脱色优化透明方法Dec-DISCO：实现富血组织整体成像

论文摘要

生物组织的三维整体成像对于建立其结构与功能的联系有至关重要的作用。组织光透明技术结合显微光学成像为组织器官整体信息获取提供了一种有效手段。3DISCO作为一种基于有机试剂的光透明方法,具有操作简单、透明速度快、透明效果好、样本尺寸收缩等优点,被广泛应用于完整器官等大样本的整体成像研究。然而,对于含血量丰富的组织,3DISCO透明后的样本往往呈现较深的红棕色甚至深褐色,透明效果由此受到影响,直接降低了此类富血组织的成像质量。为了解决以上问题,本文在3DISCO方法基础上,引入脱色预处理,建立了一种适用于富血组织透明和整体成像的光透明方法,有效地提高了样本的透明效果和成像质量。主要研究内容如下:（1）脱色优化3DISCO透明方法的建立:选取光透明方法中常用的几种脱色试剂,从脱色效果和荧光保持两方面进行比较,最终选择兼具优良脱色效果和荧光保持能力的CUBIC-L试剂作为脱色试剂。结合原有的3DISCO光透明方法,建立了基于脱色处理的优化光透明方法,并命名为Dec-DISCO。（2）Dec-DISCO方法的评估:从样本透明效果、荧光保持能力和尺寸形变三个方面对Dec-DISCO方法进行了评估,并与3DISCO方法作了对比。结果表明,Dec-DISCO方法能有效地提高样本的透明度,对GFP荧光信号有着更好的兼容效果,同时保持了3DISCO尺寸收缩而利于大体积样本成像的特点。（3）Dec-DISCO在富血组织整体成像的应用:将Dec-DISCO光透明方法与光片照明显微镜结合,实现了小鼠脑、骨骼肌和脏器等多种组织的三维整体成像。综上所述,本研究通过引入CUBIC-L脱色处理、建立的一种优化3DISCO脱色透明方法,解决了富血组织透明和整体成像的问题,实现了小鼠包括富血组织器官的三维整体成像,在生理学与病理学的研究中具有重要的应用前景。

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文章来源

类型: 硕士论文

作者: 马祎琳

导师: 朱（艹丹）

关键词: 组织光透明,优化,脱色,富血组织,荧光成像

来源: 华中科技大学

年度: 2019

分类: 基础科学,信息科技

专业: 生物学,计算机软件及计算机应用

单位: 华中科技大学

基金: 国家自然科学基金(No.61860206009,81870934,31571002,81701354),国家创新群体科学基金(No.61721092),国家重点研发计划(No.2017YFA0700501),华中科技大学基础研究基金(No.2018KFYXKJC026)

分类号: TP391.41;Q-337

DOI: 10.27157/d.cnki.ghzku.2019.001498

总页数: 73

文件大小: 4171K

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