导读:本文包含了山羊乳腺组织论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:奶山羊,miRNA筛选,乳脂代谢,乳腺上皮细胞
山羊乳腺组织论文文献综述
陈志[1]（2016）在《奶山羊乳腺组织乳脂代谢关键miRNA的筛选及功能验证》一文中研究指出羊奶中蛋白质、维生素、钙、矿物质、总脂肪含量高,羊奶所含的有益脂肪酸含量(如短、中链脂肪酸,不饱和脂肪酸和共轭酸等)均显着高于牛奶,羊奶中的乳脂代谢非常复杂,它受多种因素调控。Mi RNA(micro RNA)可通过调控其靶基因的表达影响脂肪酸代谢过程。本研究对奶山羊不同泌乳时期(泌乳前期、泌乳盛期、泌乳后期和干奶期)乳腺组织进行mi RNA筛选后,对催乳素处理的乳腺上皮细胞做进一步筛选,发现6个表达差异的mi RNA。在此基础上,对这些筛选出来的mi RNA在功能、调控关系以及分子机制方面进行深入研究。得到如下主要研究结果:1.奶山羊乳腺组织mi RNA表达谱分析及乳脂代谢关键mi RNA筛选研究以奶山羊泌乳前期、泌乳盛期、泌乳后期和干奶期的乳腺组织进行mi RNA表达量检测,基于mi RBase数据库提供的793条牛的mi RNA和267条羊的mi RNA进行第一轮的筛选,以p值小于0.05且差异在4倍以上为标准,筛选得到156个表达差异的mi RNA。随后使用与发动泌乳密切相关的因子——催乳素(2.5μg/ml)处理乳腺上皮细胞,进行第二轮筛选。发现mi R-30e-5p,mi R-15a,mi R-181b,mi R-148a,mi R-17-5p和mi R-135b这6个mi RNA在催乳素处理的乳腺上皮细胞中表达差异显着。2.Mi R-181b通过IRS2(Insulin receptor substrate 2)抑制TAG合成并调控Hippo信号通路基因在乳腺上皮细胞过表达mi R-181b可以抑制乳脂代谢,而抑制mi R-181b可以促进乳脂代谢。荧光素酶报告试验和Western Blot试验证明了mi R-181b的靶基因为IRS2。此外,在乳腺上皮细胞中,mi R-181b可以调控Hippo信号通路中的多个作用元件,如LATS1和YAP1。简而言之,研究发现mi R-181b通过调控Hippo通路上的多个元件及靶向IRS2抑制脂代谢。3.Mi R-30e-5p和mi R-15a通过靶向LRP6和YAP1基因协同调控乳脂代谢QRT-PCR和Western Blot试验证明了mi R-30e-5p和mi R-15a分别通过靶向Yes相关蛋白(YAP1)和LDL受体相关蛋白6(LRP6)来促进脂质分化。其中,mi R-30e-5p可以调控β-catenin基因,β-catenin进而介导YAP1的表达。在乳腺上皮细胞脂代谢中YAP1基因的m RNA和蛋白水平表达受mi R-30e-5p调控。此外,在乳腺上皮细胞中过表达mi R-30e-5p和mi R-15a可以促进脂代谢,与之相反抑制mi R-30e-5p和mi R-15a可以减少脂代谢。此外,mi R-30e-5p通过调控mi R-15a表达水平来协同调控YAP1在乳腺上皮细胞中的乳脂代谢功能。4.PRL通过甲基化修饰抑制mi R-135b功能QRT-PCR和Western Blot试验证明LATS2作为mi R-135b的靶基因来行使乳脂代谢功能。PRL处理乳腺上皮细胞时,对下调mi R-135b的表达有一定的时间和浓度梯度效果。此外,mi R-135b的5'端发现一个Cp G岛,通过调控Cp G岛的甲基化来抑制mi R-135b表达。进一步对PRL处理的乳腺上皮细胞中mi R-135b的功能和作用途径进行研究发现,DNMT I(DNA甲基化转移酶I)表达水平显着提高,而mi R-135b表达水平下调。此外,当mi R-135b的表达受到抑制时,LATS2表达水平上调。这就导致乳腺上皮细胞中乳脂代谢水平提高,从而行使维持泌乳等功能。5.Mi R-148a和mi R-17-5p通过PPARGC1A和PPARA基因协同调控乳腺上皮细胞乳脂代谢表达谱结果显示mi R-148a、mi R-17-5p、PPARGC1A和PPARA在泌乳盛期和干奶期中表达差异显着。荧光素酶和Western Blot试验发现,PPARA(脂肪酸调控重要因子)和PPARGC1A(调控脂代谢基因)分别是mi R-148a和mi R-17-5p的靶基因,而mi R-148a可以调控PPARA,mi R-17-5p可以调控PPARGC1A。过表达mi R-148a和mi R-17-5p促进甘油叁酯(TAG,Triglyceride)的合成,而抑制mi R-148a和mi R-17-5p降低TAG的产生。重要的发现是mi R-148a和mi R-17-5p的协同作用促进了TAG的合成。即在乳腺上皮细胞中,mi R-148a与mi R-17-5p分别调控PPARGC1A和PPARA来协同完成TAG的合成,。本研究筛选的6个mi RNA及其靶基因对乳脂代谢的影响,为深入阐明奶山羊乳脂代谢调控机制提供了理论和试验依据,为解析羊奶脂肪酸成分形成机理奠定了基础。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2016-09-29）
纪志宾,王桂芝,王建民,刘昭华,候磊[2]（2015）在《奶山羊乳腺组织中差异表达microRNAs鉴定与分析》一文中研究指出引言microRNAs在真核生物中具有特异的时空及组织表达模式~([1]),参与了器官发育、特定细胞过程,以及人类疾病等精细调控~([2])。近年来,对乳腺发育进程研究表明,miRNAs作为一类重要的调控因子,通过调控基因表达参与了乳腺发育过程,但miRNAs在山羊正常乳腺生理与泌乳的研究相对较少。因此,本研究以5只健康的崂山奶山羊不同泌乳时期的乳腺组织为研究对象,采用Illumina/Solexa Sequencing技术鉴定乳腺组织中表达的miRNAs,并采用生物信息学分析其功能。材料方法崂山奶山羊泌乳初期、高峰期和末期乳腺组织(产后20天、90天和210天),提取总RNA(本文来源于《2015年全国养羊生产与学术研讨会论文集》期刊2015-08-19）
曹文婷[3]（2015）在《奶山羊乳腺组织miRNAs的鉴定、筛选及功能的初步研究》一文中研究指出奶山羊(Capra hircus)是一种重要的经济物种,且山羊乳的营养成分及吸收效率均高于牛乳,因此适宜人们饮用并成为现代乳制品行业的一个重要原材料,由于山羊乳的特点和乳腺组织中的脂质代谢密切相关,因此对其乳腺组织的发育,泌乳及乳脂代谢进行研究是极其必要的。然而目前针对山羊乳脂代谢的研究还较少,且大多都集中于基因功能的探究与分析,缺乏从转录后水平,如microRNAs(miRNAs)水平对其进行研究。近年来,随着高通量测序技术以及生物信息学的发展,一系列的miRNAs被发掘并提交到miRBase中,然而,在miRBase 20.0数据库(2013年6月)中,还没有可以利用的山羊miRNAs序列,并且,在以往的研究中,由于没有可利用的山羊基因组,因此山羊的solexa测序结果一般是与其近缘物种,如牛,绵羊等的基因组相比对,来获得其miRNA转录组。在本研究中,通过将solexa测序结果与山羊的基因组进行比对,从而获得了更加可靠的山羊泌乳期miRNA转录组;通过对山羊miRNAs序列及其在山羊基因组上的定位分析,从而了解了山羊miRNA转录组特征;通过筛选并验证在不同泌乳时期差异表达的miRNAs,从而得到了一些可能对山羊乳腺发育,泌乳及乳脂代谢等具有重要的调控作用的miRNAs。主要结果如下:1、通过solexa测序技术,在山羊泌乳中期乳腺组织中共检测到了24479196个原始序列读数(raw data),经过一系列的质量过滤后,最终得到了21517296个clean reads,占raw data的87.9%。对clean reads进行长度分析后发现,clean reads的片段大小主要集中在21-23nt之间,且在22nt长度处具有最多的序列读数。将clean reads中相同的序列合并成一个unique reads,并与miRBase 20.0数据库中已注释的哺乳动物的pre-miRNAs,mature miRNAs以及山羊的基因组进行比对,最终得到了1059个mature miRNAs和821个pre-miRNAs,其中成熟的miRNAs包括796个保守的mi RNAs以及263个新的miRNAs。2、对测序得到的1059个miRNAs进行首位碱基的偏好性分析,结果显示miRNAs的首位碱基对U有强烈的倾向性,而对G则有一定的抗性。对796个保守的miRNAs进行序列分析,发现与已注释的序列相比,山羊miRNAs序列大多在其3'端发生了变化,由此形成了多个miRNA变异体(isomiR),且山羊miRNA转录组中的大部分miRNAs都是以isomiR的形式存在的。3、将796个保守的miRNAs与mi RBase 20.0数据库中的24种哺乳动物的miRNAs进行比对,结果发现与其他物种相比,山羊与牛具有相同miRNAs的数目最多,为404个,而山羊与绵羊具有同源miRNAs的数目则较少,仅为102个。4、将821个pre-miRNAs与山羊基因组的染色体序列进行比对,结果发现有796个pre-miRNAs可以比对到山羊的染色体序列上,对比对上的pre-miRNAs进行进一步的染色体密度分析,发现796个pre-miRNAs在山羊染色体上的分布密度在1.1-0.11/Mbp之间,其中9号染色体上pre-miRNA的密度最小,为0.11个/Mbp,而21号染色体上pre-miRNAs的密度最大,为1.1/Mbp。5、miRNAs在基因组上是成簇排列的,将基因间最大间距(maximum inter-distance,MID)分别定义为3Kb,5Kb,10Kb以及50Kb时对山羊的miRNA cluster进行统计,结果发现当MID为3Kb时,429个miRNAs形成了86个cluster;当MID为5Kb时,442个miRNAs形成了87个cluster;当MID为10Kb时,460个miRNAs可形成90个cluster;而当MID为50Kb时,501个miRNAs共形成了99个cluster。6、将种子序列完全相同的miRNAs定义为一个miRNA家族,对测序得到的1059个mi RNAs按其种子序列进行家族分析,结果发现,有479个miRNAs可以与其他miRNAs形成mi RNA家族,共形成了164个miRNA家族,其中最大的家族为包含有12个成员的let-7家族,而剩余的573个miRNAs由于不含有与其他miRNAs相同的种子序列,因此无法形成miRNA家族。7、通过对U2,18s rRNA,5s rRNA基因分别设计反转录及定量引物,并进行定量检测和扩增产物的鉴定,最终确定5s rRNA为miRNA S-Poly(T)法定量检测的内参。8、通过将本次测序结果与已报道的研究成果相比对,最终得到了37个在山羊乳腺组织不同泌乳时期差异表达的miRNAs,利用qPCR方法对这些miRNAs分别进行泌乳前期、泌乳盛期、泌乳中期以及干奶期的乳腺组织表达水平检测,发现仅有miR-222_R+2在四个不同的泌乳时期内没有明显的表达差异,而其余的36个miRNAs均存在着显着的差异表达。9、通过在山羊乳腺上皮细胞中过表达mi R-145,并对其进行油红O染色和甘油叁酯含量的检测,发现其不仅能够显着增加细胞中脂滴的含量,而且能够促进细胞内甘油叁酯含量的积累。结论:完成山羊泌乳期miRNA转录组的鉴定及特征分析,并筛选及初步验证了36个可能对山羊乳腺发育,泌乳及乳脂代谢等具有重要的调控作用的miRNAs。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2015-05-01）
董飞[4]（2014）在《奶山羊乳腺组织差异表达miRNA功能预测及miR-135a对PRLR基因靶向调控研究》一文中研究指出深入了解乳腺发育与泌乳的分子机制对于改善奶的生产能力有重要的指导意义，为找到miRNA在泌乳期乳腺的生长发育及泌乳过程中发挥的基因表达调控作用，本研究根据已有的崂山奶山羊不同泌乳时期miRNA表达谱及奶牛乳腺组织转录本数据，通过聚类分析、靶基因预测及功能注释等数据挖掘和生物信息学分析方法，对其中差异表达的miRNA做了乳腺发育相关的生物学解释。经生物信息学分析后，以崂山奶山羊单克隆乳腺分泌上皮细胞为试验材料，通过载体构建和细胞转染，利用qRT-PCR、双荧光素酶报告基因系统及Western-blot等方法验证miR-135a与PRLR基因的靶向关系。主要研究结果如下：（1）通过对miRNA在叁个时期高通量测序表达谱中表达量的差异分析，在不同泌乳时期筛选到差异表达miRNA共有66个，其表达模式被聚为6类；（2）以奶牛不同泌乳期乳腺组织转录本为基础，经TargetScan6.2软件进行靶基因预测后，共获得62个miRNA调控的候选靶基因813个；（3）通过功能注释，共对804条序列进行了GO注释，其中有8个基因直接注释到乳腺发育功能，分别为PRLR、TGFBR2、ERBB3、PTHLH、TNFRSF11A、SFRP4、SLC12A2和FGF2。共有235个基因注释到152条pathway通路中，与数据库组织表达谱相比较，有9个基因在乳腺组织中显着高表达，分别为PRLR、ABCC1、CSN1S1、CSN2、CSN3、FABP3、PTHLH、TM4SF18和HSP90B1；（4）荧光定量PCR试验结果表明转染pcDNA3.1(+)-miR-135a载体成功过表达miR-135a的细胞中，PRLR的表达量显着低于pcDNA3.1(+)空载体对照组（P<0.01），而miR-135a inhibitor转染组PRLR表达量显着高于其对照组（P<0.01），结果表明过表达miR-135a使PRLR表达量显着降低，而抑制miR-135a表达可以使PRLR表达量升高；（5）双荧光素酶报告基因系统结果显示共转染pcDNA3.1(+)-miR-135a和pGL3-promotor-PRLR-3′UTR荧光报告基因载体，其荧光素酶活性显着低于PRLR-3′UTR突变型载体的共转染组（P<0.01），说明miR-135a可与预测到的PRLR-3′UTR作用位点相结合抑制其表达从而使荧光素酶活性降低。（6）Western blot试验表明过表达miR-135a可以显着降低PRLR蛋白表达量（P<0.01），转染不同浓度miR-135a inhibitor后与阴性对照组相比，PRLR蛋白表达量变化不显着（P>0.05），但可见转染较高浓度的miR-135a抑制剂后，PRLR蛋白表达量有上升趋势。通过生物信息学的手段，本研究系统的分析了奶山羊泌乳期乳腺中差异表达miRNA的调控功能，经过分子生物学实验技术的验证，确定了在奶山羊乳腺上皮细胞中，miR-135a对PRLR的表达具有直接的靶向负调控作用。(本文来源于《山东农业大学》期刊2014-05-04）
张犁苹,罗军,林先滋,朱江江,石恒波[5]（2013）在《miR-200家族在西农萨能奶山羊乳腺组织中的表达分析》一文中研究指出笔者拟获得山羊miR-200家族乳腺组织表达谱,研究miR-200家族成员之间表达相关性及miR-200家族成员与山羊乳成分的相关性。通过定量PCR,检测miR-200家族在西农萨能奶山羊泌乳中期和干奶期乳腺组织中的表达量;利用Pearson相关系数分析miR-200家族不同成员表达量之间的相关性,同时分析miR-200家族成员与山羊乳成分之间的相关关系;利用miRanda和TargetScan 6.2软件分析、RNAhybrid和PITA软件预测miR-200家族的靶基因。结果表明,miR-200家族在奶山羊泌乳中期的乳腺组织中的表达量极显着高于干奶期(P<0.01);miR-200a与miR-141之间的表达量显着相关(P<0.05),miR-200b与miR-200c之间的表达量极显着相关(P<0.01);泌乳中期奶山羊乳腺组织中miR-200c的表达量与乳蛋白、非脂固形物(SNF)、冰点(FPD)的含量显着相关(P<0.05);经软件分析及预测发现,miR-200a/miR-141靶向作用于在乳脂合成中起关键作用的基因STAT4。miR-200家族可能对山羊乳蛋白及乳脂合成具有一定的调控作用。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2013年06期）
纪志宾[6]（2013）在《奶山羊泌乳期乳腺组织microRNA表达谱分析及miR-143调控IGFBP5对细胞作用研究》一文中研究指出奶山羊的泌乳在整个泌乳期具有规律性，在泌乳初期泌乳量较低，随后逐渐升高达到高峰期并维持一定时间，随着泌乳的不断进行，泌乳量将逐渐下降直至干乳期。因此，了解奶山羊乳腺发育和泌乳规律，利用分子手段改善奶山羊泌乳遗传性能，以延长奶山羊的泌乳期或提高泌乳量。目前，对奶山羊泌乳规律的研究主要采用候选基因法，并发现了大量与泌乳相关的候选基因，但其参与泌乳规律的调控机制仍不清楚。MicroRNA是一类长度约22nt的非蛋白编码的RNA，在动物的进化过程中高度保守且具有表达的时空特异性，能在转录后水平调控其靶mRNA的表达，广泛参与了细胞的增殖、分化与凋亡以及器官的发育等众多生物学过程。乳腺的发育与泌乳是乳腺上皮细胞不断增殖、分化与凋亡的同期性过程。有研究表明miRNA在乳腺发育不同时期呈现差异表达模式，是乳腺发育与泌乳的重要调控因子。本研究以5只崂山奶山羊在不同泌乳时期的乳腺组织为研究材料，分别构建了泌乳初期（产后20天），泌乳高峰期（产后90天）和泌乳末期（产后210天）叁个小RNA文库，采用Illumina/Solexa高通量测序技术对构建的叁个文库分别进行测序，并对测序数据进行了质量检测和长度分布统计，基因组定位及小RNA分类注释，筛选出了在叁个文库中差异表达的miRNA。采用生物信息学方法进一步对差异表达的miRNA进行靶基因预测、基因功能注释和KEGG通路分析。通过Solexa高通测序分析，我们发现miR-143在不同泌乳时期具有高表达丰度且呈现差异表达模式，生物信息学分析表明：其靶基因参与了乳腺的发育、细胞生长等生物学过程，采用双荧光素酶报告基因分析系统和qRT-PCR对miR-143及其潜在靶基因IGFBP5进行了靶向调控关系研究，采用MTT法、荧光Hoechst/PI双染和流式细胞术研究了miR-143对乳腺上皮细胞增殖与凋亡的影响。主要研究结果如下：（1）通过Solexa高通量测序，在泌乳初期、泌乳高峰期和泌乳末期叁个文库中分别获得18,031,615、19,044,002和7,385,833纯净序列读数，分别占到其高质量读数的97.88%、98.45%和73.87%。（2）小RNA长度分布统计结果表明：叁个文库中小RNA序列主要分布在19-24nt之间，22nt序列最多，在叁个文库中分别占到44.04%、41.48%和33.96%，其次为20nt和23nt。不同片段长度的小RNA在叁个文库中呈现差异分布。（3）绵羊基因组定位分析结果表明：在泌乳初期、泌乳高峰期和泌乳末期叁个文库中分别有44,928种序列（9,093,530条读数）、69,244种序列（8,941,279条读数）和32,509种序列（3,916,179条读数）定位到绵羊基因上，分别占总序列的50.43%、46.95%和53.02%。（4）叁个文库中共发现已知miRNA336个，189个呈现显着差异表达，表达丰度在1,000,000以上的有5个，let-7a、let-7b、miR-143、miR-378、miR-148a；在100,000-1,000,000的有10个，miR-30e-5p、 miR-30d、 miR-30a-5p、miR-21、miR-200c、miR-146b、miR-126、miR-103、let-7f、let-7c。叁个库中共同表达的有289个，在两个文库中共同表达的有26个，仅在一个文库中表达的有21个，其中仅在泌乳初期表达7个，仅在泌乳高峰期表达8个，仅在泌乳末期表达6个。（5）差异表达miRNA生物信息学分析表明：对189个差异表达miRNAs采用TargetScan进行靶基因预测，共获得10,325个非冗余的靶基因。通过Blast2GO和DAVID分析，有9,341个基因在GO数据库获得了功能注释，FDR<0.05的GO注释为1,229条，显着富集的通路有68个（P<0.05）。富集到了MAPK signaling pathway、Wnt signalingpathway、Insulin signaling pathway、Jak-STAT signaling pathway等与泌乳有关的信号通路。（6）叁个文库中共发现50个新miRNA，对其进行生物信息学分析表明：共获得13,298个靶基因EST序列，125,846条GO注释，参与了237条通路。显着富集到Metabolicpathways、ECM-receptor interaction等与泌乳有关的通路。（7）qRT-PCR分析了miR-143及其潜在靶基因IGFBP5在叁个泌乳时期的表达特征，结果表明miR-143与IGFBP5在不同泌乳时期乳腺组织表达趋势相同，均在泌乳高峰期低表达。通过构建miR-143真核表达载体，野生型和突变型IGFBP5双荧光素酶报告基因载体，体外转染奶山羊乳腺上皮原代细胞，发现miR-143靶向IGFBP53′-UTR，并正向调控其表达。（8）MTT法、荧光Hoechst33342/PI双染和流式细胞术检测miR-143对乳腺上皮细胞增殖与凋亡的影响，结果表明：miR-143延缓了乳腺上皮细胞周期进程，可抑制乳腺上皮细胞的增殖（P<0.05），并促进其凋亡。（9）miR-143过表达后，与对照组相比凋亡基因BAX表达显着升高(P<0.01)，抗凋亡基因BCL-2表达降低。(本文来源于《山东农业大学》期刊2013-06-13）
江青东,王慧杰,陈宁[7]（2013）在《奶山羊乳腺组织5-HTR7基因的克隆与序列分析》一文中研究指出根据GenBank其他物种5-HT受体-7(5-HTR7)基因序列的同源序列对奶山羊5-HTR7基因设计一对克隆引物,通过奶山羊乳腺组织提取的总RNA进行RT-PCR,将PCR产物克隆、测序。结果显示,奶山羊5-HTR7基因的ORF与猴(NM-00193683)、大熊猫(XM-002926833)、猪(NM-214101)、大猩猩(ABO37534)和人(NM-000866)的同源性分别为21.3%、19.8%、20.7%、89.2%和76.2%,推测氨基酸序列与人和大猩猩在基因进化方面可见,羊和大猩猩的同源性最高,其次是与人。奶山羊5-HTR7基因推测氨基酸序列与人和大猩猩的同源性分别为73%和64%,相似性分别为81%和69%;氨基酸序列信号肽为1aa～17aa,SapB结构域均为59aa～126aa,结构特征与人和大猩猩的5-HTR7结构特征相一致。结论:克隆了奶山羊乳腺组织中5-HTR7基因,为进一步研究牛乳腺组织中5-HTR基因的分布和提高其泌乳量方面提供理论基础。(本文来源于《中国兽医杂志》期刊2013年05期）
林先滋[8]（2013）在《奶山羊乳腺组织乳脂代谢相关miRNAs的筛选及功能验证》一文中研究指出山羊乳中总脂肪含量,尤其是其中与人类健康密切相关的中短链脂肪酸及不饱和脂肪酸含量均高于牛乳。山羊乳的乳脂特点应与其乳腺乳脂代谢密切相关。然而,在乳脂代谢基因中,至今尚未发现山羊特异性表达或者具有特异功能的基因。据此推测山羊乳脂代谢的特点可能与其在基因不同水平(如转录后、翻译水平)的调控机制有关。MicroRNAs (miRNAs)是一类在转录后水平调控基因表达的小分子RNA,其功能几乎涉及生命活动的各个方面。已证实miRNAs是调控脂肪和肝脏组织中脂肪代谢的重要因子,然而,现有研究缺乏(?)niRNAs调控山羊乳腺乳脂代谢的研究报道。因此,本研究从miRNAs调控乳腺乳脂代谢的角度出发,通过测序技术获得西农萨能奶山羊乳腺组织miRNAs表达谱,分析其序列特征,检测其在乳腺组织不同阶段的表达水平,筛选与山羊乳脂代谢相关的miRNAs,并通过在山羊乳腺上皮细胞(GMEC)中过表达miRNAs,检测细胞中与乳脂代谢相关的指标,证实miRNAs对山羊乳脂合成和组成具有重要影响,同时发现3对可在乳腺组织中协同表达的miRNAs,发现其协同调控山羊乳腺组织乳脂代谢。本研究从miRNAs调控角度阐明山羊乳脂代谢分子调控机制、揭示山羊乳腺泌乳机理,为后期增加乳脂含量及改善乳组成等研究提供重要的理论和试验依据。论文主要结果如下：1.利用Solexa测序技术检测山羊泌乳中期乳腺组织中的小RNAs序列,测序结果经数据库过滤后得到高质量小RNAs序列读数22,084,321个,其中长度为22个核苷酸(nt)的小RNA读数最多,约占所有小RNAs读数的33.4%。将测序所得序列与小RNAs数据库中已知序列进行比对,结果发现山羊乳腺组织中含有5种小RNA,分别为tRNAs、 rRNAs、snoRNAs、snRNAs和miRNAs,其中miRNAs的读数最多(10,534,221),约占乳腺组织小RNAs,总读数的47.7%。对miRNAs序列进行鉴定,共获得1,143个miRNAs,其中931个为保守miRNAs,212个为山羊新的候选miRNAs。将山羊931个保守miRNAs与miRBase (17.0)数据库中已注释的miRNAs序列进行比对,结果发现：(1)山羊和牛的保守niRNAs数目最多,达575个,其中,山羊与牛特有的miRNAs数目为116个；(2)335个miRNAs的391个末端碱基发生变化,其中碱基减少的数目大于增加的数目,且miRNAs3'端的碱基变化数目大于5'端；(3)109个碱基发生替换,包括63个转换和46个颠换。2.利用定量PCR技术检测山羊30个miRNAs在泌乳中期和干奶期乳腺组织中的表达量,获得17个差异表达miRNAs。利用PicTar和TargetScan软件预测miRNAs的靶基因,并通过GO和KEGG软件预测靶基因的功能并进行靶基因富集,结果发现17个差异表达miRNAs的靶基因主要参与乳腺发育、细胞增殖、乳脂合成等代谢过程。从17个差异表达miRNAs及10个功能已知(调控其它动物脂质代谢),miRNAs中,通过催乳素实验获得4个(miR-23a、miR-27a、miR-103和miR-200a)表达量受催乳素调控的miRNAs,推测这4个miRNAs可能与山羊乳腺组织乳脂代谢有关。3.从山羊基因组DNA上扩增出200bp至500bp长的pri-miR-23a、pri-miR-27a、 pri-miR-103和pri-miR-200a序列(皆包括pre-miRNA及侧翼序列),与牛的序列相比,山羊pre-miR-27a3'端第11个碱基由A变为G,山羊其余pre-miRNAs序列与牛相同。以pri-miRNAs为插入片段,成功构建重组腺病毒载体pAd-miRNAs。将腺病毒载体转染HEK293细胞株,病毒载体包装成功后获得Ad-miR-23a、Ad-miR-27a、Ad-miR-103和Ad-miR-200a4种腺病毒,用这4种病毒分别感染GMEC,72h后检测细胞中miRNAs表达水平,结果发现病毒介导miRNAs的表达量依次为对照(感染Ad的GMEC)的3.48、1.94、2.92和2.48倍。4.检测感染Ad-miR-10372h时GMEC中的乳脂合成相关指标,结果显示：miR-103过表达可促进细胞中乳脂积累,与对照(感染Ad的细胞)相比,细胞中甘油叁酯的含量增加0.33倍,总脂肪酸含量增加0.16倍,不饱和脂肪酸含量增加0.42倍,其中,不饱和脂肪酸c9-C18：1和c9,t11-C18：2含量大幅上调,较对照相比分别上调0.35倍和1.26倍,同时,脂肪酸和甘油叁酯合成及脂滴生成相关基因FASN, DGAT1、ADRP、SLA27A6等表达量升高。在感染病毒0、24、48和72h的GMEC中,miR-103过表达可上调PPARγ、 SREBP-lc和LXRa及它们下游基因mRNAs表达水平,同时下调脂解和氧化相关基因HSL、ATGL、CPT1和ACOX1的表达量。此外,miR-103与PANK3在乳腺组织中的表达量之间具有正相关关系,相关系数达0.891,且在GMEC中进行miR-103过表达和抑制试验时,PANK3的表达量随着miR-103表达量变化而改变。5.检测感染Ad-miR-27a72h时GMEC中的乳脂合成相关指标,结果显示：与对照(感染Ad的细胞)相比,过表达miR-27a能抑制细胞中脂滴形成,下调甘油叁酯含量,降低不饱和脂肪酸/饱和脂肪酸的比例,其中,不饱和脂肪酸c9,C18：1和c9,t11-C18：2含量大幅下降,较对照分别下降0.36和0.45倍,而饱和脂肪酸C16：0和C18：0含量升高,较对照分别升高0.19和1.02倍。检测感染病毒0、24、48和72h时细胞中乳脂代谢相关基因的表达量：PPARγ蛋白表达量降低,其下游基因、负责甘油叁酯合成的DGAT1的表达量下降,同时,与脂滴形成相关的基因ADRP和TIP47表达量升高,与脂解、氧化相关的基因HSL、ATGL和ACOX1表达量升高。6.检测感染Ad-miR-23a72h时GMEC中的乳脂合成相关指标,结果显示：与对照相比,过表达miR-23a的细胞中脂滴含量增加1.83倍,甘油叁酯含量增加2.21倍,同时,乳脂合成相关基因FASN、DGAT1和TIP47的表达量升高,依次为对照的1.82、1.89、2.93倍,而脂解相关基因ATGL的表达量降低,仅为对照的0.6倍。此外,过表达miR-23a还可增加固醇转运相关基因ABCA1和ABCG2的表达水平。检测感染Ad-miR-200a72h时GMEC中乳脂代谢相关基因的表达量,结果发现miR-200a对乳脂合成各阶段相关基因的表达皆有影响,其可降低FASN和ADRP的表达量,提高SCD、 DGTA1和HSL的表达量,同时还可调控PPARγ和SREBP-1c的表达水平。7.利用Pearson相关系数分析miR-23a、miR-27a、miR-103和miR-200a在泌乳中期山羊乳腺组织中表达量之间的相关性,结果发现miR-23a与miR-27a、miR-27a与miR-200a、miR-200a与miR-103叁对miRNAs之间的表达量具有正相关关系,它们的相关系数依次为0.79、0.57和0.716。此外,在这叁对miRNAs中,miR-23a与miR-27a、 miR-27a与miR-200a之间在过表达时均表现为相互促进作用,而miR-103与miR-200a在过表达时表现为相互抑制作用。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2013-03-01）
江青东[9]（2012）在《萨能奶山羊乳腺组织5-HTR4基因的克隆序列分析与原核表达》一文中研究指出利用同源序列克隆原理设计5-羟色胺受体4(5-HTR4)一对克隆引物,对萨能奶山羊乳腺组织中5-HTR4进行克隆、测序,并进行分析;再根据克隆序列设计引物,从重组克隆载体中扩增出含Bam HⅠ/XhoⅠ酶切位点的5-HTR4片段,酶切后亚克隆至pGEX-4T-1载体,构建重组原核表达载体pGEX-5-HTR4,经IPTG诱导进行表达、鉴定。奶山羊5-HTR4基因的ORF与兔(Z50162)、猪(NM-001173418)、人(human5HT1D)、狗(NM-001003280)和鼠(AK082016)的同源性分别为46.1%、47.2%、78.9%、45.8%及89.8%。Smart分析发现,奶山羊5-HTR4基因推测氨基酸序列信号肽与人、鼠5-HTR4基因氨基酸序列信号肽均为1～23aa,SapB结构域均为49～126aa,结构特征与人、鼠的5-HTR4结构特征相一致。(本文来源于《中国兽医杂志》期刊2012年07期）
江青东,王慧杰[10]（2012）在《萨能奶山羊乳腺组织5-HTR1基因的克隆与序列分析》一文中研究指出根据GenBank其他物种5-HT受体-1(5-HTR1)基因序列的同源序列对奶山羊5-HTR1基因设计1对克隆引物,通过奶山羊乳腺组织提取的总RNA进行RT-PCR,将PCR产物克隆、测序。结果显示,奶山羊5-HTR1基因与牛、鼠的同源性分别为97.3%和87.2%,推测的氨基酸序列信号肽为1～45aa,SapB结构域均为78～145aa,结构特征与牛、鼠的5-HT1结构特征相一致。克隆了奶山羊乳腺组织中5-HTR1基因,为进一步研究牛乳腺组织中5-HT受体基因的分布和提高其泌乳量方面提供理论基础。(本文来源于《中国兽医杂志》期刊2012年06期）
山羊乳腺组织论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
引言microRNAs在真核生物中具有特异的时空及组织表达模式~([1]),参与了器官发育、特定细胞过程,以及人类疾病等精细调控~([2])。近年来,对乳腺发育进程研究表明,miRNAs作为一类重要的调控因子,通过调控基因表达参与了乳腺发育过程,但miRNAs在山羊正常乳腺生理与泌乳的研究相对较少。因此,本研究以5只健康的崂山奶山羊不同泌乳时期的乳腺组织为研究对象,采用Illumina/Solexa Sequencing技术鉴定乳腺组织中表达的miRNAs,并采用生物信息学分析其功能。材料方法崂山奶山羊泌乳初期、高峰期和末期乳腺组织(产后20天、90天和210天),提取总RNA
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
山羊乳腺组织论文参考文献
[1].陈志.奶山羊乳腺组织乳脂代谢关键miRNA的筛选及功能验证[D].西北农林科技大学.2016
[2].纪志宾,王桂芝,王建民,刘昭华,候磊.奶山羊乳腺组织中差异表达microRNAs鉴定与分析[C].2015年全国养羊生产与学术研讨会论文集.2015
[3].曹文婷.奶山羊乳腺组织miRNAs的鉴定、筛选及功能的初步研究[D].西北农林科技大学.2015
[4].董飞.奶山羊乳腺组织差异表达miRNA功能预测及miR-135a对PRLR基因靶向调控研究[D].山东农业大学.2014
[5].张犁苹,罗军,林先滋,朱江江,石恒波.miR-200家族在西农萨能奶山羊乳腺组织中的表达分析[J].畜牧兽医学报.2013
[6].纪志宾.奶山羊泌乳期乳腺组织microRNA表达谱分析及miR-143调控IGFBP5对细胞作用研究[D].山东农业大学.2013
[7].江青东,王慧杰,陈宁.奶山羊乳腺组织5-HTR7基因的克隆与序列分析[J].中国兽医杂志.2013
[8].林先滋.奶山羊乳腺组织乳脂代谢相关miRNAs的筛选及功能验证[D].西北农林科技大学.2013
[9].江青东.萨能奶山羊乳腺组织5-HTR4基因的克隆序列分析与原核表达[J].中国兽医杂志.2012
[10].江青东,王慧杰.萨能奶山羊乳腺组织5-HTR1基因的克隆与序列分析[J].中国兽医杂志.2012