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尼罗罗非鱼ZAP-70蛋白的原核表达、纯化及其多抗制备

2020-12-02阅读(797)

尼罗罗非鱼ZAP-70蛋白的原核表达、纯化及其多抗制备

论文摘要

[目的]构建尼罗罗非鱼ZAP-70原核表达载体,纯化其重组蛋白并制备多克隆抗体。[方法]采用无缝克隆技术构建尼罗罗非鱼ZAP-70重组表达载体,并转入大肠杆菌B21中诱导表达,将表达的ZAP-70蛋白免疫日本大耳兔得到多克隆抗体,采用Western Blotting和ELISA技术鉴定抗体的特异性和效价。[结果]成功构建原核表达重组质粒p ET-B2m-ZAP-70,诱导表达的重组蛋白分子量约为39 k Da,主要以包涵体的形式表达;获得效价为1∶512 000的多克隆抗血清,WB检测显示该抗体能够特异性的识别所表达的ZAP-70重组蛋白。[结论]尼罗罗非鱼ZAP-70重组质粒在大肠杆菌B21中高效表达,分子量约为39 k Da,该蛋白具有良好的免疫原性,为进一步探索ZAP-70在尼罗罗非鱼免疫系统中的功能奠定了基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 实验材料
  •     1.1.2 试剂
  •     1.1.3 仪器
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 蛋白质结构分析及抗原性预测
  •     1.2.2 基因扩增与原核表达质粒构建
  •     1.2.3 目的蛋白表达与鉴定
  •     1.2.4 包涵体蛋白纯化
  •     1.2.5 多克隆抗体制备及鉴定
  •     1.2.6 抗体效价ELISA检测
  •     1.2.7 Western Blotting检测
  •     1.2.8 抗体纯化
  • 2 结果与分析
  •   2.1 ZAP-70蛋白亲疏水性和抗原性分析结果
  •   2.2 ZAP-70表达载体的构建与鉴定结果
  •   2.3 目的蛋白的表达与鉴定结果
  •   2.4 蛋白纯化结果
  •   2.5 蛋白血清抗体的免疫效价
  •   2.6 Western Blotting检测结果
  •   2.7 抗体纯化结果
  • 3 讨论
  • 4 结论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 潘传燕,冯鹏霏,林勇,罗洪林,张永德,苏乾莲

    关键词: 罗非鱼,原核表达,多克隆抗体,免疫印迹

    来源: 生物技术 2019年01期

    年度: 2019

    分类: 基础科学

    专业: 生物学

    单位: 广西水产科学研究院广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室,广西兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室

    基金: 国家自然科学基金项目(31372553,31760765),广西自然科学基金项目(2015GXNSFAA139070),广西重点研发计划项目(桂科AB16380074)

    分类号: Q786

    DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2019.01.0004

    页码: 16-22

    总页数: 7

    文件大小: 1622K

    下载量: 196

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