湖南省湘潭市中心医院病理科湖南湘潭411100
摘要：目的探讨P16及增值细胞核抗原（PCNA）在人脑胶质瘤中的表达。方法用免疫组织化学方法检测114例不同级别中的P16和PCNA蛋白的表达，并与肿瘤不同级别的关系。结果P16蛋白表达缺失在Ⅲ级（65.5％）、Ⅳ级（91.3％）脑胶质瘤中显著高于Ⅰ~Ⅱ级的表达缺失（33.3％）（P＜0.01）；PCNA蛋白表达在Ⅲ级（56.3％）、Ⅳ级（84.8％）脑胶质瘤中的表达强度显著高于Ⅰ~Ⅱ级（16.7％）的表达强度（P＜0.01）。结论P16、PCNA蛋白的表达异常可用以判断人脑胶质瘤的生物学行为。
关键词：脑胶质瘤；基因，P16基因，增值细胞核抗原
P16基因又称多瘤抑制基因，定位于染色体9p21，全长8.5kb，3个外显子（exon）被2个内含子（intron）分隔组成，其3个外显子共同编码分子量为16kDa的核苷酸蛋白（CDK4的抑制蛋白），即P16蛋白。P16既是细胞周期有效调控者，有时抑制肿瘤细胞生长的关键因子。增殖细胞核抗原（PCNA）是细胞DNA合成期必不可少的一种因子，能反映细胞增殖活动。本实验应用免疫组织化学方法，对我院114例脑胶质瘤标本检测P16及PCNA表达情况，以探讨其与肿瘤发生和发展的关系。
1.材料与方法
1.1标本材料为我院2010年1月－2014年1月病理检查存档后的114例脑胶质瘤标本。按Kernohan[5]分级标准：Ⅰ~Ⅱ级36例，Ⅲ级32例，Ⅳ级46例。
1.2方法全部标本均经4％中性甲醛固定，石蜡包埋，切片3um厚，脱蜡至水，微波修复抗原，3％双氧水灭活内源性过氧化物酶，正常血清封闭，一抗采用P16单抗，PCNA单克隆抗体，均购自福建迈新公司，采用SP二步法，操作按说明书进行，用PBS代替一抗作阴性对照。
1.3免疫组化结果判断在400倍显微镜下至少观察200个细胞，P16、PCNA蛋白的表达均呈棕黄色颗粒，位于细胞核内，阳性细胞占肿瘤细胞总数的百分比为三个等级：+阳性细胞＜33％；2+阳性细胞34~70％；3+阳性细胞＞71％。
1.4统计学处理采用SAS8.0forwindows对数据进行speaman等级相关分析。
2.结果
P16、PCNA蛋白在各级脑胶质瘤中的表达见表一，P16蛋白表达随脑胶质瘤级别升高而降低（r=-0.52375，P＜0.01）；PCNA蛋白的表达随脑胶质瘤级别升高而升高（r=0.52103，P＜0.01）。P16蛋白的缺失率为65.8％，Ⅰ~Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤缺失率分别为33.3％、65.6％、91.3％。PCNA蛋白表达强度较高。
3.讨论
P16基因是近年发现的一个重要抑癌基因，其主要作用机制是作为负性调控因子，参与细胞周期调节。Rao等[1]通过研究22例多形性胶质母细胞瘤中发现P16基因的纯合缺失率为29%。Zadeh等报道在伊朗胶质瘤患者中P16基因的纯合缺失率为65%（26/40）。Robertson等[2]发现胶质瘤P16基因的纯合缺失率较高，且与肿瘤恶性程度有一定相关性。本组研究表明，P16蛋白的缺失率为65.8％，Ⅰ~Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤缺失表达率分别为33.3％、65.6％、91.3％（P＜0.01）。结果提示P16蛋白表达随着肿瘤恶性程度的增强呈下降趋势，P16蛋白表达与胶质瘤细胞的分化程度有密切关系，在胶质瘤的恶性过程中，P16蛋白的缺失起一定的相关性。
PCNA是一种仅在增值细胞中合成表达36KD多肽，作为DNA聚合酶δ的辅助蛋白，直接参与DNA合成，它在细胞处于静止相时表达很低，当细胞处于G1后期和S期时，表达显著增高，而G2、M期减少。于士柱等[3]研究发现，PCNA能客观反映原发性肿瘤的恶性增殖分数和生长速度，可作为临床与病理评价原发性肿瘤生物学行为和患者预后的参考指标。本研究结果表明，人脑胶质瘤中PCNA表达水平随临床病理级别升高而升高（P＜0.01），提示人脑胶质瘤中PCNA表达强度可反映恶性程度。
本研究表明人脑胶质瘤病理级别越高的P16蛋白缺失率越高，而PCNA表达强度升高，在判断人脑胶质瘤恶性程度及预测病人预后时，如果结合肿瘤的P16、PCNA蛋白表达，可以对胶质瘤的早期诊断、风险及预后评估、治疗方面有重大意义，但对其表达调控、失活机制、突变体的功能尚需进一步深入研究。
参考文献：
[1]RaoSK，EdwardsJ，JoshiAD，etal。AsurveyofglioblastomagenomicamplificationsanddeletionsNeurooncology，2010，96（2）：169-248.
[2]RobertsonLB，ArmstrongGN，OlverBD，etal，Surveyoffamilialgliomaandroleofgermlinep16（INK4A）/p14（ARF）andp53mutation.FamCancer，2010，9（23）：413-434.
[3]于士柱，杨露春，张景全等。脑肿瘤细胞PCNA和Ki-67表达的对比观察。中国肿瘤临床，1997，24（4）：267