实时荧光PCR定量测定肉制品中羊源性成分

实时荧光PCR定量测定肉制品中羊源性成分

论文摘要

为准确定量肉制品中羊源性成分的含量,以羊单拷贝基因为扩增靶基因,设计合成羊源的引物、探针,制备羊源和脊椎动物通用基因的重组质粒以构建标准曲线,通过方程算出各自的拷贝数,根据拷贝数的比值计算样品中羊肉源成分占总肉成分的百分比含量,建立荧光定量PCR检测体系,并对已知目标肉含量的混合肉样进行定量检测。结果显示,该方法具有良好的特异性和灵敏度,最低检测到羊的DNA含量为0.02 ng/μL。对已知目标肉含量的混合肉样进行定量检测发现,羊肉掺入量为90%、50%时所得结果相对准确,相对标准偏差分别为5.69%和10.82%,且不受外源物种的干扰。本试验建立的定量PCR方法能够准确检测出不同样品中羊肉的含量,并发现存在掺假现象。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料与仪器
  •   1.2 实验方法
  •     1.2.1 肉样制备
  •     1.2.2 DNA提取
  •     1.2.3 羊源性荧光定量引物和探针
  •     1.2.4重组质粒的构建
  •     1.2.5 荧光定量PCR检测方法的确定
  •     1.2.6 荧光定量PCR标准曲线的建立
  •     1.2.7 相对定量检测体系的建立
  •     1.2.8 羊源性成分荧光定量PCR检测方法的评价
  •       1.2.8.1 灵敏度的测定
  •       1.2.8.2 特异性的测定
  •     1.2.9 制作模拟加工样品检测定量体系
  •     1.2.10 市售样品的检测
  •   1.3 数据处理
  • 2 结果与分析
  •   2.1 重组质粒的鉴定
  •   2.2 重组质粒的测序结果
  •   2.3 羊源及通用重组质粒标准曲线的建立
  •   2.4 羊源性成分荧光定量PCR检测方法的评价
  •     2.4.1 羊源性成分荧光定量PCR检测方法的灵敏度
  •     2.4.2 羊源性成分荧光定量PCR检测方法的特异性
  •   2.5 模拟加工样品定量检测
  •   2.6 市售样品的检测
  • 3 结论与讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 张秀平,苗丽

    关键词: 实时荧光,羊源性成分,肉制品,掺假

    来源: 食品工业科技 2019年07期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑

    专业: 轻工业手工业

    单位: 河南出入境检验检疫局

    基金: 国家质检总局科技计划项目(2014IK089),河南省科技攻关项目(172102110202)

    分类号: TS251.7

    DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2019.07.021

    页码: 119-123+130

    总页数: 6

    文件大小: 657K

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