粘虫谷氨酰胺转胺酶(MsTGase)活力测定条件的正交优化及其在幼虫体内的分布

论文摘要

【目的】本研究旨在优化Grossowicz氧肟酸比色法测定粘虫Mythimna separata谷氨酰胺转胺酶（Ms TGase）活力的组合条件,以Ms TGase酶活力为依据分析其在不同龄期幼虫体内的分布规律。【方法】取4龄粘虫幼虫,通过组织匀浆和沉析纯化制备Ms TGase,采用Grossowicz比色法测定Ms TGase酶活力,并对Grossowicz比色法的多重实验因素进行正交优化,进一步结合差速离心法分析不同龄期幼虫体内和亚细胞组分（细胞核和细胞碎片,线粒体,微粒体以及胞质溶胶）中Ms TGase酶活力。【结果】结果表明,酶浓度、底物浓度、反应体系pH值、反应温度及钙离子浓度等实验因素都对Ms TGase酶活力测定结果产生显著影响,其影响大小顺序为:酶浓度>温度> p H>底物浓度>Ca2+浓度。Ms TGase酶比活力测定的最优化条件:酶浓度20 mg/m L、底物浓度0. 04 mol/L、反应体系pH值6. 5、测定温度37℃,不添加钙离子。在1-5龄幼虫中以4龄幼虫的Ms TGase酶活力最高,其比活力也显著高于其他龄期的,且在1-5龄幼虫胞质溶胶中Ms TGase酶活力分别占各亚细胞组分酶活力总和的39%,25%,48%,60%和61%。【结论】所获得的最优化条件适用于粘虫Ms TGase酶活力测定。Ms TGase在粘虫体内呈显著的龄期表达特征和亚细胞分布规律。

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类型: 期刊论文

作者: 饶文兵,徐久永,章先飞,Solange MUHAYIMANA,黄青春

关键词: 粘虫,谷氨酰胺转胺酶,酶活力,比色法,正交优化,体内分布

来源: 昆虫学报 2019年01期

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学

单位: 华东理工大学药学院上海市化学生物学重点实验室

基金: 国家重点基础研究发展计划项目(2010CB126101),上海市生物医药科技支撑计划项目(15431906800),华东理工大学来华留学生教育教学项目(ZC1824101)

分类号: Q966

DOI: 10.16380/j.kcxb.2019.01.005

页码: 41-48

总页数: 8

文件大小: 470K

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标签：粘虫论文;  谷氨酰胺转胺酶论文;  酶活力论文;  比色法论文;  正交优化论文;  体内分布论文;