东北林蛙和黑龙江林蛙肠道菌群比较及免疫功能初步分析

论文摘要

两栖蛙类是一种重要的生态环境指示类群,林蛙是其中重要品种,然而由于环境及人为因素的影响导致林蛙野生资源的锐减。肠道是机体最大的储菌库和免疫器官。在宿主生长和发育过程中,许多生理和免疫功能在肠道菌群的辅助下得到完善。研究证实,动物体内存在的正常菌群能够刺激机体健全免疫系统,来维护自身免疫力。当肠道细菌缺乏时,它会导致肠道免疫系统发育不良。由于水陆两栖的独特生活史及皮肤的高渗透性,两栖动物比其他类群对环境变化更加敏感。因此,一些科学家推测环境对其具有重大影响。那么不同的林蛙宿主与微生物群落及环境三者之间的相互关系如何呢?本研究应用Illumina高通量高通量测序技术检测了伊春地区东北林蛙、伊春地区黑龙江林蛙和哈尔滨地区黑龙江林蛙的肠道菌群结构特征,并对肠道组织切片中T细胞进行了显微观察,同时检测了肠道溶菌酶活性。以此来比较不同种林蛙以及同种不同地理种群林蛙肠道菌群的结构特征及肠道免疫功能差异,以期为林蛙物种保护及养殖提供基础数据。测序结果显示,哈尔滨与伊春黑龙江林蛙以及伊春东北林蛙与黑龙江林蛙肠道微生物群落结构相似性均较高,而来自不同生境的不同物种伊春东北林蛙与哈尔滨黑龙江林蛙微生物群落格局存在显著差异;东北林蛙比黑龙江林蛙具有更高的菌群多样性,而预测到的微生物基因功能丰度黑龙江林蛙普遍高于东北林蛙;尽管在林蛙体内普遍具有重要功能的优势菌群是一致的,但在不同分类水平上绝大多数优势菌在各样品中所占的具体比例存在显著差异;ANAE染色和溶菌酶检测结果显示,T细胞数量及溶菌酶含量,伊春地区东北林蛙<伊春地区黑龙江林蛙<哈尔滨地区黑龙江林蛙。综上所述,两栖蛙类肠道菌群结构的差异应归因于物种本身及环境因素共同作用的结果,且推测黑龙江林蛙比东北林蛙分布更广,种群数量相对较多,可能与黑龙江林蛙具有更高的抗菌能力和微生物基因功能更活跃有关。

论文目录

摘要

Abstract

1 绪论

1.1 两栖动物介绍

1.1.1 两栖动物现状

1.1.2 东北林蛙

1.1.3 黑龙江林蛙

1.2 两栖动物免疫系统介绍

1.2.1 肠道菌群

1.2.2 淋巴细胞

1.2.3 溶菌酶

1.3 实验的目的和意义

2 肠道菌群比较研究

2.1 材料

2.1.1 样品采集

2.1.2 主要仪器

2.1.3 主要试剂

2.2 方法

2.2.1 提取DNA

2.2.2 高通量测序

2.3 结果与分析

2.3.1 测序有效数据

2.3.2 OTU分析

2.3.3 样本复杂度分析（Alpha Diversity）

2.3.4 多样品比较分析（Beta Diversity）

2.3.5 物种差异分析

2.3.6 样品间菌群结构差异显著性分析

2.3.7 肠道菌群代谢功能预测

2.4 讨论

2.5 本章小结

3 肠道功能比较研究

3.1 材料

3.1.1 实验动物

3.1.2 主要仪器

3.1.3 主要试剂及药品配制

3.2 方法

3.2.1 ANAE染色法

3.2.2 溶菌酶检测

3.3 结果与分析

3.3.1 ANAE染色结果

3.3.2 溶菌酶检测结果

3.4 讨论

3.5 本章小结

结论

参考文献

攻读学位期间发表的学术论文

致谢

东北林业大学硕士学位论文修改情况确认表

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 黄皓

导师: 郝丽

关键词: 肠道菌群,东北林蛙,黑龙江林蛙,高通量测序,肠道免疫功能

来源: 东北林业大学

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学,生物学

单位: 东北林业大学

分类号: Q95;Q93

DOI: 10.27009/d.cnki.gdblu.2019.000130

总页数: 50

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东北林蛙和黑龙江林蛙肠道菌群比较及免疫功能初步分析

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