细胞传代对SD大鼠骨髓间充质干细胞衰老的影响

细胞传代对SD大鼠骨髓间充质干细胞衰老的影响

论文摘要

目的探究体外传代培养对SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)衰老的影响。方法全骨髓贴壁法分离培养大鼠BMSCs,待细胞汇合率达80%~90%时,进行消化传代及纯化培养。对不同代数细胞,进行倒置显微镜下观察细胞形态学及生长特性,绘制1~7 d生长曲线,流式细胞仪检测细胞表面抗原标志物(CD29、CD45和CD90)和细胞周期,β-半乳糖苷酶染色并记录阳性细胞数,Western印迹法检测衰老相关蛋白P53和P21表达情况。结果 SD大鼠BMSCs的CD29、CD90高表达(>95%),CD45低表达(<5%),细胞周期中G0/G1期占87.37%;相较于P1~5代细胞,P7~9代细胞增殖能力明显下降,β-半乳糖苷酶染色阳性细胞明显增多;随着传代次数的增加,BMSCs的P53、P21表达增高。结论体外培养传代次数的增加可导致SD大鼠BMSCs衰老。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 实验动物
  •   1.2 主要试剂与器械
  •   1.3 实验方法
  •     1.3.1 SD大鼠BMSCs的原代分离与培养
  •     1.3.2 BMSCs 的纯化与扩增
  •     1.3.3 BMSCs 的形态学观察
  •     1.3.4 BMSCs表面标志物的鉴定
  •     1.3.5 BMSCs 细胞周期检测
  •     1.3.6 BMSCs生长曲线的绘制
  •     1.3.7 细胞衰老β-半乳糖苷酶染色
  •     1.3.8 免疫印迹检测
  •   1.4 统计学分析
  • 2 结 果
  •   2.1 SD大鼠BMSCs鉴定
  •   2.2 BMSCs 细胞周期
  •   2.3 不同代数细胞生长情况
  •   2.4 不同代数细胞β-半乳糖苷酶染色阳性率
  •   2.5 不同代数细胞P53和P21表达变化
  • 3 讨 论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 黄玉圣,吕辰菲,庄景燊,徐平,涂晨,吴迪峥,钟招明

    关键词: 骨髓间充质干细胞,细胞传代,细胞衰老

    来源: 中国老年学杂志 2019年09期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技,基础科学

    专业: 生物学,基础医学

    单位: 南方医科大学南方医院脊柱骨科,南方医科大学南方医院神经内科

    基金: 国家自然科学基金项目(No.81472135,81871819)

    分类号: R329.2

    页码: 2189-2192

    总页数: 4

    文件大小: 400K

    下载量: 226

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