首页> 正文

单增李斯特菌双组分信号系统的组氨酸激酶与毒力相关性研究

2020-12-08阅读(667)

单增李斯特菌双组分信号系统的组氨酸激酶与毒力相关性研究

论文摘要

单核细胞增生性李斯特菌（Listeria monocytogenges,Lm）简称单增李斯特菌,属革兰氏阳性菌,是WHO划定的重要食源性病原菌,导致人兽共患病——李斯特菌病（Listeriosis）。Lm适应性较强,在自然界环境中是腐生菌,但侵入动物机体后就摇身变成了致病菌。由感应外界信号的组氨酸激酶（Histidine kinase,HK）和调控胞内相关基因表达的应答调控子（Response regulator,RR）组成的细菌双组分信号系统（Two-Component Signal Transduction System,TCS）是细菌适应环境的重要调控系统。研究发现,Lm侵入机体变成致病菌,这种角色的转变与Lm的TCS中的有些RR密切相关,但与负责感应外界信号的HK的相关性的报道则鲜见。因此,本研究以Lm的HKs为研究对象,探究HKs与Lm的毒力的相关性,从而为进一步了解Lm的致病性及预防和治疗李斯特菌病提供理论依据。本课题组对Lm食品分离株LM201进行了全基因组测序和分析,搜索、分析和总结了LM201中的TCSs,得知LM201共有14对HK/RR和两个孤儿RR。本研究以LM201为材料,分别成功构建了13株HK的缺失菌株,对缺失株进行了生长曲线测定、细胞实验和小鼠毒力测定,具体实验结果如下:1.HK缺失株的构建以温敏自杀性质粒pHT304-ts为载体,用同源重组的方法成功构建了13株LM201的HK缺失株,分别是S0106（?cheA）、S0132（?cesK）、S0142（?phoR）、S0152（?hssS）、S0162（?kdpD）、S0172（?agrC）、S0182（?liaS）、S0192（?lisK）、S01A2（?yclK）、S01B2（?resE）、S01C2（?eutW）S01D2（?virS）和S01E2（?yesM）。2.缺失株生长曲线测定对13株缺失株进行37℃生长曲线测定,结果显示,菌株S0106（?cheA）、S0142（?phoR）、S0162（?kdpD）和S0172（?agrC）在稳定期时细菌量低于亲本株LM201,其他缺失株与LM201生长趋势一致。对13株缺失株进行5℃生长曲线测定,结果发现,与亲本株LM201相比菌株S0192（?lisK）的生长速度变缓慢,其他缺失株与LM201生长趋势一致。3.缺失株细胞实验结果13株缺失株上皮细胞Caco-2（结肠腺癌细胞）细胞实验结果表明,与亲本株LM201相比,S0192（?lisK）、S01D2（?virS）和S01E2（?yesM）的黏附与侵袭能力均显著下降,S0106（?cheA）和S01A2（?yclK）的黏附能力显著上升,S01B2（?resE）和S01C2（?eutW）的侵袭能力显著上升。HBMEC（人脑微血管内皮细胞）细胞实验结果显示,S0182（?liaS）的黏附与侵袭能力与亲本株LM201相比均显著上升,S0132（?cesK）和S01B2（?resE）黏附能力显著下降,S0172（?agrC）的侵袭能力显著上升。RAW264.7细胞（小鼠巨噬细胞）实验结果显示,与亲本株LM201相比,缺失株S01D2（?virS）、S01B2（?resE）和S01C2（?eutW）在细胞中的细菌量显著下降,说明基因virS、resE或eutW缺失会导致Lm在RAW264.7细胞中的存活能力减弱。4.缺失株的小鼠实验结果对13株缺失株进行了小鼠组织载菌量实验,结果显示,S0172（?agrC）在24h肝脏载菌量显著下降,48h肝脏和脾脏载菌量显著上升,72h肝脏和脾脏载菌量又显著下降。S0192（?lisK）在24h和48h的肝脏和脾脏载菌量均显著下降。S01E2（?yesM）在48h肝脏和脾脏载菌量显著下降,在72h脾脏载菌量显著下降。13株缺失株半数致死量(LD50)测定结果显示,菌株S0152（?hssS）、S0172（?agrC）和S01D2（?virS）与亲本株LM201(LD50为2.08×105)相比LD50上升较高,分别为9.84×105、10.37×105和9.78×105,其毒力与LM201相比分别下降4.73、4.99和4.70倍。菌株S0142（?phoR）、S0162（?kdpD）和S0182（?liaS）的LD50分别为8.4×104、1.18×105和1.24×105,与LM201(LD50为2.08×105)相比毒力上升。综合以上结果,发现13个HK中HssS、AgrC、LisK、VirS或YesM缺失导致Lm的毒力下降,LiaS缺失导致Lm毒力上升。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 缩略语表（Abbreviation）
  • 1 文献综述
  •   1.1 单增李斯特菌简介
  •     1.1.1 病原学
  •     1.1.2 致病性
  •     1.1.3 流行病学特征
  •     1.1.4 预防及治疗
  •   1.2 双组分信号转导系统
  •     1.2.1 双组分信号转导系统简介
  •     1.2.2 双组分信号转导系统的组成及调节机制
  •   1.3 单增李斯特菌LM201中的双组分信号转导系统
  •   1.4 单增李斯特菌TCS中的HKs与毒力相关性的研究进展
  • 2 目的和意义
  • 3 材料与方法
  •   3.1 材料
  •     3.1.1 菌株和质粒
  •     3.1.2 实验动物和细胞系
  •     3.1.3 主要仪器
  •     3.1.4 主要试剂
  •     3.1.5 主要溶液配制
  •     3.1.6 引物
  •   3.2 方法
  •     3.2.1 缺失突变株的构建
  •     3.2.2 生长特性测定
  •     3.2.3 细胞实验
  •     3.2.4 小鼠毒力实验
  • 4 结果
  •   4.1 HK缺失突变株的构建
  •     4.1.1 同源臂的PCR扩增及上下游同源臂Over-lap连接
  •     4.1.2 重组自杀质粒酶切鉴定
  •     4.1.3 重组自杀质粒电转化LM201
  •     4.1.4 缺失突变株的筛选
  •   4.2 缺失株生长特性测定
  •     4.2.1 37℃生长特性测定
  •     4.2.2 5℃生长特性测定
  •   4.3 缺失株细胞实验结果
  •     4.3.1 Caco-2细胞的黏附与侵袭实验结果
  •     4.3.2 HBMEC细胞的黏附与侵袭实验结果
  •     4.3.3 RAW264.7细胞实验
  •   4.4 小鼠毒力实验结果
  •     4.4.1 肝脏载菌量的测定
  •     4.4.2 脾脏载菌量的测定
  • 50)的测定'>    4.4.3 小鼠半数致死量(LD50)的测定
  • 5 讨论与分析
  •   5.1 yycG基因缺失
  •   5.2 HK的缺失对细菌生长的影响
  •   5.3 缺失株细胞实验
  •     5.3.1 缺失株结肠腺癌细胞Caco-2实验结果
  •     5.3.2 缺失株人脑微血管内皮细胞HBMEC结果分析
  •     5.3.3 HK缺失对Lm在小鼠巨噬细胞RAW264.7内生存的影响
  •   5.4 缺失株小鼠组织载菌量结果
  • 50的影响'>  5.5 缺失株对小鼠LD50的影响
  • 6 总结
  • 参考文献
  • 致谢

    • 文章来源

    类型: 硕士论文

    作者: 黄金梅

    导师: 刘梅

    关键词: 单增李斯特菌,双组分信号转导系统,组氨酸激酶,毒力

    来源: 华中农业大学

    年度: 2019

    分类: 基础科学,农业科技

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 华中农业大学

    分类号: S852.61

    DOI: 10.27158/d.cnki.ghznu.2019.000282

    总页数: 55

    文件大小: 2956K

    下载量: 68

    相关论文文献

    • [1].食源性单增李斯特菌检测方法研究进展[J]. 河南大学学报(医学版) 2019(04)
    • [2].食品中单增李斯特菌的存在现状及检测方法研究[J]. 中国医药指南 2020(21)
    • [3].金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌快检试剂盒(溶液)的评价验证[J]. 工业微生物 2020(04)
    • [4].单增李斯特菌溶血素O的功能研究进展[J]. 微生物学杂志 2020(04)
    • [5].一起单增李斯特菌引起新生儿败血症的溯源研究[J]. 疾病监测 2018(11)
    • [6].自贡市2014年农贸市场食品中单增李斯特菌污染状况调查[J]. 实用预防医学 2019(03)
    • [7].广州市58株单增李斯特菌菌株特征分析[J]. 现代预防医学 2019(05)
    • [8].单增李斯特菌恒温荧光PCR检测方法的建立及应用[J]. 中国新技术新产品 2019(09)
    • [9].食品中单增李斯特菌快速检测技术研究进展[J]. 食品安全质量检测学报 2019(18)
    • [10].多交叉置换扩增技术在单增李斯特菌检测中的应用及评价[J]. 中国人兽共患病学报 2018(02)
    • [11].豫西地区市售鸭翅中单增李斯特菌毒力基因的检测[J]. 中国畜牧兽医 2014(11)
    • [12].食品中亚致死损伤单增李斯特菌的研究进展[J]. 食品科学 2015(03)
    • [13].不同金属离子对单增李斯特菌生物被膜形成的影响研究[J]. 河南工业大学学报(自然科学版) 2015(04)
    • [14].谨防单增李斯特菌污染的食物[J]. 食品与生活 2017(10)
    • [15].食源性单增李斯特菌的分离鉴定及药物敏感试验[J]. 中国兽医杂志 2018(12)
    • [16].单增李斯特菌与细胞焦亡[J]. 中国畜牧兽医文摘 2018(01)
    • [17].美国研究利用单一和复合抗菌剂对全脂乳中的单增李斯特菌进行控制[J]. 乳业科学与技术 2018(01)
    • [18].绿色魏斯氏菌对单增李斯特菌毒力特性的影响[J]. 南京农业大学学报 2018(04)
    • [19].单增李斯特菌的快速检测方法研究进展[J]. 现代农业科技 2016(24)
    • [20].丁香精油对单核细胞增生性李斯特菌的抗菌性能及杀菌机制研究[J]. 中国食品添加剂 2015(12)
    • [21].银川市市售食品中单增李斯特菌污染状况分析研究[J]. 安徽农业科学 2014(18)
    • [22].一起血液病区单增李斯特菌病的爆发并文献复习[J]. 中华临床医师杂志(电子版) 2013(04)
    • [23].单增李斯特菌定量检测方法研究[J]. 中国农学通报 2012(23)
    • [24].不同培养条件对单增李斯特菌生物被膜形成的影响研究[J]. 食品研究与开发 2010(11)
    • [25].进口冷冻鸡翼尖中单增李斯特菌的分离与鉴定[J]. 中国禽业导刊 2009(04)
    • [26].食品中单增李斯特菌的存在现状及检测方法研究进展[J]. 食品研究与开发 2008(12)
    • [27].应用不同培养基检测单增李斯特菌结果比较[J]. 上海预防医学杂志 2008(01)
    • [28].单增李斯特菌免疫胶体金试纸条快速检测[J]. 中国公共卫生 2008(02)
    • [29].2005-2018年陕西省宝鸡市市售食品中单核细胞增生李斯特氏菌污染状况研究[J]. 医学动物防制 2020(01)
    • [30].单增李斯特菌在模拟人体胃环境中的耐受性[J]. 中国食品学报 2018(12)

    标签：;  ;  ;  ;  

    单增李斯特菌双组分信号系统的组氨酸激酶与毒力相关性研究
    下载Doc文档

    猜你喜欢

    © 2024 毕论降 版权所有 鄂ICP备12018319号-6