导读:本文包含了牛视网膜微血管周细胞论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:视网膜,细胞,微血管,内皮,糖尿病,活性氧,加味。
牛视网膜微血管周细胞论文文献综述
葛慧敏[1]（2019）在《环状RNA-PWWP2A介导的周细胞—内皮细胞Crosstalk在糖尿病性视网膜微血管病变中的作用及其机制研究》一文中研究指出研究目的:糖尿病性视网膜病变(Diabetic Retinopathy,DR)是常见的致盲性糖尿病相关微血管病变。环状RNA(Circular RNA,circRNAs)是一组参与多种生理和病理过程的非编码RNA。本研究拟运用circRNAs微阵列芯片分析技术,观察DR模型动物视网膜组织中circRNAs的表达特征,并通过体内、外实验探究其在糖尿病性视网膜微血管病变中的调控作用,为DR的治疗提供新思路。研究方法:1.利用circRNAs微阵列芯片筛查DR模型小鼠视网膜组织中差异性表达的circRNAs,通过qRT-PCR随机验证20条表达上调和20条表达下调超过3倍的circRNAs,筛选表达上调最显着的环状RNA-PWWP2A并验证其在DR模型小鼠视网膜组织中的表达规律。2.体内实验中,通过上调或下调DR模型小鼠视网膜组织中cPWWP2A的表达量,利用Evans Blue荧光渗漏实验、ELISA法、视网膜平铺片免疫荧光染色法和胰酶消化视网膜平铺片联合PAS染色法明确cPWWP2A在DR微血管病变中的调控作用。3.体外实验中,利用cPWWP2A siRNA使周细胞内cPWWP2A表达降低,通过细胞免疫荧光法、Ki67细胞增殖实验、PI荧光染色和Caspase 3/7活性检测研究cPWWP2A表达量改变对周细胞功能的影响;血管生成联合CD31/NG2细胞免疫荧光染色法和血管内皮细胞功能屏障实验研究周细胞内cPWWP2A表达降低后对血管内皮功能的影响。4.通过生物信息分析、RNA荧光原位杂交技术(RNA Fluorscence In Situ Hybridization,RNA-FISH)、双荧光素酶基因报告和RNA-Pulldown实验明确cPWWP2A与miR-579的靶向结合。并在体内、外实验中通过改变cPWWP2A/miR-579表达量,利用视网膜平铺片免疫荧光染色法、胰酶消化视网膜平铺片联合PAS染色法、Evans Blue荧光渗漏实验、细胞免疫荧光法、Ki67细胞增殖实验、PI荧光染色和Caspase 3/7活性检测研究cPWWP2A/miR-579表达对视网膜微血管病变和周细胞功能的影响。运用双荧光素酶基因报告实验分析miR-579对血管生成素1(Angiopoietin 1,Ang 1)、Occludin和沉默信息调节因子2相关酶l(Silent mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT 1)的靶向作用。研究结果:1.circRNAs微阵列芯片筛查共发现884种circRNAs的表达较正常对照组有明显的差异,其中有433种circRNAs表达上调,411种circRNAs表达下调。对于随机挑选的circRNAs进行qRT-PCR验证发现分别有14个表达上调和16个表达下调的circRNAs变化趋势与微阵列分析结果一致。其中有3条circRNAs表达显着上调,比较同源序列的概率后选择环状RNA PWWP2A作为本研究的靶点。2.体内实验中,沉默DR模型小鼠视网膜组织中cPWWP2A的表达后,Evans Blue荧光渗漏实验发现血管渗漏明显增加;ELISA法检测白介素(Interleukin,IL)-2、IL-6、肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor,TNF-α)、血管内皮生长因子(Vascular endothelial factor,VEGF)和人单核细胞趋化因子(Human monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)含量均增高;视网膜平铺片免疫荧光染色显示周细胞表面特异性标志物NG2表达量减少;胰酶消化视网膜血管平铺片联合PAS糖原染色结果显示异常形态的血管数量增多。而过表达cPWWP2A后,通过上述实验发现视网膜血管管壁渗漏减少、周细胞在视网膜血管网的覆盖率增大且异常形态的血管数量减少。3.体外实验中,通过敲低周细胞内cPWWP2A的表达,结果发现周细胞表面特异性标志物表达水平明显下降;Ki67细胞增殖实验发现细胞核内增殖信号明显减少;PI荧光染色和Caspase 3/7活性检测周细胞凋亡水平升高;血管生成实验及CD31/NG2免疫荧光染色实验发现周细胞向内皮细胞的趋附力减弱;内皮细胞屏障功能检查中发现内皮细胞间屏障被破坏。4.分子机制研究中,首先通过RNA-FISH、双荧光素酶基因报告和RNA-Pulldown实验明确了cPWWP2A与miR-579共表达于胞质并可互相结合。其次,在体内、外实验中过表达miRNA-579后发现周细胞表面标记物的表达降低;Ki67细胞增殖实验发现周细胞增殖力降低;PI染色和Caspase 3/7活性检测实验发现周细胞的凋亡水平增高;血管生成及CD31/NG2免疫荧光染色实验发现周细胞向内皮细胞的趋附力减弱。而共转染miRNA-579和cPWWP2A后,细胞增殖力较单独转染miRNA-579组明显增高、凋亡水平明显下降及周细胞趋附力减弱。而拮抗miR-579表达后,上述实验现象均明显改善。最后,通过双荧光素酶基因报告实验明确了Ang 1、Occludin和SIRT 1是cPWWP2A/miR-579调控轴的下游靶基因。研究结论:1.本项研究发现,cPWWP2A与DR具有明显相关性。在体内、外高糖环境下,cPWWP2A的表达水平均显着上调。2.动物实验表明,cPWWP2A表达沉默加重了糖尿病性视网膜微血管病变的过程。3.细胞实验表明,cPWWP2A表达沉默加重了周细胞功能的损伤,并导致周细胞-内皮细胞间Crosstalk的异常。4.cPWWP2A通过海绵样吸附miRNA-579以发挥ceRNA的作用,导致下游靶基因Angiopoietin 1/Occludin/SIRT 1表达的增加,进而参与调控周细胞功能及周细胞与内皮细胞间Crosstalk。(本文来源于《南京医科大学》期刊2019-04-01）
黄草心,杨晨,徐玉雪,刘素嬛,李学军[2]（2017）在《炎症环境下视网膜微血管周细胞的应答方式和调控机制》一文中研究指出目的糖尿病视网膜病变是糖尿病最常见的并发症之一,其病变机制较为复杂且并不明确。临床上将微血管病变作为糖尿病视网膜病变的主要诊断依据,其中微血管周细胞的丢失是糖尿病视网膜血管病变的重要标志之一,以凋亡为主要方式,严重破坏了血-视网膜屏障的完整性。我们提出周细胞的功能可能在维护视网膜血管的稳定性方面也起到了重要作用,其功能的改变可能发生在周细胞发生丢失之前。此外,慢性炎症是糖尿病视网膜早期病变的特点之一,我们在本研究中主要关注炎症环境中,视网膜微血管周细胞的应答方式和调控机制。方法本研究主要选取原代小鼠视网膜周细胞,给予炎症刺激并采用ELISA、qPCR等方法检测周细胞的分泌因子的mRNA水平和蛋白水平;采用Western Blot和qPCR方法检测周细胞本身的收缩功能和与内皮细胞相互作用的能力;采用Transwell方法检测周细胞分泌因子对小胶质细胞的影响;最后联合抑制剂检测介导调控周细胞分泌因子变化的关键通路。结果研究发现,在IL-1β模拟的炎症刺激下,小鼠视网膜周细胞可大量表达促炎因子、趋化因子、血管新生因子以及迁移蛋白等,同时下调抑制血管新生因子、收缩蛋白以及与内皮细胞的相互作用的连接蛋白;同时视网膜周细胞分泌的趋化因子可显着趋化小胶质细胞;STAT3抑制剂Stattic和CPT的使用可有效阻断相关分泌蛋白的显着上调。结论本研究认为,周细胞除了以凋亡的方式直接损伤血-视网膜屏障的完整性和稳定性,其在炎症环境下可通过激活炎症因子的表达、抑制自身的收缩功能以及与内皮细胞的相互作用直接损伤血-视网膜屏障以及整体视网膜微环境的稳定性。因此,周细胞功能损伤对糖尿病视网膜病变的发生发展具有重要的意义,也为抗炎治疗糖尿病视网膜病变的治疗方式提供了一定的理论支持。(本文来源于《中华中医药学会糖尿病分会2017年学术年会暨第十八次中医糖尿病大会论文汇编》期刊2017-08-25）
刘琦,于佩[3]（2017）在《高糖对牛视网膜微血管周细胞P2X7及其下游活性氧簇、ATP产生和IL-6释放的影响》一文中研究指出目的观察高糖对牛视网膜微血管周细胞(BRPs)P2X7及其下游活性氧簇(ROS)、ATP产生和IL-6释放的影响。方法将原代牛视网膜微血管周细胞分为4组:正常葡萄糖组(NG组,5.5 mmol/L葡萄糖),高糖组(HG组,30 mmol/L葡萄糖),NG+A438079组(P2X7受体拮抗剂A438079 HCl+5.5 mmol/L葡萄糖),HG+A438079组(P2X7受体拮抗剂A438079 HCl+30 mmol/L葡萄糖),分别检测P2X7受体的mRNA表达、蛋白表达水平及NG组和HG组加入P2X7受体激动剂前后ROS、ATP、IL-6的变化。结果高糖干预后,P2X7受体表达上调(P<0.05),ROS的产生、ATP消耗和IL-6释放均增多(P<0.05)。阻断P2X7后,ROS产生、ATP消耗和IL-6的释放显着减少(P<0.05)。结论高糖可经P2X7受体调节BRPs中ROS生成、ATP的产生和IL-6的释放。(本文来源于《临床合理用药杂志》期刊2017年22期）
李依依[4]（2016）在《高糖经p38 MAPK途径调节视网膜微血管周细胞P2X7受体表达及炎症介质释放》一文中研究指出目的:选择性提取并鉴定原代牛视网膜微血管周细胞(BRPs),并选取P2或P3代BRPs为细胞模型来探讨高糖对BRPs P2X7受体表达及其下游p38 MAPK信号通路的激活,以及细胞炎性介质和粘附分子mRNA表达的作用和机理;并探讨视网膜微血管周细胞内的P2X7受体及其下游p38 MAPK信号通路之间是否存在相互影响。为糖尿病视网膜病变的早期防治提供新的实验证据和干预靶点。方法:1.将匀浆后的视网膜组织碎片,经250目细胞过滤膜过滤后,收集滤过的组织碎片,并利用I型胶原酶消化后再分别利用100目及300目的细胞过滤膜过滤,收集下层细胞,即可提取得到原代的牛视网膜微血管周细胞,并采用倒置相差显微镜观察视网膜毛细血管周细胞的形态。2.采用免疫细胞化学染色法,利用神经元-胶质抗原2(NG2)及波形蛋白(Vimentin)来进行牛视网膜微血管周细胞的鉴定。3.分别用5.6mM正糖,30mM高糖干预BRPs 24h;再分别加入100uM P2X7受体特异性激动剂BzATP干预1h;100uM P2X7受体拮抗剂A438079Hcl预干预BRPs 1h后再分别加用正糖及高糖干预BRPs 24h;10uM p38 MAPK信号通路阻断剂SB203580预干预BRPs 24h后分别采用正糖和高糖干预BRPs 24h。然后分别检测P2X7受体的mRNA表达以及蛋白的表达的水平,并检测高糖、BzATP及A438079Hcl干预后p38 MAPK信号通路关键蛋白的磷酸化水平,明确高糖对P2X7受体表达的影响,以及P2X7受体与其下游p38 MAPK信号通路之间的相互作用;同时检测各组炎症因子IL-6及粘附分子ICAM-1的mRNA表达水平。结果:1.采用胶原酶消化牛视网膜组织团块,并且利用细胞筛网选择性过滤分离,可获得具有良好活性,并且可传代培养的原代视网膜微血管周细胞。周细胞在原代培养1天后,可见细胞贴壁生长且细胞状态良好;大量细胞于接种培养3-5天后从培养皿底迁移长出;5-7天后可见视网膜微血管周细胞呈长梭形生长并形成较大的克隆;8-11天后长成短梭形的周细胞逐渐呈融合形态,呈重迭生长。传代培养后,1小时周细胞贴壁。平均5-7天左右能够传代一次。原代牛视网膜微血管周细胞传代到第3代(P3)后逐渐开始出现老化状态。2.牛视网膜微血管周细胞阳性表达神经元-胶质抗原2(Neuron-glial antigen 2,NG2)和波形蛋白(Vimentin);且阳性率大于98%。3.与对照组相比,高糖干预BRPs 24h后,高糖组周细胞膜上P2X7受体的mRNA和蛋白表达量均见明显增加(均P<0.05)。4.用P2X7受体特异性激动剂BzATP分别干预正糖及高糖培养24小时后的周细胞,干预1小时后可见,高糖+BzATP组的IL-6及ICAM-1的mRNA表达水平较对照组及高糖组明显上调,差异具有统计学意义(均P<0.05)。5.拮抗P2X7受体后,高糖+A438079Hcl组的周细胞其IL-6及ICAM-1的mRNA表达水平较高糖组明显降低(均P<0.05)。6.与对照组相比,高糖组周细胞p38 MAPK信号通路关键蛋白的磷酸化水平表达增加(均P<0.05)。7.用A438079Hcl拮抗P2X7受体后可见,高糖+A438079Hcl组的p38 MAPK信号通路的磷酸化蛋白表达水平较高糖组明显降低(均P<0.05)。8.用SB203580预干预周细胞24小时后见,高糖+SB203580组的P2X7受体表达量较高糖组明显降低;且高糖+SB203580组的IL-6及ICAM-1的mRNA表达水平较高糖组明显降低(均P<0.05)。结论:1.经I型胶原酶消化,并分别利用250目、100目及300目的细胞筛网,选择性过滤分离视网膜组织后,所得细胞能持续培养并可传代,经细胞鉴定显示已成功分离出BRPs,且细胞纯度良好。2.第二代和第叁代周细胞的生长状态能更好的适应于后续实验。3.P2X7受体拮抗剂能抑制高糖所致的p38 MAPK信号通路的磷酸化蛋白表达以及IL-6和ICAM-1的合成;而阻断p38 MAPK信号通路能抑制高糖所致的P2X7受体表达上调及IL-6和ICAM-1的合成。提示P2X7受体及其下游P38 MAPK信号通路互相影响并介导了高糖所致的视网膜周细胞炎性微环境的形成,共同参与构成了高糖-P2X7受体-P38 MAPK通路激活-炎性因子和粘附分子合成增多的恶性循环。(本文来源于《天津医科大学》期刊2016-05-01）
曾凯宏,明建,杨娜,余雪梅,宋怡[5]（2014）在《高糖诱导大鼠视网膜微血管周细胞Ang-2/Tie-2系统表达改变及牛磺酸的防护效应研究》一文中研究指出目的通过检测牛磺酸对高糖培养大鼠视网膜微血管周细胞(retinal microvascular pericytes,RMPs)中血管生成素-2(Angiopoietin-2,Ang-2)/Tie-2系统表达的影响,探讨其防护糖尿病视损伤的机制。方法高糖培养大鼠RMPs,实验分正常对照组(Con,5mM D-glucose)、低剂量牛磺酸对照组(Con+0.1mM Tau)、中剂量牛磺酸对照组(Con+1mM Tau)、高剂量牛磺酸对照组(Con+10mM Tau)、甘露醇渗透对照组(Con+mannitol)、高糖组(HG,25mM D-glucose)、低剂量牛磺酸干预高糖组(HG+0.1mM Tau)、中剂量牛磺酸干预高糖组(HG+1mM Tau)、高剂量牛磺酸干预高糖组(HG+10mM Tau)、甘露醇高糖对照组(HG+mannitol)。用免疫细胞荧光双标鉴定大鼠RMPs,用荧光定量PCR技术和ELISA技术检测大鼠RMPs中Ang-2/Tie-2系统表达。结果高糖培养后,大鼠RMPs中Ang-2表达明显增加,Tie-2及磷酸化Tie-2明显降低,牛磺酸干预明显降低高糖组Ang-2表达,明显增加高糖组Tie-2及磷酸化Tie-2水平,呈剂量依赖关系。结论牛磺酸经调节Ang-2/Tie-2系统表达抑制糖尿病引起的视损伤。(本文来源于《成都医学院学报》期刊2014年05期）
杨密清,刘光辉,王航,黄陈稳,郑永征[6]（2014）在《初断乳大鼠视网膜微血管周细胞的分离培养》一文中研究指出探讨、优化初断乳大鼠视网膜微血管周细胞(retinal microvascular pericytes,RMPs)的分离、培养方案。分别从15只初断乳大鼠及15只成年大鼠中剜取眼球,采用眼科显微手术器械分离获取视网膜,经碎化、消化、过滤处理,收集视网膜微血管片段,予接种培养。MTT法测绘RMPs生长曲线,通过倒置显微镜观察RMPs形态,免疫荧光法鉴定周细胞标记物。比较2组之间视网膜分离操作时间、完整性、原代细胞数量、周细胞形态和表面标记物表达。结果显示,初断乳大鼠视网膜均成功分离,其中24眼视网膜呈整片分出,6眼视网膜破裂呈碎片状,单个眼球视网膜分离时间为14.3~45.5 s。视网膜分离操作时间及完整性与成年大鼠差异无统计学意义(P>0.05),初断乳大鼠原代RMPs细胞产量较成年大鼠高,细胞增殖能力强,细胞形态及表面标记物与成年大鼠一致。研究结果表明,初断乳大鼠视网膜是一种可用于RMPs培养的良好组织原料,该实验成功建立了初断乳大鼠RMPs分离培养体系。(本文来源于《中国细胞生物学学报》期刊2014年07期）
刘光辉,刘安,郑永征,徐朝阳,金威尔[7]（2013）在《加味补阳还五汤对糖尿病大鼠视网膜微血管周细胞凋亡的影响》一文中研究指出目的探讨加味补阳还五汤对糖尿病(DM)大鼠视网膜微血管周细胞凋亡的影响。方法采用链脲佐菌素诱导DM大鼠模型,将DM大鼠分为治疗组(给予加味补阳还五汤10.71g/kg)、对照组(羟本硫酸钙120 mg/kg)、空白组(生理盐水3 mL/d),并设立正常组对照。造模成功后连续给药12周,12周后取大鼠眼球制备视网膜血管消化铺片,行PAS染色,观察视网膜微血管形态,测量单位视野内微血管网面积率,计数单位视野内周细胞总数,并采用TUNEL法检测视网膜微血管周细胞的凋亡。结果 4组大鼠视网膜微血管排列规则,毛细血管管径粗细均匀,单位视野内微血管网面积率和周细胞总数4组间差异无统计学意义(P>0.05)。正常组大鼠未见视网膜微血管周细胞凋亡,DM大鼠在第12周已经出现视网膜微血管周细胞的凋亡,治疗组与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05),治疗组较对照组、空白组凋亡程度轻,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 DM大鼠在第12周已经出现视网膜微血管周细胞凋亡,加味补阳还五汤能抑制DM大鼠视网膜微血管周细胞的凋亡。(本文来源于《北京中医药大学学报》期刊2013年03期）
张莉薇[8]（2012）在《活性氧在高糖诱导的牛视网膜微血管周细胞代谢记忆中的作用》一文中研究指出第一章选择性培养牛视网膜微血管周细胞目的：选择性培养牛视网膜微血管周细胞。方法：1.应用胶原酶消化选择性培养牛视网膜微血管周细胞,台盼蓝染色检测细胞活性、倒置相差显微镜观察细胞形态；2.用α-平滑肌肌动蛋白(α-SAM)抗体、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体、Ⅷ因子相关抗原(vWf)抗体进行免疫组织化学染色鉴定牛视网膜微血管周细胞；3.应用CCK-8法测定牛视网膜微血管周细胞的增殖情况并绘制细胞生长曲线。结果：1.胶原酶消化可获得具有良好活性的毛细血管碎片,台盼兰染色显示细胞活力大于96%。原代培养1天后可见细胞从贴壁的毛细血管碎片放射状长出,3-5天后大量细胞从血管碎片迁移长出,5-7天后细胞呈长梭形,形成较大的克隆,9-10天后细胞呈短梭形达到融合状态呈可重迭生长；传代后,1小时以内细胞贴壁,1天后可见细胞完全展开,5-7天左右可以传代一次。细胞传代到第3代(P3)后逐渐出现老化状态。2.免疫组织化学染色显示细胞对α-SAM单克隆抗体染色阳性,阳性率>98%；而对GFAP抗体和vWf抗体染色阴性。3.细胞生长曲线显示,第2代细胞(P2)第4天进入对数生长期,第10天进入平台期。结论：1.经胶原酶消化成功地培养出具有高纯度和可传代的牛视网膜微血管周细胞。2.选择P2-P3代细胞能够更好的应用于后续的试验。第二章高糖诱导的牛视网膜微血管周细胞“代谢记忆”现象目的：探讨牛视网膜微血管周细胞(BRPs)从高糖培养转换为正常葡萄糖培养条件后细胞活力和细胞凋亡的变化。方法：1.BRPs高糖(20mM、25mM、30mM)条件下培养2天后转换为正常葡萄糖(5.6mM)条件下培养2天(2d-2d)、4天(2d-4d)或6天(2d-6d)；或者在高糖(20mM、25mM、30mM)条件下培养4天后转换为正常葡萄糖(5.6mM)条件下培养2天(4d-2d)或4天(4d-4d)；各时间段以全程正常葡萄糖或高糖条件下培养2、4、6、8天作为对照；细胞活力用CCK-8法评估。2. BRPs30mM高糖条件下培养4天后转换为正常葡萄糖(5.6mM)条件下培养4天(30mM4d-5.6mM4d),正常葡萄糖(5.6mM)或高糖(30mM)条件下培养4、8天作为对照；细胞凋亡的检测通过ELISA检测核小体DNA片段以及Western-blot检测活化的Caspase-3蛋白表达来评估。结果：1.20mM和25mM高糖刺激BRPs2天后,细胞活力显着降低；转换为5.6mM正常葡萄糖培养4天后细胞活力才完全恢复。30mM高糖刺激BRPs2天后,细胞活力显着降低；转换为5.6mM正常葡萄糖培养,直到6天后细胞活力才完全恢复。2.20mM和25mM高糖刺激BRPs4天后,细胞活力显着降低；即使在转换为5.6mM正常葡萄糖培养4天后,细胞活力仍未完全恢复。30mM培养条件下刺激BRPs4天后,细胞活力显着降低；但即使在转换为5.6mM正常葡萄糖培养4天后,细胞活力仍然持续性的降低。3.30mM高糖刺激BPRs4天后,细胞凋亡显着增加；即使转换为5.6mM正常葡萄糖培养4天后,细胞凋亡的异常增加仍然持续存在。结论：1.BRPs在30mM高糖条件下培养4天,细胞活力减低、细胞凋亡增多；即使转换为5.6mM正常葡萄糖条件下培养4天后,这种异常仍然持续存在,呈现“代谢记忆”现象。2.之前高糖刺激的时间、糖浓度以及之后转换为正常葡萄糖培养后的时间决定了这种“代谢记忆”的预后。第叁章活性氧在高糖诱导的牛视网膜微血管周细胞代谢记忆现象中的作用及机理目的：探讨活性氧(ROS)及抗氧化物酶在高糖诱导的牛视网膜微血管周细胞(BRPs)代谢记忆现象中的作用及机理。方法：30mM高糖培养BRPs4天后转换为5.6mM正常葡萄糖培养4天；5.6mM正常葡萄糖以及30mM高糖条件下培养细胞4或8天作为对照。检测各组线粒体产生的ROS、锰超氧化物歧化酶(MnSOD)活性、MnSOD蛋白以及mRNA的表达。结果：1.30mM高糖培养BRPs4天后,细胞线粒体ROS量明显增多、MnSOD蛋白活性明显减少；即使转换为正常葡萄糖培养4天后,这种异常仍然持续存在。2.30mM高糖培养BRPs4天后,MnSOD蛋白及mRNA表达反应性增高；延长30mM高糖培养到8天或转换为5.6mM正常葡萄糖培养4天,MnSOD蛋白及mRNA的表达呈现下降趋势降低。结论：1.线粒体ROS增多、MnSOD蛋白活性的降低介导了高糖诱导的BRPs代谢记忆。2. MnSOD的转录降低涉及到BRPs代谢记忆,靶向作用于抗氧化物酶可能是一种潜在的方案去逆转高糖诱导的BRPs代谢记忆。第四章锰超氧化物歧化酶对牛视网膜微血管周细胞代谢记忆现象保护作用目的：探讨过表达锰超氧化物歧化酶(MnSOD)对高糖诱导的牛视网膜微血管周细胞(BRPs)代谢记忆的保护作用。方法：1.rAAV2-MnSOD转染BRPs,转染4、8天后检测细胞MnSOD蛋白的表达以及其活性。2. rAAV2-MnSOD预处理BRPs,检测其对30mM高糖培养BRPs4天转换为5.6mM正常葡萄糖培养4天后,线粒体活性氧(ROS)、细胞凋亡以及活化的Caspase-3蛋白表达的影响,未处理组以及5.6mM正常葡萄糖或30mM高糖培养8天作为对照。结果：1.rAAV2-MnSOD转染BRPs,4天后细胞MnSOD蛋白表达及活性明显增高,蛋白表达较对照组增加近2倍,MnSOD活性增高近1倍；转染8天后仍然检测到MnSOD蛋白的高表达并伴有蛋白活性的增高。2. rAAV2-MnSOD预处理BRPs后,30mM高糖刺激细胞4天转换为5.6mM正常葡萄糖培养4天,线粒体ROS、细胞凋亡以及活化的Caspase-3蛋白表达较未处理组以及30mM8d组明显减少,接近于5.6mM8d组的正常水平。结论：MnSOD的过表达能够导致BRPs细胞线粒体ROS产生的降低并伴有细胞凋亡的减少从而逆转高糖诱导的代谢记忆,显示MnSOD基因转染可能成为一种潜在的治疗方案去逆转糖尿病视网膜病变的代谢记忆。(本文来源于《中南大学》期刊2012-05-01）
王应利,郭斌,惠延年,郭纯刚,李冬[9]（2010）在《周细胞对缺氧诱导下视网膜微血管内皮细胞增生的影响》一文中研究指出目的探讨视网膜微血管内皮细胞(RMECs)与共培养的周细胞(PCs)及PCs条件培养液(PCM)对常氧和缺氧条件下RMECs增生的影响。方法传代培养大鼠RMECs和PCs,采用兔抗鼠Ⅷ因子多克隆抗体和小鼠抗大鼠CD31单克隆抗体免疫组织化学法鉴定RMECs,PCs采用小鼠抗大鼠desmin多克隆抗体和兔抗鼠抗血小板衍生生长因子受体-β(PDGFR-β)进行免疫荧光双标鉴定。Millicell小室建立PCs和RMECs共培养系统,PCs培养近融合期后制备PCM,向共培养系统或PCM中加入终浓度为200μmol/L的CoCl2诱导形成细胞化学缺氧模型,观察常氧和缺氧条件下PCs和PCM对RMECs增生的影响。使用MTT法、3H-TdR掺入法检测RMECs在不同培养条件下的增生数量,并用流式细胞仪检测RMECs在不同细胞周期的细胞率。结果近融合期的RMECs呈类纺锤状、单层生长,可见明显的接触抑制,Ⅷ因子和CD31均阳性表达。PCs形状不规则,细胞重迭生长无接触抑制,PDGFR-β和desmin抗体双标阳性。缺氧3～9d缺氧RMECs单独培养组较常氧RMECs单独培养组各时间点的RMECs均明显增生,缺氧6d时增生达高峰(P<0.01),细胞生长抑制率(GIR)为-24.9%。缺氧共培养组较缺氧RMECs单独培养组RMECs增生下降(P<0.05)。缺氧3、6、9d时常氧共培养组较常氧RMECs单独培养组RMECs数目均明显下降(P<0.05,P<0.01,P<0.01)。缺氧6d时S期RMECs数量明显增加,占各期细胞总数的(43.9±0.8)%;常氧或缺氧共培养组,PCs均可抑制RMECs的增生,S期细胞分别占各期细胞总数的(3.6±0.1)%、(15.1±0.9)%(P<0.05,P<0.01)。常氧PCM组RMECs的吸光度(A)值和3H-TdR掺入量4～24h均低于对照组(P<0.05)。结论缺氧和常氧条件下RMECs和PCs共培养时PCs均可抑制RMECs的增生,常氧条件下PCM可抑制RMECs的增生。(本文来源于《眼科研究》期刊2010年12期）
刘洪雷,刘军,张自峰,周健,王雨生[10]（2008）在《TNF-α对培养视网膜微血管内皮细胞与周细胞PDGF-B/PDGFR-β表达的作用》一文中研究指出目的:研究TNF-α对内皮细胞与周细胞PDGF-B/PDGFR-β表达的作用。方法:常规剂量100μg/L以及大剂量2450μg/LTNF-α作用于培养的视网膜微血管内皮细胞、周细胞,通过免疫组化、Western Blot、RT-PCR检测PDGF-B/PDGFR-β表达。结果:内皮细胞组大剂量TNF-α组,PDGF-B表达显着下调,8h表达开始出现下调,在12h,PDGF-B的表达量为原来的39%;在人视网膜微血管周细胞组,与对照组相比,常规TNF-α剂量组PDGFR-β表达并未出现显著改变;大剂量TNF-α组,与对照组相比,PDGFR-β表达在12h下调为45%。结论:TNF-α可引起内皮细胞与周细胞PDGF-B/PDGFR-β表达降低。(本文来源于《国际眼科杂志》期刊2008年12期）
牛视网膜微血管周细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的糖尿病视网膜病变是糖尿病最常见的并发症之一,其病变机制较为复杂且并不明确。临床上将微血管病变作为糖尿病视网膜病变的主要诊断依据,其中微血管周细胞的丢失是糖尿病视网膜血管病变的重要标志之一,以凋亡为主要方式,严重破坏了血-视网膜屏障的完整性。我们提出周细胞的功能可能在维护视网膜血管的稳定性方面也起到了重要作用,其功能的改变可能发生在周细胞发生丢失之前。此外,慢性炎症是糖尿病视网膜早期病变的特点之一,我们在本研究中主要关注炎症环境中,视网膜微血管周细胞的应答方式和调控机制。方法本研究主要选取原代小鼠视网膜周细胞,给予炎症刺激并采用ELISA、qPCR等方法检测周细胞的分泌因子的mRNA水平和蛋白水平;采用Western Blot和qPCR方法检测周细胞本身的收缩功能和与内皮细胞相互作用的能力;采用Transwell方法检测周细胞分泌因子对小胶质细胞的影响;最后联合抑制剂检测介导调控周细胞分泌因子变化的关键通路。结果研究发现,在IL-1β模拟的炎症刺激下,小鼠视网膜周细胞可大量表达促炎因子、趋化因子、血管新生因子以及迁移蛋白等,同时下调抑制血管新生因子、收缩蛋白以及与内皮细胞的相互作用的连接蛋白;同时视网膜周细胞分泌的趋化因子可显着趋化小胶质细胞;STAT3抑制剂Stattic和CPT的使用可有效阻断相关分泌蛋白的显着上调。结论本研究认为,周细胞除了以凋亡的方式直接损伤血-视网膜屏障的完整性和稳定性,其在炎症环境下可通过激活炎症因子的表达、抑制自身的收缩功能以及与内皮细胞的相互作用直接损伤血-视网膜屏障以及整体视网膜微环境的稳定性。因此,周细胞功能损伤对糖尿病视网膜病变的发生发展具有重要的意义,也为抗炎治疗糖尿病视网膜病变的治疗方式提供了一定的理论支持。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
牛视网膜微血管周细胞论文参考文献
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