利用CRISPR/Cas9系统构建Tiki1基因修饰猪模型

论文摘要

Tiki1基因是哈佛大学儿童医学院贺熹教授实验室发现的一个对蛙头部的诱导起到决定性作用的新基因,但Tiki1基因在小鼠等啮齿类动物中缺失,因此无法利用小鼠等小动物来研究其在哺乳动物中的作用.本文利用CRISPR/Cas9系统结合体细胞克隆技术构建Tiki1基因修饰猪模型,研究Tiki1基因在猪发育中的作用.我们利用贺熹教授团队提供的人Tiki1基因序列,在猪的基因组数据库中比对出与其同源性最高的一段序列设计2个靶位点(g1和g2).以设计的靶位点构建打靶质粒转染猪胎儿成纤维细胞,经细胞筛选、PCR扩增及测序共鉴定了52个单细胞克隆株.最终选择靶位点g1为纯合双敲的5个单细胞克隆株和靶位点g2为纯合双敲的3个单细胞克隆株作为构建Tiki1基因敲除猪的核供体.我们共计构建了720个重组胚胎,分别植入3头代孕母猪,其中有1头经B超检测成功怀孕并妊娠到期产下13头发育正常的克隆猪,经测序鉴定其中12头为Tiki1基因双敲除猪模型,Tiki1基因敲除克隆猪健康存活至今.结果表明Tiki1基因对于猪早期发育的作用机理不同于蛙,其在猪早期发育的过程中的具体作用机理有待后续进一步的深入研究.

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 吴彩霞,刘朝明,颜泉梅,张全军,赵宇,欧阳振,樊娜娜,赖良学

关键词: 基因打靶,猪模型

来源: 生物化学与生物物理进展 2019年09期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 吉林大学动物医学学院,中国科学院广州生物医药与健康研究院

基金: 国家重点研发计划-神经疾病大动物模型的建立及干细胞治疗评价(2017YFA0105100),国家重点基础研究发展计划(973)-发育与生殖重要哺乳动物模型的建立(2011CB944200)资助~~

分类号: Q78

DOI: 10.16476/j.pibb.2018.0307

页码: 900-908

总页数: 9

文件大小: 5718K

下载量: 141

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标签：基因打靶论文;  猪模型论文;