导读:本文包含了分子克隆论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:球蛋白,基因,日本,因子,毒蛾,贻贝,分子。
分子克隆论文文献综述
刘婧妮,宋建英,王软林,梁爱华[1]（2019）在《八肋游仆虫组织蛋白酶B基因家族的分子克隆及序列分析》一文中研究指出组织蛋白酶B (cathepsin B, CTSB)是一种主要存在于溶酶体中的半胱氨酸蛋白水解酶,广泛存在于各种生物中。为了研究八肋游仆虫组织蛋白酶B (Euplotes octocarinatus Cathepsin B, EoCTSB)基因的序列、结构和功能,本研究利用生物信息学方法,对八肋游仆虫组织蛋白酶B基因进行了系统分析。利用相似性搜索及系统进化分析,共鉴定得到6个EoCTSBs基因。转录组数据及3′RACE分析结果表明这6个基因均具有转录活性。通过与其他真核生物的组织蛋白酶B比较,结果显示,6种EoCTSBs均含有保守的肽链内切酶催化活性位点,但都缺失封闭环结构,因此推测它们都没有外肽酶活性;仅EoCTSB-6的S2亚位为酸性氨基酸残基,暗示其具有催化特异性底物Z-Arg-Arg-AMC水解的活性。本研究为后续深入探讨EoCTSB的生物学功能提供理论依据。(本文来源于《基因组学与应用生物学》期刊2019年08期）
孙佩文,唐小琳,吕菲菲,徐艳红,魏建和[2]（2019）在《白木香转录因子AsWRKY62的分子克隆、原核表达及特性分析》一文中研究指出目的对白木香AquilariasinensisAsWRKY62转录因子进行分子克隆、原核表达,并对其进行生物信息学分析和表达特性分析,为深入研究AsWRKY62在白木香生长发育、沉香形成等方面的功能奠定基础。方法以白木香愈伤组织总RNA反转录的cDNA为模板,采用RT-PCR及PCR技术克隆基因编码序列(CDS)全长;构建pET-21a-AsWRKY62原核表达载体,转化大肠杆菌BL21 (DE3)感受态进行原核诱导表达;并通过生物信息学软件预测蛋白的理化性质、结构域和亚细胞定位等特性;用软件DNAMAN和MEGA5分别进行氨基酸多序列比对和进化关系分析,通过组织特异性表达分析不同组织中的基因表达模式。结果 AsWRKY62(GenBank注册号MH925301)基因CDS全长为1 581bp,编码一条由526个氨基酸组成的多肽,结构域分析表明其属于WRKY group I类蛋白;密码子优化后的pET-21a-AsWRKY62在大肠杆菌BL21(DE3)中成功诱导的较适条件为0.5mmol/LIPTG37℃连续培养4h;As WRKY62基因具有组织特异性,其在根、茎中表达量最高,其次是沉香层和花中。结论本研究首次在白木香中克隆AsWRKY62,并进行原核表达和生物特性分析,表明其可能与沉香的形成有关,也为进一步研究其生物学功能提供了理论依据。(本文来源于《中草药》期刊2019年11期）
邹睿[3]（2019）在《贝类副肌球蛋白的分离纯化、性质研究与分子克隆》一文中研究指出贝类是重要的水产动物资源,其以鲜美的口感及较高的营养价值获得众多消费者的青睐,同时也受到诸多科研工作者的关注。副肌球蛋白(paramyosin,PM)是无脊椎动物中所特有的一种结构蛋白,在贝类肌肉蛋白中的含量可达20~40%,它对肌肉的质构有着重要作用。同时,PM也是一种主要过敏原,但国内外对贝类副肌球蛋白的相关研究还比较少。本研究拟从叁种贝类(皱纹盘鲍Haliotis discus hannai、葡萄牙牡蛎Crassostrea angulata、翡翠贻贝Perna viridis)中分离纯化得到天然副肌球蛋白,并对该蛋白的基本理化性质进行探究。通过水洗-盐溶的方式从皱纹盘鲍肌肉中得到肌原纤维蛋白,利用硫酸铵盐析及羟基磷灰石柱层析进一步纯化得到PM,SDS-PAGE结果显示其分子量约为97 kDa。利用相同的纯化方式分别从葡萄牙牡蛎、翡翠贻贝肌肉中分离得到PM。SDS-PAGE结果显示,葡萄牙牡蛎PM的分子量约为97 kDa。质谱分析结果显示,胰蛋白酶酶切得到36个肽段序列,共437个氨基酸残基,与太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)PM序列一致性达到100%。对翡翠贻贝PM的SDS-PAGE分析结果显示,该蛋白分子量约为100 kDa。质谱分析结果显示,胰蛋白酶酶切得到26条肽段,共330个氨基酸残基,与地中海贻贝(Mytilus galloprovincialis)PM的序列一致性达100%。将纯化的皱纹盘鲍PM免疫新西兰大白兔,获得兔抗皱纹盘鲍PM多克隆抗体。免疫印迹结果显示,该抗体具有较好的特异性,且能与葡萄牙牡蛎及翡翠贻贝PM发生交叉反应。利用SDS-PAGE及圆二色谱探究热处理对PM的影响,结果显示,叁种贝类的PM均表现良好的耐热性。皱纹盘鲍PM的热变性温度为52.5±0.2℃,蛋白经过80℃加热再回温至20℃后,其变化的二级结构可还原;葡萄牙牡蛎PM热变性温度为51.7±0.2℃,经80℃加热再回温至20℃后,其变化的二级结构约20%无法还原,热稳定性为叁者中最低;翡翠贻贝PM热变性温度为56.3±0.2℃,经90℃加热再回温至20℃后,其变化的二级结构可还原,热稳定性为叁者中最高。pH稳定性结果显示,叁种贝类PM在pH 6~11范围内较稳定,但当pH≤5时明显不稳定,出现沉淀聚集现象。PM的表面疏水性测定结果显示,葡萄牙牡蛎PM表面疏水度明显低于另外两个物种,100℃加热处理10 min后,叁者的表面疏水度均显着性增加。利用体外模拟胃肠液消化实验来探究叁种贝类肌肉蛋白及纯化PM的消化特性,结果显示,肌肉全蛋白经过胃蛋白酶、胰蛋白酶及胰凝乳蛋白酶的连续消化后,剩余未被完全消化的片段几乎都能与兔抗皱纹盘鲍PM多克隆抗体反应。叁种PM在相同条件的消化体系中,表现出不同的消化模式,但均显示较好的耐消化性,经过热处理后,PM的耐消化性相对减弱。利用RT-PCR和RACE技术从皱纹盘鲍肌肉中克隆得到PM的cDNA。测序结果表明,该基因全长共3786 bp,其中,开放阅读框共2583 bp,编码860个氨基酸残基,GenBank登录号为ASU87569.1。预测皱纹盘鲍PM分子量为99.6 kDa,等电点为5.03。将皱纹盘鲍PM氨基酸序列与其他物种PM序列进行比对,发现其与地中海贻贝及太平洋牡蛎PM的一致性分别达到72%和69%,表明在软体动物中PM是一种保守性较高的蛋白。PM在贝类肌肉中是一种重要的结构蛋白,本文对叁种贝类PM进行了分离纯化及部分理化性质的探究,并在氨基酸水平上对皱纹盘鲍PM克隆序列进行了分析,以期为PM的后续研究提供理论参考。(本文来源于《集美大学》期刊2019-05-08）
张振威[4]（2019）在《舞毒蛾保幼激素降解酶基因的分子克隆及功能初探》一文中研究指出舞毒蛾(Lymantria dispar Linnaeus)属于鳞翅目裳蛾科,广泛分布于世界各地,危害杨树、柳树、桑树、落叶松等多种植物,是一种危害严重的农林食叶害虫。目前,舞毒蛾的国内防治现阶段依赖于化学杀虫剂,长期施药可导致害虫抗药性形成、高污染、药物高残留等问题。因此,寻找新型防治模式已经成为一个亟待解决的问题。随着分子生物学的迅猛发展,寻找控制害虫生长发育的分子作用靶标并加以利用可以作为一种新的防治策略。其中较为理想的靶标基因是参与昆虫生长发育的关键调控基因,通过改变该基因的转录水平来调节靶标基因对应的物质活性,进而影响害虫的生理机制最终导致其死亡。昆虫体内保幼激素(JH)对昆虫的生长发育具有重要的调控作用,而jheh为JH代谢途径中的代谢基因,探索jheh基因功能和与相关基因的关系对明确昆虫生理与寻找杀虫作用靶标具有重要意义。因此本研究基于舞毒蛾转录组数据库,从舞毒蛾体内克隆获得叁条JH降解酶基因jhe、jheh与jhdk,并对其进行了相关的注释。使用qPCR检测了jhe、jheh与jhdk在舞毒蛾不同发育阶段的时间表达模式,并使用ELISA法检测了舞毒蛾在不同发育阶段中JHⅢ滴度的变化;最后通过注射法对舞毒蛾六龄幼虫进行jheh基因的RNAi实验,并验证其对jhe、jhdk及JH信号通路基因Kr-h1基因的影响,并再次检测JHⅢ滴度并记录昆虫化蛹及后续的生理变化。主要研究结果如下:1.舞毒蛾JH降解酶基因的克隆与分析基于舞毒蛾转录组数据库,运用RT-PCR技术克隆获得JH代谢途径中叁个降解酶基因jhe、jheh与jhdk的ORF,推导出其编码的氨基酸序列,进而使用ClustalW2、ProtParam、ProtScale以及TMHMM等生信软件分析了叁个JH降解酶基因的蛋白质保守序列、核心结构域、跨膜结构等潜在生理功能。2.JH降解酶基因与JHⅢ在不同发育阶段的表达模式结果表明,jhe在舞毒蛾叁龄至五龄幼虫中表达量呈先下调后上调的趋势,在每龄幼虫的初期与末期表达量都较高,这与JHⅢ滴度的变化趋势相一致,但时间上JHⅢ的表达呈现明显的滞后性,说明在舞毒蛾幼虫中心对JHⅢ具有一定的调控作用。jhdk与jheh基因在每龄期中均呈现先上调后下调的表达趋势,而JHⅢ滴度在叁龄至五龄幼虫中先降后升,二者的变化趋势相反,暗示JH信号对jheh与jdk的表达产生负向调控。蛹期JHⅢ滴度水平较低,与jheh与jhdk低表达保持一致。成虫期JHⅢ滴度较低可能与jhe高表达有关。3.jheh基因沉默对舞毒蛾六龄幼虫发育的影响结果表明:RNAi介导的jheh基因沉默显着降低了jheh基因在转录水平上的表达量,导致了jhe基因在24h时出现上调,jhdk基因在36h时出现显着下调,JH含量指示基因Kr-h1表现为转录水平上的上调,JH滴度增加。由于jheh对舞毒蛾保幼激素降解具有重要作用,而jheh的基因沉默后舞毒蛾幼虫体内JH含量的增加,推测本实验中jhe在jh沉默后的高表达可能时为了降解体内高滴度的JHⅢ,而jhdk的降低则可能是由于jheh沉默导致其降解底物JHd的缺失。后续发现幼虫蛹期延长1.09 d,而死亡率与化蛹率并无明显变化,说明jheh基因沉默可影响JH的代谢从而影响舞毒蛾的发育历程。(本文来源于《东北林业大学》期刊2019-04-01）
杨莉,樊小莉,刘琴,王芳,刘静[5]（2019）在《滇重楼甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶基因的分子克隆与分析》一文中研究指出目的皂苷是滇重楼的主要药效成分,获取滇重楼皂苷合成途径中关键基因(MVD)的cDNA全长序列,并对该序列进行生物信息学及表达量分析。方法通过同源克隆法得到滇重楼MVD cDNA的保守片段,利用RACE技术获得MVD c DNA全长序列,命名为PpMVD,并进行生物信息学分析,通过实时荧光定量(RT-PCR)法检测PpMVD在滇重楼不同组织中的表达情况。结果 PpMVD基因cDNA全长1 583 bp,开放阅读框(ORF)长1 269 bp,编码422个氨基酸,该蛋白质的相对分子质量为46 820,等电点为5.69,不稳定指数为45.40;滇重楼Pp MVD蛋白质二级结构中含有159个α-螺旋,占37.68%;19个β折叠,占4.50%;69个延伸链,占16.35%;175个无规卷曲,占41.47%;该蛋白没有跨膜螺旋区,且不存在信号肽,其全部氨基酸都位于细胞膜表面;该基因包含MVD1-Superfamily家族的保守结构域,属于GHMP激酶蛋白家族成员;RT-PCR结果显示,滇重楼PpMVD基因在种子、叶片、茎和块茎中均有表达,但表达量呈显着差异(P>0.05),由高到低依次为块茎>叶片>种子>茎,其中主要药用组织块茎中表达量最高,为最低表达量(茎)的3.3倍。结论首次克隆了滇重楼Pp MVD cDNA全长序列,并检测了该基因在滇重楼各组织中的表达量,为进一步研究Pp MVD基因在提高皂苷生物合成过程中的影响提供了基础,并对重楼药用资源的可持续利用提供了支持。(本文来源于《中草药》期刊2019年06期）
高高[6]（2019）在《家兔MHC Ⅱ DQ基因的分子克隆及其表达分析》一文中研究指出主要组织相容性复合物(MHC)是一种高度多态性的基因组,编码脊椎动物中发现的免疫球蛋白样受体,其表达产物分布在各种细胞的表面。它被称为MHC分子,在人体免疫系统中起着非常重要的抗原呈递作用。它不仅与移植排斥有关,而且与动物的某些经济特征密切相关。MHC抗原参与机体的免疫反应,在机体的免疫反应调节,抗原识别和呈递中发挥重要作用。同时,MHC的遗传背景和不同个体之间的多样性水平的差异可导致个体对疾病的抗性和易感性的差异。因此,MHC作为抗病性和易感性的候选基因已成为遗传育种研究的热点,并且它也越来越受到生态学家群体遗传学家和动物遗传学育种者的关注。本研究以家兔为实验材料,为更加完整的了解MHCⅡDQ基因的结构和功能,采用RACE技术,获得了家兔MHCⅡDQ基因的完整cDNA序列,并进行了克隆测序,采用生物信息学技术,分析并预测了基因的结构和功能。主要研究结果如下:1.使用RACE技术克隆获得了家兔MHCⅡDQ基因的完整cDNA序列,采用生物信息学技术,分析和预测基因的结构和功能。MHCⅡDQ基因cDNA全长1148bp(GenBank登录号:XM_002714510.3),5'UTR21bp,3'UTR318bp。其中CDS区为768bp,编码255个氨基酸。分析预测MHCⅡDQ蛋白分子量为28.094kDa,理论等电点:pI=5.23,二级结构大部分为α螺旋和β折叠,有明显的跨膜区,属于分泌蛋白,基因编码的氨基酸序列中存在2个N-连接糖基化,不存在O-连接糖基化位点。成熟蛋白质不稳定指数(instability index(II))为45.89,是一种不稳定蛋白质;共含有28个负性氨基酸残基(Asp+Glu),20个带正电荷的氨基酸残基(Arg+Lys),其总平均疏水指数(Grand average of hydropathicity)为0.076,属于疏水蛋白。在与其它动物序列比对中,核苷酸序列与氨基酸序列与牛、马同源性最高。2.在mRNA水平上,MHCⅡDQ是一个广谱表达基因,它广泛存在于肝脏和脾脏中,在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、大脑、回肠中均可检测到,且在脾脏和大脑之间存在明显的组织差异表达(P<0.05)。在脾脏、肝脏表达较高,在大脑中表达最低。MHCⅡDQ基因mRNA的表达量:脾脏>肝脏>肺脏>回肠>心脏>肾脏>胃>大脑,说明免疫器官存在MHCⅡDQ基因的高表达。(本文来源于《山东农业大学》期刊2019-03-27）
赵硕[7]（2019）在《日本沼虾衔接蛋白Syntenin和ADP核糖基化因子2基因的分子克隆及其表达分析》一文中研究指出日本沼虾(Macrobrachium nipponinse)是我国淡水养殖中重要的经济虾类之一。随着集约化的养殖,环境胁迫成为日本沼虾养殖过程中的关键问题,而氨氮是水产养殖中最重要的环境胁迫因子之一,能够严重影响水产动物生长发育与生理健康。因此研究日本沼虾抗氨氮胁迫的分子机制尤为重要。衔接蛋白Syntenin(MnSyn)是普遍存在于真核生物及原核生物中的胞内衔接蛋白(adaptor proteins),在细胞免疫和信号转导等细胞活动中发挥重要作用。ADP核糖基化因子2(MnArf2)是Ras基因超家族中的成员,能够调节磷脂酶D的活性,在物质运输和信号转导过程中发挥重要作用。本试验以日本沼虾为实验材料,采用RACE克隆、实时荧光定量PCR、Western blot和酶活测定等技术,对MnSyn、MnArf2基因进行了克隆鉴定和基因表达与功能检测,同时对高浓度氨氮胁迫下日本沼虾抗氧化酶的相关变化进行了测定。主要研究结果如下:首先在实验室条件下,通过对日本沼虾进行氨氮胁迫试验得到其半数致死浓度LD50(48h)为96.8mg/L。酶活性测定显示,氨氮胁迫初期日本沼虾肝胰腺、鳃和肌肉组织的总抗氧化能力(T-AOC)和超氧化物歧化酶(SOD)均出现显着的上升趋势。在胁迫后期T-AOC和SOD出现明显的下调,说明机体的抗氧化酶活性受到明显的抑制。丙二醛(MDA)的含量在胁迫初期无明显变化,胁迫24h后MDA的水平显着高于对照组,且出现逐渐上升的趋势,表明日本沼虾的组织细胞受损程度逐渐严重。通过分子克隆和RACE技术,获得了长度为2432bp的日本沼虾MnSyn基因cDNA全序列。其中包含62bp的5′UTR、1475bp的3′UTR和957bp的CDS区,其中开放阅读框编码为318个氨基酸组成的蛋白质,预测该蛋白分子量为34.26KDa。该基因编码的蛋白质有两个串联存在的PDZ结构域。同源性比较分析发现MnSyn与凡纳滨对虾、斑节对虾和日本囊对虾Syntenin基因的相似性均较高,分别依次是78%、77%和75%,在进化过程中比较保守。日本沼虾MnArf2基因全长为949bp,包含264bp的5′UTR、148bp的3′UTR以及537bp的CDS区,其中537bp开放阅读框编码为178个氨基酸组成的蛋白质,预测该蛋白分子量为19.98KDa。序列比对分析发现,MnArf2与日本对虾Arf相似性70%,与凡纳滨对虾Arf-like相似性69%。MnArf2含有典型的Switch、Interswitch区和Ploop区。Switch、Interswitch区参与调节Arf分子在GDP/GTP间相互转化,这些结构均能够反映出MnArf2在进化上是高度保守的。荧光定量检测结果显示,在氨氮胁迫后的8个时间点(0h,3h,6h,12h,24h,48h,72h,96h),日本沼虾MnSyn基因和MnArf2基因在各组织的表达量均发生了明显的变化。氨氮胁迫6h后MnSyn基因的表达量开始上升,在24h处表达量达到峰值,之后开始下降,72h后仍与对照组有显着差异。MnArf2在氨氮胁迫后6h表达量显着上调,胁迫12h处达到峰值,之后开始下调,72h后逐渐恢复到初始水平。Western Blot结果表明,MnSyn蛋白在日本沼虾的肝胰腺、鳃、肌肉、心、胃和眼柄中均有表达。且在肝胰腺和鳃组织中的表达量最高,眼柄和胃组织中的表达量较低,差异显着(P<0.05)。综合分析试验结果,氨氮胁迫后日本沼虾MnSyn和MnArf2基因均出现显着的上调表达,在肝胰腺、鳃以及心组织中表达量较高,表明MnSyn和MnArf2基因与日本沼虾受氨氮胁迫产生的免疫应答反应有关。本研究为进一步揭示日本沼虾抗氨氮胁迫的分子机制奠定了重要基础,同时也为日本沼虾的健康养殖提供了科学依据。(本文来源于《山东农业大学》期刊2019-03-27）
罗欢[8]（2019）在《日本沼虾α2-巨球蛋白和低密度脂蛋白相关受体-1基因的分子克隆及其功能分析》一文中研究指出氨氮是水产养殖中最重要的环境胁迫因子之一,能够严重影响水产动物生长发育与生理健康。α2-巨球蛋白(α2-macroglobulin,A2M)是一种广谱性蛋白酶抑制剂,在凝血补体系统、酚氧化酶原激活系统、细胞迁移、抗环境胁迫等方面都发挥着关键调控作用。低密度脂蛋白相关受体-1基因(Low-density lipoprotein receptor-related protein,LRP1)是低密度脂蛋白受体基因家族的一员,在诱导脂蛋白的摄取、血管损伤、细胞生长等方面具有重要作用,同时可以作为活化的α2-巨球蛋白、组织纤溶酶原激活剂等多种配体的细胞信号受体。本研究以我国重要的淡水养殖虾类日本沼虾(Macrobrachium nipponense)为实验材料,采用组织切片、RACE克隆、实时荧光定量PCR、Western blot等技术,对高浓度氨氮胁迫下虾的免疫组织变化和A2M、LRP1基因进行了分子克隆和基因表达与功能检测等。主要研究结果如下:在实验室条件下,对日本沼虾进行氨氮攻毒试验显示其半致死浓度LD_(50)(48h)为96.8mg/L。组织学分析显示,氨氮胁迫对日本沼虾的肝胰腺与鳃组织都产生很大程度的组织损伤,且随着攻毒时间的延长,组织损伤程度越高。在氨氮胁迫的0-96h,日本沼虾的肝小叶从结构完整、排列紧密,逐渐变为伴有出血排列疏松、液泡增大、边缘变薄、胆管萎缩,甚至出现核溶解等明显的组织结构变化现象。在氨氮胁迫的0-96h,健康状态下均匀的鳃丝变的逐渐膨大,鳃丝水肿,间隙增大,核边缘化,形态模糊,甚至出现鳃片坏死、脱落,看不清细胞结构等严重的鳃组织损伤现象。说明氨氮胁迫会通过损伤沼虾的鳃和肝胰腺组织而引起机体伤亡。通过分子克隆和RACE技术,获得了4805bp长度的日本沼虾A2M基因cDNA全序列,包括4422bp的CDS区、99bp的5’UTR和284bp的3’UTR,其中4422bp的开放阅读框编码由1473个氨基酸残基组成的蛋白质,预测该蛋白分子量为163.45KD,理论等电点(PI)为5.0,该基因编码的蛋白质包含4个结构域:跨膜域、A2M_N_2结构域、C端结构域和受体结合域。序列比对分析表明,日本沼虾的序列与罗氏沼虾和脊尾白虾的序列相似性达分别高达92%和80%。日本沼虾LRP1基因cDNA全长4121bp,包括2739bp的CDS区,318bp的5’UTR和1064bp的3’UTR,其中2739bp的开放阅读框编码由912个氨基酸残基组成的蛋白质,预测该蛋白分子量为101.71KD,理论等电点(PI)为4.61,该基因编码的蛋白质包含5个结构域:跨膜域、LDLa结构域、LY结构域、表皮生长因子结构域(EGF)和EGF-钙结合域(EGF_CA)。序列比对分析表明,日本沼虾的LRP1基因序列与日本囊对虾和凡纳滨对虾(预测)的序列相似性分别达到达到77%和71%。在氨氮胁迫后的8个时间点(0h,3h,6h,12h,24h,48h,72h,96h),日本沼虾A2M基因和LRP1基因在各组织的表达量均发生了明显的变化。荧光定量PCR检测结果显示:氨氮胁迫后3h的A2M基因表达量开始上升,且随着胁迫的延续,表达水平不断升高,24h后基因表达量开始下降,直到96h基因表达量恢复到初始水平,A2M基因在12-48h保持较高水平。而LRP1基因有小幅度上调,在氨氮胁迫后6h开始上升,12h达到最高,24h开始下降到72h基本恢复初始水平,LRP1基因表达量在6-12h有较高水平。Western blot结果显示:A2M基因在检测的6个组织中均有不同程度的表达,其中在肝胰腺和鳃中的表达量最高;其次是肌肉和心脏,胃和眼柄组织中的表达量最低。总体来说,氨氮胁迫后,日本沼虾A2M基因显着上调,在肝胰腺和鳃组织中表达量最高。LRP1基因上调表达,在肝胰腺和肌肉组织中表达量最高。提示A2M基因和LRP1基因作为重要的免疫及炎症反应因子,在日本沼虾抵抗氨氮胁迫方面具有重要作用。(本文来源于《山东农业大学》期刊2019-03-27）
许洋,雷晨,佘露露,王瑾瑜,杨佳慧[9]（2019）在《沙冬青脱水素基因的分子克隆与序列分析》一文中研究指出脱水素(Dehydrin)是晚期胚胎发生蛋白(LEA)家族中最具特色的一组蛋白,对植物抵抗非生物逆境胁迫起到非常重要的作用。本研究从抗逆性较强的常绿阔叶灌木沙冬青中克隆出4个含有完整ORF的脱水素基因,命名为AmDHN3.2F、AmDHN5.1F、AmDHN6.2F和AmDHN7.2,并进行了相关生物信息学分析。使用DNAMAN软件预测结果显示,4个蛋白都含有一个K片段和S片段。理化性质分析表明,4种脱水素蛋白均为亲水性蛋白,其中AmDHN3.2F为碱性蛋白,AmDHN5.1F、AmDHN6.2F和AmDHN7.2为酸性蛋白;理论相对分子质量最大的是AmDHN7.2(21.42kD),最小的是AmDHN3.2F(10.69kD);理论等电点最大的是AmDHN3.2F(9.01),最小的是AmDHN6.2F(6.21)。蛋白二级和叁级结构预测结果发现,4种蛋白均由3种结构组成:α-螺旋(7.50%～32.63%)、无规则卷曲(55.79%～73.00%)和延伸链(11.58%～19.50%)。采用邻接法构建系统进化树,并结合同源相似性分析发现,4种脱水素蛋白均与蒺藜苜蓿Mt DHN3和拟南芥At DHN10亲缘关系较近。利用XSTREAM软件分析结果显示,Am DHN5.1F、Am DHN6.2F和Am DHN7.2第3个蛋白序列具有串联重复单元,且主要集中在脱水素的中间部分。通过DOTTER软件生成点阵图发现,在中间区域存在大量的短片段重复,说明脱水素序列的收缩或扩张主要发生在中间部分。这些研究结果为进一步开展沙冬青DHN基因家族的功能分析奠定了基础。(本文来源于《植物遗传资源学报》期刊2019年05期）
韩振,高琦,许建和,易乐飞,申欣[10]（2019）在《草鱼脂酰辅酶A合成酶4基因全长cDNA分子克隆及表达调控》一文中研究指出本试验采用反转录PCR(RT-PCR)技术克隆草鱼脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)基因全长cDNA,利用实时荧光定量PCR技术研究ACSL4基因在草鱼大脑、心脏、脾脏、肝胰脏、肌肉、肾脏、肠系膜脂肪、前肠、中肠、后肠10种组织中的表达情况,并对投喂不同淀粉源饲料以及饥饿再投喂0、3、6、12和24 h后草鱼肝胰脏中ACSL4基因表达情况进行研究。结果显示:草鱼ACSL4基因cDNA全长2 418 bp,其开放阅读框2 121 bp,共编码706个氨基酸;草鱼ACSL4蛋白的氨基酸序列包含1个跨膜结构域、1个脂肪酸绑定基序和1个ATP/AMP绑定基序。草鱼ACSL4 mRNA在大脑和脾脏中相对表达量较高,显着高于其他组织(P <0.05),在肌肉中相对表达量最低;投喂不同淀粉源饲料对草鱼肝胰脏中ACSL4 mRNA相对表达量无显着影响(P>0.05);饥饿再投喂12 h后,草鱼肝胰脏中ACSL4 mRNA相对表达量达到最高值,显着高于其他时间段(P<0.05),24 h后恢复至最初水平。本试验从草鱼10种混合组织中克隆了ACSL4基因全长cDNA,其所编码的氨基酸序列的主要功能性位点脂肪酸绑定基序和ATP/AMP绑定基序在不同物种间高度保守;草鱼ACSL4基因主要在大脑和脾脏中表达;饲料中淀粉源对草鱼肝胰脏中ACSL4基因的表达无显着影响;在饥饿再投喂12 h后,草鱼肝胰脏中ACSL4 mRNA相对表达量达到最高值,随后显着下降至最初水平。(本文来源于《动物营养学报》期刊2019年05期）
分子克隆论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的对白木香AquilariasinensisAsWRKY62转录因子进行分子克隆、原核表达,并对其进行生物信息学分析和表达特性分析,为深入研究AsWRKY62在白木香生长发育、沉香形成等方面的功能奠定基础。方法以白木香愈伤组织总RNA反转录的cDNA为模板,采用RT-PCR及PCR技术克隆基因编码序列(CDS)全长;构建pET-21a-AsWRKY62原核表达载体,转化大肠杆菌BL21 (DE3)感受态进行原核诱导表达;并通过生物信息学软件预测蛋白的理化性质、结构域和亚细胞定位等特性;用软件DNAMAN和MEGA5分别进行氨基酸多序列比对和进化关系分析,通过组织特异性表达分析不同组织中的基因表达模式。结果 AsWRKY62(GenBank注册号MH925301)基因CDS全长为1 581bp,编码一条由526个氨基酸组成的多肽,结构域分析表明其属于WRKY group I类蛋白;密码子优化后的pET-21a-AsWRKY62在大肠杆菌BL21(DE3)中成功诱导的较适条件为0.5mmol/LIPTG37℃连续培养4h;As WRKY62基因具有组织特异性,其在根、茎中表达量最高,其次是沉香层和花中。结论本研究首次在白木香中克隆AsWRKY62,并进行原核表达和生物特性分析,表明其可能与沉香的形成有关,也为进一步研究其生物学功能提供了理论依据。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
分子克隆论文参考文献
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