日本七鳃鳗毒素肽rLj-RGD3突变体rLj-115基因的克隆与表达

论文摘要

rLj-RGD3是一种含有3个RGD模体的七鳃鳗毒素蛋白,具有抗血栓和抗肿瘤功能。为研究3个RGD模体与其蛋白功能的关系,rLj-RGD3系列突变体的获得成为关键。rLj-115是第Ⅰ及第Ⅱ位RGD缺失、第Ⅲ位RGD保留的突变体,本研究针对其进行了基因克隆、蛋白表达及纯化。由于rLj-RGD3基因具有大量重复序列,突变体基因无法通过定点突变方法获得,故对该突变体基因进行人工合成及PCR扩增、NdeⅠ和HindⅢ双酶切,并构建于pET23b质粒。DNA测序结果显示,该重组质粒所构建序列正确。进一步对阳性重组子进行转化、诱导表达和亲和层析纯化,得到了纯化的rLj-115蛋白。rLj-115作用于人脐静脉内皮细胞ECV304的MTT试验结果表明,该合成基因表达的蛋白具有活性,可以用于后续研究。

论文目录

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

1.1.1 试验材料

1.1.2 试剂

1.1.3 仪器

1.2 试验方法

1.2.1 突变基因全序列合成

1.2.2 阳性重组质粒构建与鉴定

1.2.2.1 阳性重组质粒构建

1.2.2.2 阳性重组质粒鉴定

1.2.3 重组蛋白rLj-115的诱导表达与纯化

1.2.3.1 重组蛋白rLj-115的诱导表达

1.2.3.2 重组蛋白rLj-115的纯化

1.2.4 对ECV304增殖抑制作用的测定

2 结果

2.1 Lj-115突变方案及基因全序列合成

2.2 阳性重组质粒鉴定

2.3 阳性重组质粒测序鉴定

2.4 重组蛋白rLj-115的诱导表达和纯化

2.5 rLj-115对ECV304细胞增殖的抑制作用

3 讨论

3.1 rLj-RGD突变体设计

3.2 突变体基因的人工合成

3.3 突变体rLj-115的电泳迁移率及活性

4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李姿其,衣龙达,米梓萌,于卓,周沫含,王继红,肖蓉

关键词: 日本七鳃鳗,毒素肽,基因克隆,诱导表达,重组蛋白

来源: 水产科学 2019年06期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 辽宁师范大学生命科学学院

基金: 国家“863”项目(2014AA093502),大连市科技攻关项目(2014E12SF067),辽宁师范大学大学生创新创业训练计划项目(cx201802055)

分类号: Q78

DOI: 10.16378/j.cnki.1003-1111.2019.06.019

页码: 868-873

总页数: 6

文件大小: 2612K

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日本七鳃鳗毒素肽rLj-RGD3突变体rLj-115基因的克隆与表达

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