导读:本文包含了精子介导法论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:精子,基因,不饱和,转染,脂肪酸,复数,转基因。
精子介导法论文文献综述
赵丽玲[1]（2013）在《慢病毒载体精子介导法生产转基因鸡研究》一文中研究指出本研究探索并建立基于慢病毒载体精子介导法高效制备生产转基因鸡的技术体系。构建了以绿色荧光蛋白为报告基因的真核表达载体和慢病毒表达载体,并对293T细胞进行转染分析对比。用慢病毒感染原代培养细胞鸡生殖细胞和鸡胚小肠上皮细胞,并用实时荧光定量PCR对感染慢病毒的细胞进行目的基因检测。用性成熟公鸡生殖器官组织做切片后,运用微创手术方法,将以绿色荧光蛋白为报告基因的慢病毒载体连续导入性成熟公鸡睾丸,进行精液检查,观察到精子中绿色荧光的表达后,进行人工授精、种蛋孵化,以期在鸡胚和小鸡中检测到目的基因。研究结果：成功构建了以绿色荧光蛋白为报告基因的真核表达载体PcDNA3.1-GFP和慢病毒表达载体并在293T细胞中表达。用慢病毒感染的细胞进行实时荧光定量PCR检测结果：293T细胞感染复数最高,达6.08×107TU/mL;鸡胚小肠上皮细胞5.36×105TU/mL;鸡胚生殖细胞0.84×102TU/mL。用性成熟公鸡生殖器官组织切片,观察公鸡睾丸实质由细精管组成呈网状,适合睾丸注射。应用微创手术法将慢病毒载体连续导入性成熟公鸡睾丸中,在精子中检测到了绿色荧光,将表达绿色荧光的精子体外授精,授精蛋进行孵化,并在第一代转基因鸡中检测到外源基因绿色荧光蛋白的表达。(本文来源于《山西农业大学》期刊2013-06-01）
字向东,梁冠男,陈绍威[2]（2010）在《精子介导法生产转基因牦牛杂种胚胎的研究》一文中研究指出研究外源DNA转染对牦牛精子体外受精(IVF)、早期胚胎发育以及绿色荧光蛋白(GFP)基因在早期胚胎表达的影响。用构建融合人乳铁蛋白基因绿色荧光蛋白表达载体(pAcGFP1-hLF)转染的牦牛精子IVF黄牛卵母细胞,生产的胚胎在荧光显微镜下观察GFP表达情况。结果显示,用环形质粒、线性质粒pAcGFP1-hLF转染的精子及未转染精子IVF后的卵裂率分别为56.4%、54.8%和61.0%,线性转染的囊胚率显着低于环形转染(17.7%与35.7%)。环形质粒转染的精子用DNaseⅠ消化、不消化及未转染的精子IVF后卵裂率分别为44.8%、55.2%和56.3%,囊胚率分别为33.3%、33.3%和30.2%。未经DNaseⅠ消化洗涤的环形质粒组GFP胚胎阳性率显着高于线性质粒组(99.3%与76.6%);DNaseⅠ消化组GFP胚胎阳性率极显着低于不消化组(25.4%与99.3%)。结果表明,用环形质粒DNA转染牦牛精子不会影响其受精及早期胚胎发育能力,但DNaseⅠ消化洗涤显着降低GFP胚胎阳性率。(本文来源于《生物技术通报》期刊2010年08期）
郭战军,马毅,李叁华,韩瑞发,李胜芝[3]（2010）在《利用精子介导法建立hHT/hDAF双基因转移小鼠模型》一文中研究指出为探讨超急排斥反应(Hyperacute rejection,HAR)及延迟性异种排斥反应(Delayed xenograft rejection,DXR)的分子调控机制,采用优化的精子介导法(Sperm-mediated gene transfer,SMGT)对建立hHT/hDAF双基因转移小鼠模型进行了研究。结果表明,应用树枝状聚合物(Dendrimers)优化SMGT后,2细胞胚GFP+RFP的阳性率达到4.51%,同对照组相比差异极显着(P<0.01)。选取标记基因GFP+RFP双阳性的胚胎进行移植后获得36只仔鼠,PCR及Southern Blot检测结果表明,17只小鼠PCR结果呈hHT+hDAF双阳性,其中5只小鼠Southern Blot结果呈hHT+hDAF双阳性。上述结果表明,成功建立了Hht/hDAF双基因转移小鼠模型。(本文来源于《华北农学报》期刊2010年03期）
郭战军[4]（2010）在《以纳米材料作载体改进精子介导法建立异种移植供体模型的研究》一文中研究指出精子介导基因转移(Sperm-mediated gene transfer, SMGT)是目前最简单的转基因动物生产技术,但该方法重复性差、实验结果不稳定。本研究对SMGT的几个关键环节进行了研究,以期建立稳定、高效的技术体系,同时利用该技术体系制备hHT/hDAF双基因转移小鼠模型,为进一步开展异种器官移植奠定基础。第一部分基于树枝状聚合物建立小鼠精子介导基因转移技术的研究目的研究外源DNA与精子相互作用后的定位及内化率是精子载体法制备转基因动物的关键环节,为建立小鼠精子介导基因转移技术奠定基础。方法以标记的DNA片段为示踪材料,就精子与树枝状聚合物(Dendrimers)共孵育后同外源DNA相互作用的基本特征及影响因素进行研究。结果小鼠精子同树枝状聚合物共孵育后可自发性结合外源DNA,外源DNA最初结合于顶体后区质膜外表面,随后部分内化进入细胞内。精子对外源DNA的结合和内化能力随供体的不同而差异明显,在35只小鼠中,结合率(DNase Ⅰ消化前)波动于4.6%～62.4%,内化率(DNase Ⅰ消化后)波动于2.1%-53.8%,个体间差异显着(P<0.01)。对于同一供体的精子而言,阻止DNA结合的最主要因素是精浆,与射出的原精液相比,洗涤后精子的结合率和内化率分别提高了3倍和5倍；其次精子获能也将导致结合率和内化率降低(P<0.01)。死精子不能完成外源DNA的内化过程,但反复冻融导致质膜破裂的死精子具有更高的结合率,而且阳性率与动物个体无关。上述结果提示,筛选合适的精子供体,采用优化的转染处理方法是提高精子载体方法效率的前提和保证。第二部分EGTA等影响SMGT效率的研究目的研究EGTA、核酶抑制剂ATA和蛋白酶抑制剂PMSF对精子活力和体外存活时间、精子顶体反应发生率、精子结合外源DNA能力以及内化DNA降解的影响,提高SMGT效率。方法以DIG标记DNA,以免疫组织化学法研究EGTA、核酶抑制剂ATA和蛋白酶抑制剂PMSF对SMGT效率的影响。结果核酶抑制剂ATA提高精子活力和体外存活时间,增强精子结合外源DNA能力,但ATA添加组精子结合的外源DNA在细胞内几乎全部被降解；EGTA和蛋白酶抑制剂PMSF对内化进入精细胞的外源DNA有良好的保护作用,然而二者阻止精子发生顶体反应；此外,PMSF提高精子对外源DNA结合能力,增强精子运动活性,而EGTA与此正好相反；同时在培养液中添加EGTA和ATA,精子活力、顶体反应发生率和外源DNA结合能力都较EGTA单独加入组有所改善,而且内化DNA的降解效应也被明显抑制。对于精子介导基因转移过程中,在培养液中同时加入EGTA和ATA,既有利于外源DNA结合以及内化DNA的完整性,又保证了精子的受精能力。第叁部分hHT/GFP融合基因表达载体的构建及在小鼠成纤维细胞中的表达目的构建α2-1,2岩藻糖苷转移酶(hHT)基因与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)基因融合表达载体pEGFP-C1-hHT,并在小鼠成纤维细胞表达,验证其有效性。方法提取人总RNA,反转录后以cDNA为模板PCR扩增hHHT基因,连接至pMD18-T载体后进行hindⅢ kpn Ⅰ双酶切,回收酶切片段后插入pEGFP-C1,构建融合表达载体后转染小成纤维细胞。结果成功克隆了hHT基因并构建了融合表达载体pEGFP-C1-hHT。采用脂质体法转染小鼠成纤维细胞48h后观察到GFP阳性细胞。对GFP阳性小鼠成纤维细胞进行PCR及Western blot,检测hHHT基因的整合及表达情况。PCR结果表明hHT基因整合入小鼠基因组。Western blot检测到了hHT基因的表达。上述结果表明,成功构建了融合表达载体pEGFP-C1-hHT,并可应用于进一步转基因研究。第四部分hDAF/RFP融合基因表达载体的构建及在小鼠成纤维细胞中的表达目的构建衰变加速因子(hDAF)基因与红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)基因融合表达载体pDsRed2-C1-hDAF的并在小鼠成纤维细胞表达的研究以验证其有效性。方法提取人总RNA,反转录后以cDNA为模板PCR扩增hDAF基因,连接至pMD18-T载体后进行EcoR Ⅰ、 Sma Ⅰ双酶切,回收酶切片段后插入pDsRed2-C1,构建融合表达载体后转染小鼠成纤维细胞。结果结果表明成功克隆了hDAF基因并构建了融合表达载体pDsRed2-C1-hDAF。采用脂质体法转染小鼠成纤维细胞48h后观察到RFP阳性细胞。对RFP阳性小鼠成纤维细胞进行PCR及Western blot,检测DAF基因的整合及表达情况。PCR结果表明hDAF基因整合入小鼠基因组。Western blot检测到了hDAF基因的表达。表明成功构建了融合表达载体pDsRed2-C1-hDAF,并可应用于进一步转基因研究。第五部分利用精子介导法建立hHT/hDAF双基因转移小鼠模型目的建立hHT/hDAF双基因转移小鼠模型,为探讨超急排斥反应(hyperacute rejection, HAR)及延迟性异种排斥反应(delayed xenograft rejection, DXR)的分子调控机制奠定基础。方法采用优化的精子介导法(Sperm-mediated gene transfer, SMGT)制备转基因胚胎,进行胚胎移植后建立hHT/hDAF双基因转移小鼠模型并进行分子生物学检验。结果结果表明应用树枝状聚合物(Dendrimers)优化SMGT后,2细胞胚GFP+RFP的阳性率达到4.51%,同对照组相比差异极显着(P<0.01)。选取标记基因GFP+RFP双阳性的胚胎进行移植后获得36只仔鼠,PCR及Southern blot检测结果表明,17只小鼠PCR结果呈hHT+hDAF双阳性,其中5只小鼠Southern blot结果呈]hHT+hDAF双阳性。上述结果证实成功建立了hHT/hDAF双基因转移小鼠模型。(本文来源于《天津医科大学》期刊2010-05-01）
孙新明,邱效武,江嘉陵,魏泓[5]（2009）在《山羊精子介导法转染外源基因影响因素及最适条件的研究》一文中研究指出探讨山羊精子与外源DNA共孵育转染外源DNA效率的影响因素,优化精子转染程序。用DIG免疫组化方法检测和比较精子转染效率,因素为精子洗涤程度、转染缓冲液、精子活力、BSA、肝素、异种动物精浆等。离心洗涤3次以内的山羊精子DNaseⅠ消化前、后阳性率随洗涤次数增加而显着增加(P<0.05),而离心3次以上的转染效率略有下降;以mDM为共孵育缓冲体系可获得较高的转染效率;活力为0.55的精子转基因阳性率显着低于活力为0.9的精子(消化前、后阳性率分别为35.4±2.9%和21.8±5.3%vs 63.5±7.2%和50.3±2.8%,P<0.05);共孵育体系中异种动物精浆可显着降低转染效率(P<0.01),甚至与肝素可置换出已结合和内化转运到精子内的外源DNA,而共孵育体系中的BSA可抑制精子内化外源DNA。山羊共孵育法转染外源基因最适转染条件为mDM缓冲液洗涤3次后上浮收集高活力精子进行转染。(本文来源于《生物技术通报》期刊2009年S1期）
孙新明,蒋芬,刘页玲[6]（2009）在《精子介导法生产转基因动物研究进展》一文中研究指出精子介导基因转移是利用动物精子具有自发结合和内化转运外源DNA能力的特点,并使其在受精时导入卵母细胞,获得转基因动物。该方法具有操作简单、高效和适用等特点,但影响精子转染外源基因效率的因素很多,其中包括外源DNA、精子及转染方法等。(本文来源于《井冈山学院学报》期刊2009年01期）
李小平,曾博,邹方东,岳碧松,尹海林[7]（2008）在《精子介导法建立sFat-1转基因小鼠模型》一文中研究指出利用精子介导的基因转移(Sperm-mediated gene transfer,SMGT)方法,将sFat-1 DNA片段直接和小鼠精子孵育,再通过体外受精、胚胎移植等技术建立sFat-1转基因小鼠模型。经PCR检测,16只后代中发现2只阳性个体,Southern blot进一步鉴定的结果显示有2只后代整合了sFat-1基因,成功建立sFat-1转基因小鼠模型,转基因率为12.5%。本研究运用精子介导的转基因方法将sFat-1基因整合到小鼠基因组中,为进一步研究sFat-1的生物学功能提供了实验动物模型。(本文来源于《四川动物》期刊2008年06期）
李小平,曾博,刘艳,邹方东,岳碧松[8]（2008）在《精子介导法建立sFat-1转基因小鼠模型》一文中研究指出利用精子介导的基因转移(Sperm-mediated gene transfer,SMGT)方法,将sFat-1 DNA片段直接和小鼠精子孵育,再通过体外受精、胚胎移植等技术建立sFat-1转基因小鼠模型。经PCR检测,16只后代中发现2只阳性个体,斑点杂交进一步鉴定的结果显示有2只后代整合了sFat-1基因,成功建立sFat-1转基因小鼠模型,转基因率为12.5%。本研究运用精子介导的转基因方法将sFat-1基因整合到小鼠基因组中,为进一步研究sFat-1的生物学功能提供了动物模型。(本文来源于《亚洲实验动物学会联合会（AFLAS）第叁次会议暨中国实验动物学会（CALAS）第八届学术年会论文集》期刊2008-09-27）
精子介导法论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
研究外源DNA转染对牦牛精子体外受精(IVF)、早期胚胎发育以及绿色荧光蛋白(GFP)基因在早期胚胎表达的影响。用构建融合人乳铁蛋白基因绿色荧光蛋白表达载体(pAcGFP1-hLF)转染的牦牛精子IVF黄牛卵母细胞,生产的胚胎在荧光显微镜下观察GFP表达情况。结果显示,用环形质粒、线性质粒pAcGFP1-hLF转染的精子及未转染精子IVF后的卵裂率分别为56.4%、54.8%和61.0%,线性转染的囊胚率显着低于环形转染(17.7%与35.7%)。环形质粒转染的精子用DNaseⅠ消化、不消化及未转染的精子IVF后卵裂率分别为44.8%、55.2%和56.3%,囊胚率分别为33.3%、33.3%和30.2%。未经DNaseⅠ消化洗涤的环形质粒组GFP胚胎阳性率显着高于线性质粒组(99.3%与76.6%);DNaseⅠ消化组GFP胚胎阳性率极显着低于不消化组(25.4%与99.3%)。结果表明,用环形质粒DNA转染牦牛精子不会影响其受精及早期胚胎发育能力,但DNaseⅠ消化洗涤显着降低GFP胚胎阳性率。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
精子介导法论文参考文献
[1].赵丽玲.慢病毒载体精子介导法生产转基因鸡研究[D].山西农业大学.2013
[2].字向东,梁冠男,陈绍威.精子介导法生产转基因牦牛杂种胚胎的研究[J].生物技术通报.2010
[3].郭战军,马毅,李叁华,韩瑞发,李胜芝.利用精子介导法建立hHT/hDAF双基因转移小鼠模型[J].华北农学报.2010
[4].郭战军.以纳米材料作载体改进精子介导法建立异种移植供体模型的研究[D].天津医科大学.2010
[5].孙新明,邱效武,江嘉陵,魏泓.山羊精子介导法转染外源基因影响因素及最适条件的研究[J].生物技术通报.2009
[6].孙新明,蒋芬,刘页玲.精子介导法生产转基因动物研究进展[J].井冈山学院学报.2009
[7].李小平,曾博,邹方东,岳碧松,尹海林.精子介导法建立sFat-1转基因小鼠模型[J].四川动物.2008
[8].李小平,曾博,刘艳,邹方东,岳碧松.精子介导法建立sFat-1转基因小鼠模型[C].亚洲实验动物学会联合会（AFLAS）第叁次会议暨中国实验动物学会（CALAS）第八届学术年会论文集.2008
论文知识图
