞界面反应对内皮细胞行为的影响，结合改性前后材料性质变化探讨了改性对细胞行为影响的机理。结果发现，改性对叁种材料的细胞毒性均无不良影响，却显着改变了细胞在材料表面的粘附、铺展以及形成TLS等行为。分述如下：(1)海藻酸钠(ALG)改性对内皮细胞在CS表面行为的影响：改性对CS表面性质的影响：AFM和水接触角实验结果表明，海藻酸钠改性能显着降低CS的表面粗糙度，增加表面亲水性；改性对细胞行为的影响：细胞在CS表面形成TLS结构，与胶原凝胶表面的TLS类似；但改性后的表面具有抗内皮细胞粘附的性能。材料表面亲水性的增加和粗糙度的下降可能导致细胞粘附下降的原因。(1)磷脂胆碱改性对PLA表面内皮细胞行为的影响：改性对PLA表面性质的影响：水接触角和摄水率结果表明，磷脂胆碱改性能提高聚乳酸的亲水性，且随着磷脂含量的增加，亲水性增强；XPS分析表明，改性后的材料在水环境发生表面重构，磷脂胆碱基团从材料的本体向表面发生翻转。改性对细胞行为的影响：与改性前相比，PC／LLA比例为1／46和1／30的材料表面，细胞的粘附和铺展相对滞后，但继续培养，细胞能在材料上完全粘附和铺展，并且增殖。细胞初期粘附铺展滞后可能是材料亲水性增强造成的。而具有生物活性的磷脂官能团向材料表面翻转使材料表面发生重构，可能是使细胞最终实现粘附并增殖的原因。(3)掺锶改性对CPP表面内皮细胞行为的影响：改性对CPP表面性质的影响：掺锶能显着影响CPP的微观结构。掺锶后材料晶粒尺寸增大，晶粒间连接紧密，形成更平滑的表面；掺锶能显着减少CPP经培养液浸泡后表面形成的凝胶状物质。改性对细胞行为的影响：掺锶改性能显着促进ECV304细胞在CPP表面的粘附和铺展，其原因可能是掺锶减少CPP凝胶并降低其表面粗糙度。本论文首次建立了组织工程材料降解产物血管化功能表征体系，为组织工程材料功能性的表征和评价提供新的思路和方法参考。对叁类生物材料的表征发现，材料降解产物可改变细胞的微生态环境，进而显着改变内皮细胞形成血管的关键步骤以及调节血管形成的生长因子和蛋白酶的基因表达。该结果提示要解决组织工程中的血管化问题，必须重视材料降解产物对血管化的影响。对组织工程材料不仅要评价其安全性，还应深入研究其血管化功能。本论文的研究也为解决组织工程血管化问题探索了从非生长因子角度促血管化的可能性。
邓云[6]2004年在《知母有效成分对脑缺血的保护作用及其机制研究》文中认为随着人口老龄化的加剧,脑血管病,尤其是缺血性脑血管病越来越成为威胁人类健康的主要疾病之一,它不仅严重损害了患者的健康和生命质量,也给社会和家庭带来了沉重的负担。因此,明确脑缺血损伤的病理生理机制,研制和开发出新型、有效、副作用小的防治药物势在必行。 脑缺血的病理生理机制复杂,研究认为其与缺血再灌注后能量代谢障碍、兴奋性氨基酸毒性、自由基大量产生、细胞内钙超载、血小板激活、炎症损伤等诸多因素相关。现今血小板活化、炎症免疫损伤、核转录因子的调控下细胞因子的释放以及粘附分子的表达等机制越来越受到研究者的重视。 知母有效成分(化合物 9714)是军事医学科学院放射医学研究所提供的一种来源于中药知母的含有两个糖链的水溶性甾体皂苷化合物,结构类似糖皮质激素。本课题根据知母有效成分(化合物 9714)的结构特征,并结合脑缺血的研究现况,从整体、细胞、分子等不同水平,体内外研究相结合,利用生化测定、免疫组织化学、酶联免疫、分子生物学、细胞培养等多种方法系统分析探讨了化合物 9714 防治脑缺血损伤的药理作用及可能机制,为研究开发抗脑缺血新药提供一定的理论和实验依据。研究共分为以下五个部分:1 化合物 9714 对实验动物脑功能衰退的改善作用 学习记忆能力下降是脑缺血致脑功能障碍中的一种典型表现。本实验采用双侧颈总动脉结扎这一经典脑缺血模型,用 Morris 水迷宫测定各组动物空间学习记忆能力的差异,用 HE 染色及 SABC 免疫组织化学染色分析化合物 9714 对脑缺血模型大鼠病理形态学及神经生长因子、粘附分子表达的影响;同时鉴于胆碱系统的功能紊乱、胆碱受体密度降低与学习记忆、认知障碍、脑功能衰退之间的重要关系,实验中采用 M 受体阻断剂东莨菪碱 ip 0.5mg/kg 致获得性记忆障碍小鼠模型,观察化合物 9714 对模型小鼠学习记忆能力的影响,及对其海马中胆碱能受体的影响。结果表明,化合物 9714 10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg 造模后连续给药 40 天,可以明显改善脑缺血大鼠的学习记忆障碍;改善神经细胞的变性坏死;增强脑皮质中脑源性神经生长因子(BDNF)的表达,降低细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的表达;化合物 9714 15mg/kg、30mg/kg、60mg/kg 连续预防给药 30天,能明显改善获得性记忆障碍模型小鼠的学习记忆能力,并明显上调其海马中胆碱能M1 受体,同时具有明显上调 N 受体亚型 α7(Nα7)的作用趋势,与空白组相比有显着性差异,对 N受体亚型 α4无明显作用。2 化合物 9714 对局灶性脑缺血大鼠的保护作用 常用的脑缺血模型包括全脑缺血模型和局灶性脑缺血模型两大类。本实验采用 FeCl3化学敷贴法致大脑中动脉血栓形成(MCAT)模型及栓线法致大脑中动脉(MCA)缺血再灌注模型,观察化合物 9714 对脑缺血大鼠神经症状、脑梗塞范围、脑水含量、脑血流<WP=5>2 知母有效成分对脑缺血的保护作用及其机制研究量及多项生化指标的影响。结果显示,化合物 9714 20mg/kg、40mg/kg能明显缩小 MCAT模型大鼠的脑梗塞范围,改善其神经症状,并显着降低患侧脑水含量,改善脑水肿;化合物 9714 10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg 能显着减低脑组织表面滴加 FeCl3 致血栓形成模型大鼠造模后 50min 时的脑血流量下降幅度,并延长脑血流量下降 50% 所需时间;化合物9714 20mg/kg、40mg/kg 能明显降低栓线法致 MCAO 再灌模型大鼠脑组织中 MPO 活性、提高 T-SOD活性、降低 MDA含量,以及降低 T-NOS、i-NOS 活性、减少 NO含量。3 化合物 9714 对血栓形成、血小板聚集和血液流变学的影响 血栓形成是引起缺血性脑血管病及血栓栓塞性疾病的重要病理过程之一,与血管壁损伤、血液成分异常及血流动力学改变密切相关。研究表明,脑缺血后血小板激活,血液流变学异常,血栓易于形成。血小板活化是动脉血栓的起始因素,花生四烯酸代谢通路是其活化的重要途径之一。本实验采用动静脉旁路血栓形成模型,胶原、ADP 诱导血小板聚集模型,以及皮下注射肾上腺素加冰水浸泡致急性血瘀模型,观察了化合物 9714 对动静脉旁路血栓、血小板聚集、血液流变学以及花生四烯酸代谢通路的影响。结果表明,化合物 9714 10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg 能明显抑制动-静脉旁路血栓形成;明显抑制胶原、ADP 诱导的大鼠血小板聚集;明显降低急性血瘀模型大鼠全血粘度及血浆粘度,提高其红细胞变形性,降低红细胞聚集性;以及能明显降低 MCAO 再灌注模型大鼠血浆中TXB2/6-Keto-PGF1α 比值。同时体外实验中我们首次发现,化合物 9714 发挥血小板聚集作用的有效成分为其代谢产物(10-4, 10-5, 10-6 mol/L),而 9714 原药无此作用。这可能正是药效学实验中该药起效较慢,给药时间较长的原因之一。4 化合物 9714 对脑缺血再灌大鼠细胞因子、粘附分子、核因子 NF-κB 表达的影响 缺血性脑损伤与缺血再灌注后的炎症免疫反应密切相关。研究表明,细胞因子的释放、粘附分子的表达以及炎症免疫靶细胞的激活在脑缺血损伤过程中意义重大。本实验采用栓线法致 MCA 缺血再灌大鼠模型,通过双抗体夹心 ABC-ELISA 法以及免疫组化染色法研究化合物 971
姚磊[7]2004年在《HCMV感染血管内皮细胞和平滑肌细胞的生物学效应研究》文中进行了进一步梳理背景和目的： 动脉粥样硬化(AS)严重威胁人类健康，虽然大量的流行病学资料显示传统的危险因子是动脉粥样硬化的主要危险因素，但动脉粥样硬化仍然有许多潜在的病因亟待探索。一些研究表明病原微生物感染可能参与了动脉粥样硬化的发生发展，感染后的炎症反应在动脉粥样硬化的发生过程中发挥重要作用。自从Fabricant利用禽类疱疹病毒成功诱发鸡动脉粥样硬化以来，有关病毒感染与AS的关系逐渐受到人们重视，血清流行病学和分子生物学的研究资料表明，人类巨细胞病毒(HCMV)抗原及其DNA序列存在于AS的病灶组织，主要见于血管平滑肌细胞(SMCs)和内皮细胞(ECs)，且AS患者血清HCMV的抗体阳性率明显增高，提示HCMV的感染在AS的形成和发生发展过程中可能起重要作用。迄今为止，对于HCMV如何参与AS的发病机制尚缺乏深入的了解，病毒对体外靶细胞的作用可以反映病毒对体内细胞的直接作用，研究体外情况下HCMV感染后血管壁细胞的生物学效应，对阐明HCMV致AS机理具有非常重要的意义。 低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)是在AS病变部位SMC上表达的唯一脂蛋白受体，LRP结构或功能的紊乱可能是引发AS形成和发展的一个重要因素，LRP作为AS疾病的一个危险因子，其致病的主要原因可能是促发泡沫细胞的形成，HCMV感染后SMC的LRP表达及脂质代谢方面的变化及其机理是本课题重点研究内容。 如何调节和控制病毒对宿主细胞的作用是病毒性疾病治疗和预防的一个重要方面。HCMV的反义寡核苷酸(ASON)能与特定病毒基因互补，抑制该基因的复制、转录或翻译，达到抗病毒活性的目的。临床研究资料表明抗病毒药物更昔洛韦(ganciclovir)在拮抗HCMV和细胞相互作用方面有很好的作用，那么，体外情况下，更昔洛韦、ASON如何控制病毒蛋白及核酸代谢，如何在分子水平上调节宿主细胞的蛋白质合成与表达，开展有关这方面的研究将为AS的治疗和预防提供理论基础。 综上所述，我们设想：1、HCMV与ECs：①HCMV感染ECs可能导致细胞形态改变，引起通透性改变和内皮完整性的变化；②、感染后的细胞功能可能发生改变，进一步导致血小板及单核细胞在内皮的粘附；③感染性病毒颗粒的释放可能成为侵袭第叁军医大学博士学位论文SMC的病毒来源。2、HCMV与SMC:①HCMV感染SMC可能导致感染细胞的增殖;②HCMv所诱导的转化作用可能会导致SMC表面L即活性的异常表达，进而引起宿主细胞脂质代谢的改变;③HCMV病毒感染可能对SMC粘附分子表达产生影响;④外源性更昔洛韦、HCMV的ASON对IE基因和L基因，SMC的LRP表达、TG和TC的代谢产生影响。 基于以上设想，拟主要观测:①感染细胞形态、脂质代谢变化，主要包括IE基因、L基因变化、粘附分子改变。②感染细胞表面LRP变化及细胞脂质代谢、病毒核酸代谢、病毒抗原表达;③更昔洛韦、HCMV的ASON作用后平滑肌细胞IE基因及LRP表达等方面的变化，④从分子水平调查CHD患者HCMV的感染状况。探讨以上内容的变化特点和规律，在细胞和分子水平上阐述HCMV致血管壁细胞的生物学效应，为HCMV致AS发病机理的研究及其治疗和预防提供一定的理论基础。 方法和技术路线: 1.采用HCMV AD169株感染体外培养的血管内皮细胞和平滑肌细胞，建立HCMV的细胞感染模型。 2.对于血管内皮细胞的感染模型，主要运用荧光显微镜观测病毒抗原的表达，荧光定量PCR方法动态观测病毒DNA代谢变化，ELISA和细胞ELISA方法检测感染细胞粘附分子(sI以M一1、V以M一l)的变化，流式细胞仪动态测定HEC感染后的凋亡状况，化学法测定ECs感染后的ATP酶活性的改变。 3.对于平滑肌细胞体外感染模型，实验分四组(对照组;感染组;更昔洛韦作用组;反义寡核昔酸作用组)，主要应用RT一PCR方法和细胞EL工SA观测不同因素作用后LRP一mRNA和蛋白的表达，微量化学分析法测定细胞内脂质的改变，应用PCR方法检测HCMV的工E基因、L基因的变化规律，常规法观测SMC增殖指数的变化。 4.为验证HCMV感染对冠状动脉粥样硬化的效应，运用ELISA和捕捉EL工SA法、放射免疫分析技术、定量PCR技术检测了经冠脉造影确诊的119例CHD患者血清HCMV一IgM、IgG抗体、HCMV一DNA、血清ET、TNF和hs一CRP的水平。 5.各项指标以均数士标准差(万士s)表示，两组均值间比较用t检验，各组间率的比较采用了检验，统计学处理均在计算机上用Origan软件完成。P<0 .05表示有显着性差异。第叁军医大学博士学位论文 主要结果: 一、H哪V对体外培养血管内皮细胞的作用 1.感染的ECS内存在病毒抗原表达:感染的细胞胞浆内出现片状或颗粒性黄绿色荧光。 2.病毒增殖动态:HCMV感染后12小时即可检测到病毒，以后病毒滴度逐渐上升，48小时病毒增殖达高峰，随后缓慢下降。 3.感染细胞形态变化:感染后24小时未见明显改变，48小时后细胞胞浆可见微泡样结构，核旁空泡及大量空泡出现。电镜结果显示，48小时可见线粒体肿胀、内质网扩张、溶酶体和高尔基体增生感染72小时可见次级溶酶体增多，线粒体肿胀，脊呈空泡样，感染24小时后，相继发现粗颗粒病毒样包涵体、病毒样颗粒、巨大的细颗粒病毒样包涵体。
张育瑆[8]2012年在《重症失血性休克及复苏条件下大鼠VAP-1表达规律及调控机制研究》文中研究说明【背景】基于目前重度失血性休克救治中靶向治疗手段的缺乏，以及创伤失血性休克相关基础研究与临床的脱节，急切需要我们重新审视已知对创伤失血性休克病理的认识。前期，我们在一种相对接近临床的肝左外叶切除+2.5ml/100g（体重）的大鼠创伤失血性休克模型上，摸索到24小时死亡率接近50%的干预条件，之后对存活和死亡大鼠失血前肝脏进行表达谱基因研究，筛查出约100个差异基因，随后对这些差异基因进行调控网络分析。数据表明有18个基因参与了这些差异基因的网络调控，结合专业知识，AOC3基因由于其编码蛋白具有细胞粘附功能及SSAO活性而进入我们视野。AOC3基因所编码的蛋白是一个由763个氨基酸组成的含铜胺氧化酶(CAOs)，称为VAP-1。VAP-1是一种具有双重功能的蛋白。一方面作为内皮细胞粘附因子（VAP-1）可诱导白细胞粘附至血管内皮；另一方面作为胺氧化酶（SSAO）可催化芳香族和脂肪族的伯胺类物质转化成相应的醛类，并产生H2O2和NH3。通过文献复习我们发现VAP-1蛋白的功能与重症休克期微循环障碍及血管反应性降低有密切联系。因此我们认为VAP-1在重症休克病理过程中可能具有重要意义，有必要进行研究阐明，以期为临床救治重症休克提供一种新的治疗手段。【目的】1、明确大鼠定压失血性休克-复苏过程中肝脏组织AOC3基因及其编码蛋白VAP-1表达的变化规律；2、明确大鼠定压失血性休克-复苏过程中血液中sVAP-1含量及SSAO酶活性的变化规律；3、构建AOC3过表达腺病毒载体，为下一步体外功能实验奠定基础；4、检测AOC3过表达重组腺病毒对大鼠肝血窦内皮细胞的转染作用；5、明确低氧环境中大鼠肝血窦内皮细胞AOC3基因及其编码蛋白VAP-1的表达规律。【方法】1、大鼠定压失血性休克模型的建立；2、通过大鼠定压失血性休克模型在休克-复苏过程中的既定时间点采集大鼠肝脏组织标本，通过Real-time PCR、Western-Blot及免疫组化等方法检测休克-复苏各阶段AOC3基因及其编码蛋白VAP-1的表达情况；3、通过大鼠定压失血性休克模型采集大鼠休克-复苏既定时间点的外周血，使用ELISA法及分光光度计分别检测休克-复苏过程不同阶段sVAP-1含量及SSAO酶活性；4、AOC3过表达腺病毒载体的设计、构建、病毒包装、大量扩增、浓缩及滴定测定，用腺病毒转染大鼠肠微血管内皮细胞并测定MOI值；5、用重组腺病毒及空病毒转染大鼠肝血窦内皮细胞，并通过降低细胞培养箱氧浓度制造低氧环境。使用Real-time PCR、Western-Blot检测大鼠肝血窦内皮细胞在腺病毒转染前后在常氧条件及低氧条件下其AOC3基因及编码蛋白VAP-1的表达情况。【结果】1、建立了稳定的大鼠定压失血性休克模型；2、在定压失血性休克-复苏过程中，Real-time PCR结果显示肝脏组织AOC3基因表达量休克组显着高于复苏组及对照组，复苏组显着高于对照组；3、在定压失血性休克-复苏过程中， Western-blot结果显示在肝脏组织VAP-1/GAPDH蛋白浓度比值休克组显着高于复苏组及对照组，复苏组明显高于对照组；4、大鼠定压失血性休克-复苏过程中，ELISA定量结果显示血清中sVAP-1含量休克组显着高于复苏组及对照组，复苏组显着高于对照组。SSAO酶活性测定结果显示血清中酶活性休克组显着高于复苏组及对照组，复苏组显着高于对照组；5、成功建立AOC3过表达腺病毒载体（pIRES-EGFP-AOC3），重组腺病毒感染大鼠肠微血管内皮细胞的MOI值选取5-10为最佳；6、在常氧及低氧培养条件下，Real-time PCR结果均显示大鼠肝血窦内皮细胞经重组腺病毒转染后其AOC3表达量显着高于转染前，而该细胞经空病毒转染前后的AOC3表达量无显着差异。Western-blot结果显示相同的趋势；7、Real-time PCR结果显示无论大鼠肝血窦内皮细胞是否经重组腺病毒或空病毒转染，在低氧培养条件下其AOC3表达量均显着高于常氧培养条件。Western-blot结果虽然显示相同的趋势，但差异并不如Real-time PCR结果显着。【结论】1、体内试验证实大鼠重症休克病程中肝脏组织及血清中VAP-1的含量升高，血清中SSAO酶活性增强，而随着复苏的进行，各组织中VAP-1含量及SSAO酶活性均有下降趋势。2、AOC3过表达腺病毒载体构建成功。在常氧或厌氧条件下，大鼠肝血窦内皮细胞经AOC3过表达重组腺病毒转染后其AOC3基因及编码蛋白VAP-1表达量均有明显上升。3、在大鼠肝血窦内皮细胞经AOC3过表达重组腺病毒转染前后，其在低氧条件下AOC3的表达量均明显高于常氧状态下。其编码蛋白VAP-1表现同种趋势，然而该变化不如基因层面明显。
李贵才[9]2012年在《Ti表面共固定肝素和纤连蛋白分子：复合生物功能化的实现》文中指出心血管植入材料面临的最主要的问题是凝血和血栓发生,因此提高这类生物材料的生物相容性是非常重要和有意义的。目前,通过物理或者化学的方法在材料表面固定抗凝和促内皮细胞粘附的生物分子已经被证实能够较好的抑制血栓发生和促进内皮化,但是多数研究都集中在改善血液相容性或者加速内皮化的某一方面,还很少有同时兼顾抗凝和促内皮化表面构建的研究,而且基本未见有同时兼顾多种生物学功能表面构建的报道。本文选择具有较好生物相容性的Ti作为改性基础,主要采用两种不同的生物化修饰方法在其表面同时固定具有抗凝和促内皮化的生物分子：肝素和纤连蛋白。首先研究了Ti表面肝素和纤连蛋白的层层自组装(LBL),并对自组装膜的生物相容性进行了评价；其次,在此基础上,发展出了单分子自组装肝素和纤连蛋白的方法,借助APTE硅烷化单层以及静电吸引力的作用,在Ti表面构建肝素/纤连蛋白(Hep/Fn)复合生物膜,并对实验条件进行优化。研究了在不同pH (pH7, pH4)以及在有无EDC催化下的Hep/Fn复合生物膜的稳定性和生物功能性,包括血液相容性、内皮细胞相容性、炎症相容性以及抗平滑肌细胞增生性能。最后对所构建的Hep/Fn复合生物膜的生物学功能的机理进行了探讨。综合采用石英晶体微天平(QCM-D)、水接触角分析、傅立叶变换红外光谱(FTIR)、酶联免疫吸附实验(ELISA)、免疫荧光染色分析、扫描电子显微镜(SEM)、原子力显微镜(AFM)、X射线光电子能谱(XPS)等方法对Hep/Fn复合膜的制备过程、生物学活性、成分和性质分别进行了定性和定量表征；通过血小板粘附和激活实验、凝血时间(APTT、PT)实验、纤维蛋白原吸附和变性检测、内皮细胞培养实验、巨噬细胞和细胞因子检测实验以及平滑肌细胞培养实验,全面评价了所构建的复合膜的生物相容性。并通过体外PBS浸泡法以及流动腔实验对制备的复合膜的稳定性以及血小板粘附和内皮细胞附着力进行了初步评价；最后综合借助酶联免疫吸附法、电化学法和等温滴定量热的方法对相关机理问题进行了初步研究。全文主要结果如下：1.肝素和纤连蛋白可以LBL方式组装在Ti表面且具有一定的稳定性和较好的血液相容性。但是Hep/Fn自组装膜的内皮细胞相容性略差,可能是因为多层膜中肝素的释放所致。LBL构建的多层膜中生物分子释放的控制对于其生物学功能的实现是重要的决定条件。2.获得了血液相容性和内皮细胞相容性均较好的pH4体系下构建的Hep/Fn复合表面。定量及定性表征显示,尽管肝素和纤连蛋白在不同构建体系(pH7,pH4,EDC/NHS)下样品表面的量无显着差异,但是pH4下肝素结合ATIII的能力最好,纤连蛋白细胞结合位点(RGD)的暴露最多,因此复合物中的生物分子均保持了较好的生物活性,这也是导致后续生物学实验结果差异的主要原因之一。3.在pH4条件下形成的Hep/Fn复合膜具有较好的稳定性和生物活性。流动状态的下证实此复合生物膜具有较好的血液相容性,且表面粘附的内皮细胞具有较高的稳定性,这为将来的体内应用提供了重要的参考依据。4.培养内皮细胞和巨噬细胞后的Hep/Fn修饰的样品上的细胞因子表达(TNF-a, MCP-1和IL-1B)要比纯Ti上面的低,共固定Hep/Fn复合物可以减少巨噬细胞的粘附量,从而可以明显的提高材料的抗炎症性能；而且,Hep/Fn复合物可以有效的抑制平滑肌细胞的迁移和增殖,从而抑制植入材料上的内膜增生,但是却不会影响内皮细胞的粘附和生长。研究发现,Hep/Fn复合物促进内皮化和抑制平滑肌细胞增生的机制不同,其机制跟肝素结合到纤连蛋白上导致纤连蛋白构象变化有关。5.综合利用酶联免疫法、电化学和等温滴定量热法研究了不同pH体系下构建的Hep/Fn表面的肝素和纤连蛋白的生物学活性,并对两种分子的相互作用进行了分析,对样品表面吸附血浆蛋白行为进行了综合分析和比较,同时也研究了肝素和纤连蛋白在溶液中的相互作用过程。获得了对前期不同pH条件下Hep/Fn复合物不同生物学行为较好的解释,对于深入了解不同pH条件下的Hep/Fn表面的不同生物学行为具有十分重要的参考意义和价值。
张丹[10]2011年在《FSH对子宫内膜的影响和调控机制》文中研究表明第一部分FSH促排卵对人子宫内膜AQPs和容受因子的影响目的：验证FSHR在人子宫内膜组织和内膜细胞系Ishikawa细胞的表达,探讨FSH促排卵对人子宫内膜形态、FSHR、AQPs和内膜容受因子表达的影响。材料与方法：收集促排卵(COS)妇女着床窗期子宫内膜15例、同期对照内膜40例,采用化学发光法检测血清FSH和E2水平；采用RT-PCR产物纯化克隆测序、蛋白免疫印记、免疫组织化学、细胞免疫荧光等方法全面验证人子宫内膜组织和细胞FSHR的表达。电镜观察两组子宫内膜形态和超微结构；蛋白免疫印记方法检测两组子宫内膜FSHR、水通道蛋白(AQP1、AQP2、AQP8)、内膜容受因子(Integrinβ3、LIF)、细胞紧密连接相关蛋白(Claudin4)的表达与改变。结果：人子宫内膜组织和子宫内膜细胞系Ishikawa细胞表达FSHR mRNA和蛋白,RT-PCR产物序列与NCBI数据库BLAST比对吻合率100%；蛋白表达主要定位于细胞膜和细胞浆COS妇女血清FSH和E2水平显着高于对照组。扫描电镜下见对照组内膜腔上皮排列有序、胞饮突形成,COS组内膜腔上皮细胞排列分布紊乱、未见明显胞饮突；透视电镜见COS组内膜上皮细胞凋亡增加,细胞紧密连接未见明显改变。COS组内膜组织FSHR蛋白表达显着上调,AQP1、AQP2、AQP8、Integrinβ3、LIF蛋白表达显着下调,Claudin4表达无显着改变。结论：FSHR表达于人子宫内膜组织和子宫内膜细胞系Ishikawa细胞。促排卵妇女血清FSH和E显着升高,内膜FSHR表达上调、AQP1、AQP2、AQP8、Integrinβ3、LIF蛋白表达下调,并致内膜腔上皮形态改变、凋亡增加。FSH可能通过FSHR直接调节育龄期子宫内膜形态和功能。第二部分FSH影响育龄期子宫内膜容受性的调控机制目的：以动物模型和体外模型为基础,研究FSH对育龄期子宫内膜容受性、胚胎着床的影响及可能机制。材料与方法：建立FSH促排卵小鼠动物模型,检测外源性FSH刺激对小鼠血FSH/E2水平、子宫内膜AQPs和着床容受因子、妊娠率和活产率的影响,创新性建立小鼠囊胚粘附模型、检测FSH/E2、PCMB (AQP抑制剂)预处理子宫内膜细胞对囊胚粘附着床的影响；同时进行体外细胞实验,采用RT-Real time PCR检测FSH/E2对AQPs、integrinB3、LIF等容受因子目的基因表达水平；采用ssiRNA干扰技术和JAr滋养细胞球粘附模型,检测AQP2/AQP8siRNA干扰后内膜容受因子的表达改变和JAr滋养细胞球粘附率的改变。结果：FSH促排卵组小鼠血FSH/E2水平显着增高,内膜AQP3、AQP2蛋白表达呈下调趋势、FSHR呈微弱上调趋势,妊娠率和活产率显着低于对照组。小鼠囊胚粘附模型实验显示,体外FSH、FSH/E及PCMB预处理子宫内膜细胞均导致囊胚48h和72h粘附率显着下降。E2对IK细胞AQP2和AQP8 mRNA呈浓度依赖性上调作用,FSH (0、1、3、10、30 IU/L)对IK细胞AQP2、AQP8和LIF mRNA呈浓度依赖性和时间依赖性下调作用,其中以10IU/L和301U/L浓度FSH在作用48hr时的下调作用最为显着。AQP2siRNA干扰后IK细胞着床因子LIF和Integrinβ3表达显着下调,OLFM1表达显着上调；AQP8siRNA干扰后LIF表达显着下调,OLFM1表达显着上调。子宫内膜细胞AQP8siRNA和AQP2siRNA干扰后,JAr滋养细胞团粘附率均显着下降。结论：超生理水平FSH通过下调育龄期子宫内膜AQPs、干扰内膜容受因子表达,进而影响子宫内膜对胚胎的容受性、不利于胚胎着床。第叁部分长期高FSH刺激对围绝经期子宫内膜萎缩的影响目的：通过在体组织、动物模型和体外细胞模型,探讨绝经后高FSH水平在子宫内膜功能及萎缩中所起的作用及其机制。材料与方法：采用化学发光法检测围绝经期和绝经后不同年龄段妇女血清FSH、LH、E2变化动态,免疫组织化学方法检测绝经后妇女和育龄期妇女子宫内膜FSHR、Ki67、AQP1、AQP2、AQP8蛋白表达。采用MTT法检测FSH对人原代培养子宫内膜腺上皮细胞和Ishikawa细胞增殖的影响,流式细胞仪检测FSH对Ishikawa细胞周期的影响,Real time PCR检测高浓度FSH对子宫内膜细胞AQP2和AQP8表达的影响、并检测AC激动剂和拮抗剂对FSH作用的影响。建立手术去势动物模型、药物去势动物模型和假手术(对照)动物模型,通过RIA方法检测血FSH和E2水平,采用透视电镜观察子宫内膜细胞形态和凋亡指征、Western blotting检测子宫内膜增殖和凋亡相关指标。结果：绝经后妇女血清FSH水平随年龄从41-50岁年龄段到61-70年龄段呈逐步上升,从61-70年龄段到71-80年龄段无显着上升。血清E2水平呈现与FSH同步的反向变化。与育龄期内膜相比,绝经后子宫内膜FSHR、AQP2和AQP1蛋白表达无显着改变,Ki67表达显着下降, AQP8蛋白间质表达较育龄期增高、腺体表达较育龄期降低。FSH对原代子宫内膜腺上皮细胞呈浓度依赖性的抑制增殖作用,但对Ishikawa细胞增殖和细胞周期无明显影响。高浓度FSH(50IU/L、100IU/L、200IU/L、400IU/L)呈浓度依赖性显着上调Ishikawa细胞AQP2 mRNA的表达,该上调作用可部分被SQ22536所拮抗。Forskolin可上调Ishikawa细胞AQP2 mRNA的表达。动物模型实验方面,成功建立了手术去势(OVX,高FSH、低E2)、药物去势(GnRHa,低FSH、低E2)和假手术对照组(SHAM, FSH和E2水平如常)小鼠。OVX组小鼠子宫萎缩明显、透视电镜下见大片凋亡细胞和散在凋亡小体,而GnRHa组小鼠子宫大小、萎缩度及细胞凋亡现象介于SHAM组和OVX组之间。与SHAM组相比,GnRHa组小鼠子宫C-FOS、C-JUN、Bcl-2蛋白表达量呈下降趋势。与SHAM组和GnRHa组相比,OVX组小鼠子宫C-FOS、C-JUN、Bcl-2蛋白表达显着下降,而Caspase3蛋白的表达显着增高。结论：绝经后循环高FSH水平可通过腺苷酸环化酶通路上调子宫内膜AQP2,抑制子宫内膜增殖、促进子宫内膜细胞凋亡,协同低E调节子宫内膜生理性萎缩。
参考文献：
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[9]. Ti表面共固定肝素和纤连蛋白分子：复合生物功能化的实现[D]. 李贵才. 西南交通大学. 2012
[10]. FSH对子宫内膜的影响和调控机制[D]. 张丹. 浙江大学. 2011