人源抗狂犬病病毒单克隆抗体的构建及验证

论文摘要

目的利用人源抗狂犬病病毒ScFv噬菌体抗体库,构建单克隆抗体(单抗)轻、重链质粒,瞬时表达,纯化后验证具有高中和活性的单抗。方法以从ScFv噬菌体抗体库中筛选获得特异性抗体为模板,PCR扩增抗体轻、重链可变区序列,构建人源全分子抗体瞬时转染质粒;轻、重链质粒混合后转染HEK293 EBNA1细胞,瞬时表达全分子抗体。采用Mabselect SuRe介质手动亲和纯化抗体,Nano Vue超微量分光光度计测定蛋白质的质量浓度,快速荧光灶抑制试验(rapid fluorescent focus inhibition test, RFFIT)进行体外中和效价验证。结果成功构建22个轻链质粒,15个重链质粒。通过真核细胞瞬时表达后,经手动亲和纯化后,获得22株单抗。除1株抗体外,其余21株抗体的蛋白质量浓度均>300μg/mL;部分抗体纯度均在90%以上。中和活性结果显示,5株在1 500～1 800 IU/mg之间;8株在800～1 500 IU/mg之间;7株在500～800 IU/mg之间;其余2株在500 IU/mg以下。结论成功构建并验证获得20株中和活性>500 IU/mg的人源抗狂犬病病毒单抗,为单抗混合制剂的研究奠定了基础。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 房世娣,赵晓瑞,陈继军,安晨,南建军,毛晓燕

关键词: 狂犬病病毒,单克隆抗体,噬菌体抗体库,快速荧光灶抑制试验

来源: 微生物学免疫学进展 2019年04期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 兰州生物制品研究所有限责任公司第四研究室甘肃省疫苗工程技术研究中心

基金: 兰州市科技重大专项(2017-02-1)

分类号: R392-33

DOI: 10.13309/j.cnki.pmi.2019.04.002

页码: 7-13

总页数: 7

文件大小: 1872K

下载量: 198

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