论文摘要
[目的]黏菌素,是治疗多重耐药、泛耐药的肺炎克雷伯菌等的极少数药物之一;作为饲料添加剂,也广泛用于畜禽的促生长和疾病的预防。然而,黏菌素耐药mcr-1基因及其变体的传播,给其临床应用带来了巨大威胁。相关研究常分离单个样本的1个或几个单菌落进行表征,可能会低估耐药基因的流行和分化情况。本文以病死鸡为研究对象,分离多个耐药菌,研究黏菌素耐药菌在单个宿主体内的传播特征。[方法]从广东省某动物医院采集病死鸡盲肠样本,用含有黏菌素的培养基筛选,检测是否携带黏菌素耐药的肠杆菌。提取盲肠内容物基因组,PCR检测耐药基因。随机选取一份mcr-1基因阳性的盲肠内容物,用生理盐水倍比稀释,挑选多个单菌落分离培养。用MALDI-TOF鉴定菌种,PCR检测mcr基因携带情况,肉汤稀释法测定菌株对黏菌素的MIC。挑选菌株进行脉冲场凝胶电泳,进行PFGE分型。选取PFGE谱型不同的菌株,进行全基因组二代测序。根据测序结果分析菌株的MLST和质粒类型等。通过和NCBI数据库中的序列进行比对,PCR-mapping得到mcr-1基因的基因环境。[结果]从单个病死鸡盲肠的内容物中分离肠杆菌172株,黏菌素MIC>2的菌株共105株,包括E.coli （n=61）、K.pneumoniae（n=6）、P.mirabilis （n=18）、P.vulgaris/penneri （n=9）、E.cloacae （n=1）、A.junii（n=1）和M.morganii （n=9）。其中mcr阳性的61株,均为E.coli。PFGE分型将这些E.coli的菌株其分为9种谱型,全基因组测序分析显示共有7种MLST型（ST10,ST410,ST156,ST7850,ST1196,ST12和ST218）。mcr-1基因位于染色体或5种不同类型的质粒上,包括IncHI2、IncX4、IncI2、IncHI1和p0111型质粒。耐药基因mcr-1在单个样本体内展现出多种基因环境,ISApl1-mcr-1-ISApl1,ISApl1-mcr-1,IS1-mcr-1,以及新型的转座单元ISApl1-mcr-1-pap2-IS26-aph3-Ia-ISApl1,该转座子能同时介导黏菌素和氨基糖苷类药物耐药基因的传播。基因组进化树分析表明,分离自同一样本的mcr-1阳性菌株的遗传背景极其分化。[结论]本文从黏菌素耐药肠杆菌的菌种、遗传背景、ST型、质粒类型和基因环境等多个层面进行研究,充分展现了鸡肠道内黏菌素耐药菌的多样性。
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文章来源
类型: 国内会议
作者: 李幸萍,宋佳琪,孙阮洋,方亮星,张荣民,廖晓萍,孙坚,刘雅红
关键词: 宿主分化,黏菌素,耐药性,基因水平传播
来源: 中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会 2019-10-13
年度: 2019
分类: 基础科学,农业科技
专业: 生物学,畜牧与动物医学
单位: 华南农业大学兽医学院
分类号: S852.61
DOI: 10.26914/c.cnkihy.2019.034649
页码: 225-226
总页数: 2
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