一种新型亮氨酸5-羟化酶NmLEH的异源表达、纯化及酶学性质分析

论文摘要

羟基化氨基酸是一种新型氨基酸衍生物,可广泛用作化工材料的前体物及医药合成的中间体。将来源于Nostoc minutum的新型L-亮氨酸5-羟化酶（Nm LEH）通过重组质粒在大肠杆菌中异源表达。结果表明,在BL21 （DE3）宿主细胞中,诱导温度为25℃,IPTG诱导浓度为0. 5mmol/L,诱导10h时,蛋白质表达量最高（0. 45mg/ml）;通过Ni-亲和层析和凝胶过滤层析两步分离纯化获得了高度纯化的重组Nm LEH蛋白;对Nm LEH的酶学性质进行了表征,该酶的最适反应温度为25℃,最适pH为7. 5,在pH 7. 0～9. 0较为稳定,最适底物为亮氨酸和甲硫氨酸;同源序列分析表明Nm LEH属于亚铁和α-酮戊二酸依赖性双加氧酶家族[Fe（II）/αKG-Dos],并预测了该酶的保守催化活性位点（H150、D152、H236）;通过同源建模得到了该蛋白质的模拟结构,分析了该蛋白质催化活性中心的形成机制。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 朱梦露,王雪雨,刘鑫,路福平,孙登岳,秦慧民

关键词: 亮氨酸羟化酶,表达纯化,酶学性质,底物特异性,催化活性中心

来源: 中国生物工程杂志 2019年12期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 天津科技大学生物工程学院,天津科技大学工业发酵微生物教育部重点实验室,工业酶国家工程实验室

基金: 国家自然科学基金(31771911),天津市自然科学基金(16JCQNJC09200),天津市大学生创新创业训练计划项目(1000204)资助项目

分类号: Q78

DOI: 10.13523/j.cb.20191204

页码: 24-34

总页数: 11

文件大小: 6232K

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