导读:本文包含了重组载体论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:病毒,载体,蛋白,疫苗,乙型肝炎,基因,阿霉素。
重组载体论文文献综述
贾政,刘茜,邢正江,邹弘麟,李亚雄[1]（2019）在《重组腺病毒载体Ad-EGFP-Klotho构建的实验研究》一文中研究指出目的本研究旨在构建并制备增强型荧光蛋白(EGFP)基因和Klotho基因重组腺病毒载体AdEGFP-Klotho,并将其感染HEK293细胞,为基因治疗提供研究基础。方法设计含有NheⅠ与NotⅠ双酶切位点的引物,应用PCR方法扩增Klotho基因,将其连接到EGFP标记的pDC316-mCMV穿梭质粒上,构建重组穿梭质粒pDC316-mCMV-EGFP-Klotho,利用Polyfectin脂质体将骨架质粒和重组穿梭质粒共转染HEK293细胞进行同源重组,得到重组腺病毒Ad-EGFP-Klotho,并包装扩增,测定病毒颗粒数及滴度。采用PCR方法对重组腺病毒载体Ad-EGFP-Klotho进行鉴定,并进行Klotho基因测序。结果经PCR和NheⅠ、NotⅠ双酶切鉴定,重组腺病毒载体Ad-EGFP-Klotho中证实含有Klotho基因,测序结果和设计序列比对一致,重组腺病毒载体Ad-EGFP-Klotho构建成功。滴度为2.0×1010 Tu/mL,成功感染HEK293细胞,感染复数(MOI)=100,感染效率达91.75%,从Ad-EGFP-Klotho重组腺病毒载体中可以检测到3 045bp的条带,表明目的基因已成功整合在重组腺病毒载体Ad-EGFP-Klotho基因组中。结论应用细胞内同源重组方法成功构建了含有EGFP和Klotho基因的重组腺病毒载体Ad-EGFP-Klotho,制备获得高滴度的病毒,可高效感染HEK293细胞并表达目的蛋白。(本文来源于《重庆医学》期刊2019年23期）
高超,李德山,肖莉杰[2]（2019）在《表达双基因的重组新城疫病毒载体的构建》一文中研究指出为了构建表达双外源基因的重组新城疫病毒载体,试验采用分子生物学方法对重组新城疫病毒进行了研究。通过反向遗传学操作构建并拯救表达双基因的重组新城疫病毒[r Clone30-EGFP(NP/P)-RFP (P/M)];用重组新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞并绘制生长曲线;通过免疫荧光试验检测重组新城疫病毒感染HepG2细胞后荧光蛋白的表达情况。结果表明:试验成功构建并拯救了表达双基因的重组新城疫病毒;重组新城疫病毒的生长动力学与亲本病毒相似,差异不显着(P>0. 05);重组新城疫病毒能够在HepG2细胞中稳定表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和红色荧光蛋白(RFP)。说明重组新城疫病毒感染HepG2细胞后可稳定表达双外源基因。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2019年21期）
李蕾,谢建山,杜家政,师亮,崔慧林[3]（2020）在《利用同源重组构建大鼠甘油二酯激酶γ(DGKγ)慢病毒过表达载体》一文中研究指出背景:慢病毒载体作为外源性转基因载体已被广泛应用,但是大鼠甘油二酯激酶γ(diacylglycerol kinase γ,DGKγ)基因慢病毒载体未见报道。目的:用同源重组的方法构建大鼠DGKγ慢病毒过表达载体。方法:提取成年SD大鼠脑组织总RNA,以反转录得到的c DNA作为模板,通过PCR反应分段扩增大鼠DGKγ基因CDS区5'端1 029 bp和3'端1 362 bp,用同源重组技术将这2个片段与线性化载体进行定向连接,构建CMV-rat DGKγ-GFP慢病毒载体并进行PCR扩增及测序鉴定。经293T细胞包装后产生慢病毒,收集慢病毒感染293T细胞,荧光显微镜下观察细胞中GFP的表达并应用实时荧光定量PCR和Western blotting法检测细胞中DGKγ mRNA和蛋白的表达。结果与结论:CMV-rat DGKγ-GFP慢病毒载体经PCR扩增和测序鉴定构建成功;经CMV-rat DGKγ-GFP慢病毒感染后的293T细胞,荧光显微镜下呈GFP阳性,实时荧光定量PCR显示DGKγ mRNA的表达较空载体组显着升高(P <0.01),Western blotting显示DGKγ蛋白表达较空载体组极显著升高(P <0.001)。提示:成功构建了大鼠DGKγ慢病毒过表达载体,DGKγ在293T细胞有效高表达。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2020年02期）
赵凤仪,何明倩,王悦,张萌,胡诗倩[4]（2019）在《人TSHR A亚单位重组腺相关病毒2/9载体的构建及鉴定》一文中研究指出目的构建人促甲状腺素受体(TSHR)A亚单位重组腺相关病毒2/9杂合载体(rAAV2-9-hTSHR289-IRES-ZsGreen),为研究格雷夫斯病建立理想动物模型和探索基因预防提供更佳手段。方法以EcoRⅠ和BamHⅠ将腺相关病毒骨架质粒pAAV-IRES-ZsGreen和含hTSHR289的pDC315质粒双酶切,回收酶切病毒骨架质粒及目的片段进行连接,产物转化JM109感受态细菌,获取重组腺相关病毒骨架质粒pAAV-hTSHR289-IRES-ZsGreen。经酶切电泳、测序鉴定后,将pAAV-hTSHR289-IRES-ZsGreen、辅助质粒pHelper、包装质粒pAAV-2/9(AAV2-Rep,AAV9-Cap)采用磷酸钙法转染293AAV细胞系,获取大量rAAV2/9-hTSHR289-IRES-ZsGreen,经纯化后荧光显微镜下观察其包装效率,rQ-PCR法测定病毒滴度。将rAAV2/9-hTSHR289-IRES-ZsGreen感染HEK293细胞,ELISA法检测不同时间点hTSHR289蛋白表达水平。结果重组腺相关病毒骨架质粒pAAV-hTSHR289-IRES-ZsGreen经双酶切及测序鉴定,质粒构建正确;荧光显微镜下观察显示转染293AAV细胞72 h,病毒包装效率达92%～94%,rQ-PCR法测定的rAAV2/9-hTSHR289-IRES-ZsGreen病毒滴度为1×10~(13)vg/mL;ELISA法显示rAAV2/9介导的hTSHR289蛋白表达96 h明显高于72 h及48 h。结论成功构建rAAV2/9-hTSHR289-IRES-ZsGreen重组腺相关病毒载体并能有效转染和表达。(本文来源于《西安交通大学学报(医学版)》期刊2019年06期）
胡孔颖,谷陈建,吴敏乐,陶帅,刘楠楠[5]（2019）在《构建表达Flag-GPI的重组乙型肝炎病毒载体》一文中研究指出乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)是小型的嗜肝DNA病毒,能够特异性地感染人肝实质细胞。HBV的易感性可以归于多个方面,包括细胞表面的受体以及细胞内的蛋白或其他因子,目前对HBV易感性的了解还有待深入。本课题利用课题组原有的HBV 5c3c载体和糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinositol,GPI)的特性,构建了重组HBV载体5c3c-CD59-Flag-GPI和5c3cT-Flag-GPI,转染Huh7细胞后可以将Flag标签锚定在细胞膜上,且可利用Flag抗体通过流式细胞术对其进行分选。在回补HBV包膜蛋白的情况下,5c3cT-Flag-GPI能包装形成完整的重组HBV颗粒。本研究为后续优化重组HBV的包装效率,进而为HBV易感性研究提供工具并奠定基础。(本文来源于《微生物与感染》期刊2019年04期）
董雷,马春芳,蔡宛如[6]（2019）在《小窝蛋白-1重组慢病毒载体的构建及鉴定》一文中研究指出目的构建小窝蛋白-1(Cav-1)重组慢病毒载体,并在293T细胞和小鼠中验证Cav-1过表达。方法将Cav-1基因克隆至慢病毒载体GV287,然后利用酶切、PCR扩增鉴定、阳性克隆鉴定及测序验证构建Cav-1重组慢病毒。将Cav-1重组慢病毒转染至293T细胞,通过荧光检测慢病毒转染效果,采用Western blot法检测Cav-1蛋白表达情况,同时转染C57BL6小鼠,免疫组化法检测小鼠肺组织中Cav-1的表达情况。结果经酶切、PCR扩增鉴定以及阳性克隆测序,提示Cav-1重组慢病毒构建正确。荧光检测显示转染Cav-1重组慢病毒后的293T细胞可见强荧光,Western blot法检测结果显示目的基因可表达,小鼠肺组织中Cav-1呈强阳性表达,且实时定量PCR检测Cav-1重组慢病毒滴度为1.3×1012copies/ml,达到可利用标准。结论采用本研究方法可成功构建Cav-1重组慢病毒载体。(本文来源于《浙江医学》期刊2019年14期）
梁春梅,许旭叁,余华军,周霞,温霞[7]（2019）在《含心脏阿霉素反应蛋白基因的重组慢病毒过表达和RNA干扰载体的构建及鉴定》一文中研究指出目的:构建心脏阿霉素反应蛋白(CARP)基因重组慢病毒过表达和RNA干扰载体并进一步包装慢病毒,为研究CARP在阿霉素(ADR)心肌病中的作用及机制奠定基础。方法:将PCR扩增的大鼠CARP基因序列和设计合成的短发夹RNA (shRNA)序列分别插入GV-358和GV-248表达载体,行DNA测序鉴定。采用重组CARP过表达和shRNA表达穿梭载体与Helper 1.0和Helper 2.0辅助包装质粒共转染人胚肾细胞HEK293T,进行病毒包装和扩增,采用终点稀释法测定病毒滴度。采用重组慢病毒感染HEK293T细胞,荧光显微镜观察绿色荧光强度。采用重组慢病毒感染H9C2细胞,分为对照组、Scramble RNA组、CARP过表达组和shRNA CARP组,Western blotting法检测各组细胞中CARP蛋白表达水平。结果:基因测序,CARP过表达及shRNA载体序列与原设计序列完全相符。载体转染HEK293T细胞后,在荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白表达。包装的CARP过表达及shRNA病毒感染H9C2细胞后,与对照组比较,CARP过表达组细胞中CARP蛋白表达水平升高5.3倍(P=0.01),shRNA CARP组细胞中CARP蛋白表达水平降低53%(P=0.02)。结论:成功构建了CARP过表达和特异性shRNA慢病毒表达载体并获得高感染效率的过表达和RNA干扰慢病毒,后者在H9C2细胞中能够干预CARP表达。(本文来源于《吉林大学学报(医学版)》期刊2019年04期）
韩聪,黄勇,童德文[8]（2019）在《敲除/过表达npm1重组慢病毒载体的构建及其对PCV2复制影响》一文中研究指出(目的)本研究旨在明确宿主细胞核仁磷酸蛋白1型(Nucleophosmin 1,NPM1)对猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)复制的影响,为进一步研究NPM1在PCV2复制过程中的作用及机制奠定基础。(方法)本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术获得用于敲除npm1的重组慢病毒载体,与此同时克隆宿主细胞npm1基因,构建过表达npm1的重组慢病毒载体。随后通过包装慢病毒的方法,分别获得npm1过表达和敲除的慢病毒。再用上述慢病毒分别感染PK-15后分别用嘌呤霉素和G418进行筛选获得npm1敲除及过表达的PK-15细胞系,然后通过测序及Western blot进行鉴定。最后用PCV2感染野生型、npm1敲除及过表达的PK-15,荧光定量PCR法检测感染后24 h、48 h和72 h PCV2的病毒粒子拷贝数。(结果)基因组测序及Western blot鉴定结果均表明,本试验成功获得npm1敲除及过表达的PK-15。荧光定量PCR检测结果表明,与野生型PK-15相比,在感染后24 h,npm1敲除及过表达的PK-15中PCV2拷贝数未发生显着变化(p> 0.05),而在感染后48 h和72h,npm1敲除的PK-15中的PCV2拷贝数显着下降(p <0.05);在感染后72 h,npm1过表达的PK-15中PCV2拷贝数显着升高(p <0.05)。(结论)以上结果提示宿主细胞蛋白NPM1能够促进PCV2的复制。(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会论文集》期刊2019-07-27）
谢青梅,封柯宇,沈勇[9]（2019）在《动物病毒重组活载体疫苗研究进展》一文中研究指出病毒活载体疫苗作为一种新型疫苗,与传统疫苗相比,具有极大的优势与应用前景,是当今与未来疫苗研制与开发的重要方向之一。目前在人类医学和兽医领域,病毒活载体疫苗均取得了大量的研究成果。本文综述了主要的兽用病毒疫苗载体及重组活载体疫苗的最新研究进展,并分析了其发展趋势,为进一步研制新型重组病毒疫苗提供参考。(本文来源于《华南农业大学学报》期刊2019年05期）
谢程欣,胡庄明,王维,尹东,余城墙[10]（2019）在《重组人骨形态发生蛋白2在四肢骨创伤中的应用:深入探讨理想载体及最佳剂量等问题》一文中研究指出背景:目前对于重组人骨形态发生蛋白2在骨创伤中的运用还存在局限性,其有效性和安全性尚不明确。目的:文章通过综述重组人骨形态发生蛋白2在四肢骨创伤中的应用进展,深入了解这种蛋白质的有效性和安全性,更好地指导临床运用。方法:以"Recombinant human bone morphogenetic Protein-2,Fracture,Bone trauma,Bonedefect,Bone injuries,Femur,Tibia,Ulna,Long bone,Complications"或"重组人骨形态发生蛋白2、骨折、骨创伤、骨缺损、骨损伤、股骨、胫骨、尺骨、长骨、并发症"等作为检索词,由第一作者检索2008至2018年Pub Med、Medline、Embase、中国知网、万方及维普数据库收录的与重组人骨形态发生蛋白2在四肢骨创伤临床应用研究相关的文献,并进行评估,排除重复及相关率低的文章,最终得到60篇相关文献。结果与结论:重组人骨形态发生蛋白2在治疗股骨及胫骨骨折、骨缺损等疾病中多数取得了较为满意的疗效,但在上肢长骨骨折及手足创伤中应用较少。随着相关研究增多,对重组人骨形态发生蛋白2安全性及有效性的争议日益激烈。今后仍需要深入探索更为理想的载体及协同物,确定重组人骨形态发生蛋白2的最佳使用剂量,以在保证疗效的同时减少并发症及患者经济负担。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2019年30期）
重组载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了构建表达双外源基因的重组新城疫病毒载体,试验采用分子生物学方法对重组新城疫病毒进行了研究。通过反向遗传学操作构建并拯救表达双基因的重组新城疫病毒[r Clone30-EGFP(NP/P)-RFP (P/M)];用重组新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞并绘制生长曲线;通过免疫荧光试验检测重组新城疫病毒感染HepG2细胞后荧光蛋白的表达情况。结果表明:试验成功构建并拯救了表达双基因的重组新城疫病毒;重组新城疫病毒的生长动力学与亲本病毒相似,差异不显着(P>0. 05);重组新城疫病毒能够在HepG2细胞中稳定表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和红色荧光蛋白(RFP)。说明重组新城疫病毒感染HepG2细胞后可稳定表达双外源基因。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
重组载体论文参考文献
[1].贾政,刘茜,邢正江,邹弘麟,李亚雄.重组腺病毒载体Ad-EGFP-Klotho构建的实验研究[J].重庆医学.2019
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[9].谢青梅,封柯宇,沈勇.动物病毒重组活载体疫苗研究进展[J].华南农业大学学报.2019
[10].谢程欣,胡庄明,王维,尹东,余城墙.重组人骨形态发生蛋白2在四肢骨创伤中的应用:深入探讨理想载体及最佳剂量等问题[J].中国组织工程研究.2019
论文知识图
