论文摘要
目的探讨瞬时转染miR-155mimics和miR-155 inihibitor化学合成物在足细胞中表达变化及其稳定情况。方法体外培养小鼠肾小球足细胞,用脂质体法将miR-155mimics/NC、miR-155 inihibitor/NC、Cy3 miR-155 mimics/inhibitor NC转染足细胞,构建足细胞内miR-155高表达模型、低表达模型、荧光基团。然后用免疫荧光显微镜观察不同剂量LipofectamineTM 2000转染不同浓度Cy3 miR-155 NC后的荧光转染效果。用实时荧光定量PCR技术检测足细胞中miR-155mimics浓度梯度（50、80、100 nmol/mL）、miR-155 inihibitor浓度梯度（80、100、150 nmol/mL）的miRNA-155表达。结果达到一定剂量的LipofectamineTM 2000足以饱和不同浓度的miRNA,并将不同浓度Cy3 miR-155 NC成功转入足细胞内,且转染效率达80%以上。qRT-PCR结果显示转染miR-155mimics、miR-155 inihibitor 24 h后,miR-155在足细胞中的表达明显改变,与阴性对照组（NC）比较差异有统计学意义,表明转染成功。转染80 nmol/mL浓度的miR-155mimics,miR-155在足细胞中的表达明显上调（P<0.001）,与其他浓度对比表达量升高,差异有统计学意义。转染150 nmol/mL浓度的miR-155 inihibitor,miR-155在足细胞中的表达明显下调（P<0.001）,与其他浓度对比表达量降低,差异有统计学意义。结论 LipofectamineTM 2000达到适当剂量时将各工作浓度的miRNA-155转入足细胞内的转染效果高。80 nmol/mL的miR-155mimics和150 nmol/mL的miR-155 inhibitor可能较适合用于实验研究。
论文目录
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 凌霄雁,林栩,郑心彤,古贤君,梁钊,覃卿,杜秀日
关键词: 足细胞
来源: 右江医学 2019年12期
年度: 2019
分类: 医药卫生科技,基础科学
专业: 生物学,泌尿科学
单位: 右江民族医学院附属医院肾内科,右江民族医学院研究生学院
基金: 国家自然科学基金(81860131),广西自然科学基金(2017 GXNSFAA198288),百色市科学研究与技术开发计划项目(百科20160608)
分类号: R692;Q25
页码: 886-891
总页数: 6
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