导读:本文包含了酶纯化和性质论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:糙皮侧耳,漆酶,纯化,酶学性质
酶纯化和性质论文文献综述
马倩倩[1]（2019）在《白腐菌Pleurotus ostreatus漆酶纯化和酶学性质研究》一文中研究指出漆酶是一种含铜多酚氧化酶,主要来源于微生物、植物、动物,真菌是能分泌漆酶的主要微生物。漆酶作为一种绿色催化剂,其催化底物非常广泛,且大多数催化反应的唯一产物为水,对环境无害,漆酶的优秀性能使其广泛应用于各个领域。自然条件下生长的菌株漆酶产量及漆酶活力普遍较低,筛选漆酶高产菌株,获得性能优良的漆酶,开发漆酶的应用研究具有重要意义。本论文以一株复合诱变筛选后的糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)高产菌株为研究菌株,从其发酵液分离纯化出一种漆酶,并对分离纯化后的纯漆酶进行酶学性质研究,为漆酶进一步应用于工业化大规模生产提供一些理论和技术支持。利用粗酶液脱色7种不同结构类型的染料,研究漆酶对不同染料的脱色效果,为染料脱色研究提供参考。以糙皮侧耳C1诱变高产菌株F-13为研究菌株,在液体培养基中摇瓶培养,温度30℃,转速220r/min,发酵9d后漆酶活力达到最高值148U/L。粗酶液经过(NH_4)_2SO_4分级沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析、Sephasex G-100凝胶层析,最终得到电泳纯的漆酶,漆酶比活力达到96.4U/mg,纯化倍数达27.5倍,回收率为6.5%。对分离纯化后的漆酶进行酶学性质研究,结果发现,所得漆酶分子量为60.5kDa;最适反应pH和温度为5.0和50℃,pH为4.0-6.0时漆酶活力较高,pH为3.0、4.0和5.0时稳定性较好,温度为40℃和50℃时漆酶稳定性很好;对底物的适宜程度由高到低依次为:ABTS、DMP、愈创木酚,此漆酶在最适底物ABTS条件下的K_m为0.194mmol/L,V_(max)为9.25μmolL~(-1)min~(-1);Cu~(2+)能很好地激发漆酶活性,Al~(3+)、Ba~(2+)、Zn~(2+)、Mg~(2+)、K~+在一定浓度时对酶活起促进作用,Hg~(2+)、Pb~(2+)、Cd~+对酶活起一定的抑制作用,Fe~(3+)、Mn~(2+)、Ca~(2+)对酶活无显着影响。将粗酶液应用于7种不同结构类型的染料脱色,结果表明,在染料浓度为100mg/L,各染料的最适pH及温度下,蒽醌类染料茜素红2h时脱色率可达95.3%;苯甲烷类染料碱性品红和孔雀石绿2h时脱色率分别达到90.1%和93.6%;苯胺类染料中性红及杂环类染料次甲基蓝,2h时的脱色率分别达到81.5%和85.9%;偶氮类染料甲基橙和刚果红,2h的脱色率仅为20.8%和13.8%。表明此漆酶对蒽醌类和苯甲烷类染料脱色作用显着,对苯胺类和杂环类染料脱色效果良好,对偶氮染料脱色作用差。(本文来源于《辽宁工业大学》期刊2019-03-01）
胡一杰（Alhujaily[2]（2014）在《Physisporinus sp漆酶纯化、性质及对染料的脱色研究》一文中研究指出漆酶是一类含铜的氧化还原酶，它能催化酚类化合物，将酚类化合物进行单电子氧化，形成酚自由基，进而产生非酶催化的自由基反应。由于漆酶特殊的催化性能和广泛的底物范围，在生物技术领域中得到广泛的应用。本实验以Physisporinussp.为出发菌株，研究了在液体培养体系下，不同碳源、氮源和诱导物对其产漆酶的影响，对其胞外漆酶进行了分离纯化和酶学特性的研究，并将纯化的漆酶应用于偶氮类染料的脱色，主要结论如下：本文研究了不同碳源、氮源和诱导物对Physisporinus sp.胞外产漆酶的影响，研究发现最适碳源和最适氮源分别为葡萄糖和胰蛋白胨，藜芦醇为该菌株胞外产漆酶的最佳诱导物。通过盐析、疏水层析和离子交换层析，可以将胞外漆酶进行分离纯化。通过80%饱和度的盐析操作，漆酶比活为116.4U/mg，收率80.8%，纯化倍数为1.5倍；疏水层析后收率为42.1%，纯化倍数为10.1倍，漆酶比活为781.9U/mg；采用阴离子交换层析，最终的收率为20.4%，纯化19.6倍，漆酶比活为1515.1U/mg。SDS-PAGE结果显示叁步分离后的漆酶蛋白达到电泳纯，其表观分子量为62KDa。以ABTS为底物，该漆酶的最适pH值为3.0，最适反应温度为60℃。该漆酶在40℃条件下保持稳定，50℃下保存1h剩余酶活为84%，60℃下保存1h剩余酶活为50%，表现出良好的温度稳定性。该漆酶在pH﹥6.0条件下比较稳定。以ABTS和DMP为底物测定其动力学常数，结果表明，与DMP相比，该漆酶对ABTS显示较好的亲和力，其Km值和Vmax值分别为1.27×10-3和16.87μM/（L﹒min），而以DMP为底物，其Km值和Vmax值分别为2.82×10-3和5.24μM/（L﹒min）。多数的金属离子对漆酶的活性略有提升，而Fe2+、Ni2+、Co2+和Hg2+能显着抑制漆酶的酶活。有机溶剂能够显着抑制漆酶的酶活，其中5%的甲醇抑制效果最弱。纯化后的漆酶应用于偶氮类染料SY,，DR5B，CB38和DB22的脱色，实验显示在没有介体存在下，该漆酶对四种偶氮染料显示出较低的脱色能力，3小时后四种染料的脱色率分别为13%，2%，7%和12%。然而在丁香醛作为介体的条件下，该漆酶对四种偶氮类染料显示出较好的脱色能力。在丁香醛浓度为0.5mM时，10min该漆酶对SY的脱色率为98%；0.1mM的丁香醛存在下，10min该漆酶对DR5B的脱色率则可以达到97%；丁香醛浓度为0.1mM时，10min该漆酶对CB38和DB22的脱色率分别为53%和48%。然而随着染料浓度的增加，该漆酶对四种染料的脱色效果逐渐降低。(本文来源于《华中科技大学》期刊2014-05-01）
黄世臣,赵敏[3]（2014）在《Bipolaris australiensis HD-1胆红素氧化酶纯化、鉴定及其酶学性质》一文中研究指出[目的]为了获得B.bipolaris HD-1胆红素氧化酶纯品,确定酶的同源性及其常规酶学性质。[方法]将B.bipolaris HD-1发酵液依次通过硫酸铵盐析、阴离子交换层析和凝胶过滤层析确定蛋白的纯度、浓度和酶活力;通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)法获得氨基酸序列,并利用Mascot软件在NCBI蛋白库中的比对,以确定同源蛋白来源;用SDS-PAGE方法测其表观分子量;用等电聚焦方法测定等电点;用Linwerver-Burk双倒数作图法测定米氏常数;并对该酶的酶学性质进行了常规的测定。[结果]获得具有胆红素氧化酶酶活性的电泳纯单体蛋白,酶活为46 000 U/L,比活为1.15 U/mg;MALDI-TOF共获得135个氨基酸,该蛋白与来源于Helminthosporium tritici-vulgaris的漆酶前体蛋白序列同源性达100%;蛋白的表观分子量为68 kDa;pI为4.1;它对ABTS和胆红素的米氏常数分别为Km(ABTS)=1.8×10-5mol/L(pH 3.0)和Km(bilirubin)=2.7×10-5mol/L(pH 7.5);对胆红素的最适催化活性为36℃,酶在-40℃下可保持2年,酶活保持在90%以上,在pH 8~9.5下可保持相当高的催化胆红素活性,能够耐受高浓度的硝酸钠和尿素,低浓度的迭氮化钠对酶活有促进作用而高浓度则抑制,对氯化钠、溶解氧敏感。[结论]该蛋白具有典型的胆红素氧化酶特性,又存在明显的不同。(本文来源于《安徽农业科学》期刊2014年11期）
王和利,陈迪新,王洪涛[4]（2013）在《核桃青皮多酚氧化酶纯化及酶学性质研究》一文中研究指出采用简化的方法对核桃(Juglans rejia L.)青皮中多酚氧化酶(PPO)进行纯化,并对其酶学性质进行了研究。结果表明,核桃青皮PPO经过丙酮沉淀、金属螯合亲和层析,被纯化了1.42倍,回收率为0.21%。以邻苯二酚为底物,该酶最适pH是6.0,最适温度是20℃;抗坏血酸对核桃青皮PPO的活性有很强的抑制作用,亚硫酸氢钠和柠檬酸也能抑制核桃青皮PPO的活性;当Cu2+浓度在0.01~0.05 mmol/L时,Cu2+对PPO有激活作用,超过这个范围对PPO活性反而有抑制作用。(本文来源于《湖北农业科学》期刊2013年19期）
张清霞,杨荣华,徐敬友,纪兆林,陈夕军[5]（2013）在《粘帚霉GR-6菌株种类鉴定及其β-1,3-葡聚糖酶纯化与酶学性质》一文中研究指出为明确粘帚霉GR-6产生的β-1,3-葡聚糖酶对植物病原真菌的作用机制,建立β-1,3-葡聚糖酶分离纯化体系,根据形态特征和ITS序列分析鉴定GR-6种类,用60%饱和度的丙酮沉淀酶蛋白质,再通过DE-52离子交换层析和Sephadex G-75凝胶柱层析纯化蛋白质。结果表明,GR-6菌株ITS序列与粉红粘帚霉的相似度最高,达到98%,结合形态学特征将该菌株鉴定为粉红粘帚霉。SDS-PAGE显示纯化后得到一种分子量为4.11×104的蛋白质,该蛋白质具有β-1,3-葡聚糖酶活性。经该酶处理后的水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)和棉花黄萎病菌(Verticilliun dahliae)菌丝颜色变浅、细胞轮廓变模糊、甚至菌丝细胞逐渐消失,可见,粉红粘帚霉GR-6产生的β-1,3-葡聚糖酶对这两种植物病原真菌菌丝有直接破坏作用。纯化后的β-1,3-葡聚糖酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH值为4,酶液在50℃以下或pH 5时保存0.5 h,酶活性基本保持稳定;该葡聚糖酶对一些金属离子较敏感,其中Zn2+、Sn2+、Ca2+、Fe2+等使酶活性显着降低,而Mn2+和K+对酶活性没有明显的影响。建立的β-1,3-葡聚糖酶纯化体系稳定可靠。(本文来源于《江苏农业学报》期刊2013年04期）
冯晓雨[6]（2012）在《海洋内生拟盘多毛孢菌J63发酵产漆酶及漆酶纯化和性质的研究》一文中研究指出漆酶是一种含铜离子的木质素降解酶,催化的底物范围广泛,有重要的工业应用价值。本实验室从浙江东海20-30米处淤泥中分离得到一株高产漆酶的真菌,鉴定为内生拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis sp.),并命名为J63。本文重点考察了该菌株在液体中发酵产漆酶的特性,并分离纯化出其中的一种漆酶同工酶Laccase1,考察了该种漆酶的酶学特性。首先对Pestalotiopsis sp. J63菌种发酵产酶条件进行了研究,重点考察了该菌株利用农业废弃物产漆酶的情况和合适的培养基组成,结果表明在培养基中加入3g/L麦芽糖、20g/L稻草粉和2g/L麸皮并加入0.09mM苯酚诱导后,可使漆酶酶活达到了5791.7U/L。利用Native-PAGE分析漆酶同工酶时发现,该菌种可产生两种漆酶的同工酶(Laccase1和Laccase2).诱导剂苯酚、愈创木酚及藜芦醇不仅能够加强Laccase1的表达,而且能够诱导Laccase2的表达,从而使酶活得到大幅度提高。无机盐能够促进Pestalotiopsis sp. J63产漆酶,其中H3BO3. SrCl2·6H2O、NaF和KBr均能使酶活提高200%以上。该菌种产漆酶的最适温度为26℃,最适的产酶pH为6.0。其次,建立了一条从Pestalotiopsis sp. J63发酵液中分离纯化漆酶的技术路线。通过絮凝和超滤两步初级分离纯化,基本去除了发酵液中离心法无法去除的悬浮物质,并使发酵液浓缩。然后,选用DEAE Sepharose Fast Flow进行离子交换层析,优化后的层析条件为选用pH6.0NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液,流速0.5ml/min,采用阶跃方式洗脱。把收集到的DEAE Sepharose Fast Flow洗脱峰中含有漆酶活性的部分,再进行Phenyl Sepharose Fast Flow疏水层析,最终的漆酶纯化倍数和回收率分别为14.54和15.27%。经SDS-PAGE和Native-PAGE分析发现,产品中为单一的漆酶条带(Laccase1)。经测定并计算,该漆酶的相对分子质量为52.4kDa。第叁,测定了Laccase1的酶学性质,发现其最适反应温度为60℃,且在60℃时热稳定性较好,保温180min后仍保留了46.5%的酶活性。最适反应pH为3.0,在pH3.5-6的范围内漆酶较稳定,36h后仍然能够保持50%以上的酶活。同时,考察了12种无机盐对酶活的影响,除FeSO4·7H2O外其余11种无机盐对漆酶的酶活没有负影响,ZnSO4·7H2O、KBr、KAl(SO4)2·12H2O、MnCl2·4H2O等甚至能使酶活提高10%以上。最后,以ABTS作为底物,在pH4.5、反应温度20℃的条件下测定米氏常数得到Vmax=5.34μM/min, Km=104.5μM。(本文来源于《浙江大学》期刊2012-05-01）
王维维,邱树毅,谢晓莉,吴鑫颖,李广神[7]（2011）在《胞外单宁酶纯化及酶学性质的研究》一文中研究指出采用黑曲霉B0201固态生料发酵生产胞外单宁酶,经过硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素层析、葡聚糖G-150凝胶柱层析纯化,得到电泳纯的单宁酶,纯化倍数达到18.44。对该酶的性质研究表明:单宁酶的相对分子质量大小约为58800,该酶的最适反应温度是40℃,最适反应pH值是5.0;以PG为底物,米氏常数Km为1.08mmol/L,Vmax为104.1μmol/(L.min)。(本文来源于《食品科学》期刊2011年13期）
张清霞,李世俊,徐敬友,纪兆林,陈夕军[8]（2011）在《中华根瘤菌L03几丁质酶纯化及其酶学性质研究》一文中研究指出中华根瘤菌Sinorhizobium sp.菌株L03是1株能产生几丁质酶的生防细菌。采用90%饱和度硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子层析、Phenyl-Sepharose疏水层析等方法获得了菌株L03的几丁质酶。SDS-PAGE检测发现该酶已被纯化,其分子量约为41.3kD。该酶反应的最适温度为45℃;最适反应的溶液pH值为6;酶液在pH5~8条件下和40℃下分别保存1h,酶活力基本保持稳定;Mg2+和Ba2+能显着促进几丁质酶活性上升,而Zn2+、Cu2+和Fe3+等对酶活力有明显的抑制作用。功能分析结果显示,该几丁质酶对供试的几种病原真菌细胞壁都有明显的降解作用。(本文来源于《中国生物防治学报》期刊2011年02期）
代海兵,王菡[9]（2008）在《漆酶纯化及部分性质研究》一文中研究指出目的:研究叁色革裥菌(Lenzites tricolor)所产漆酶的纯化及其部分酶学特性。方法:利用盐析、层析等方法纯化漆酶;测定漆酶的活力及不同金属离子对其的影响。结果:培养第6d时生长最快,漆酶活力最强。层析缓冲体系应选择:缓冲液Na2HPO4-C6H8O7;pH值5.0;反荷离子强度范围0.4～0.5mol/L较合适。漆酶的Km值约为60.4μmol/L。Na+、Ba2+对漆酶活力无明显影响,Cu2+、Mn2+、Zn2+、Mg2+对漆酶有不同的抑制作用,而Ca2+对漆酶有明显的激活作用。经75%(NH4)2SO4盐析、Sephadex G-150层析后得到较好的纯化漆酶。结论:叁色革裥菌所产漆酶经盐析、层析得到较好的纯化效果,不同金属离子对漆酶活力具有不同的影响。(本文来源于《牡丹江医学院学报》期刊2008年06期）
梁勤,周刚[10]（2008）在《蜜蜂球囊菌几丁质酶纯化及酶学性质的研究》一文中研究指出自患白垩病死亡的蜜蜂幼虫身体上分离到一株产儿丁质酶的蜜蜂球囊菌(Ascosphaera apis Olive& Spiltoir)。经过硫酸铵盐析、SephadexG-75凝胶层析、DE-52离子交换层析后,得到纯化倍数6.7的几丁质酶。该几丁质酶的最适反应温度为40℃,在35℃～45℃之间能保持40%以上的活力,但是(本文来源于《第九届亚洲养蜂大会论文摘要集》期刊2008-11-01）
酶纯化和性质论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
漆酶是一类含铜的氧化还原酶，它能催化酚类化合物，将酚类化合物进行单电子氧化，形成酚自由基，进而产生非酶催化的自由基反应。由于漆酶特殊的催化性能和广泛的底物范围，在生物技术领域中得到广泛的应用。本实验以Physisporinussp.为出发菌株，研究了在液体培养体系下，不同碳源、氮源和诱导物对其产漆酶的影响，对其胞外漆酶进行了分离纯化和酶学特性的研究，并将纯化的漆酶应用于偶氮类染料的脱色，主要结论如下：本文研究了不同碳源、氮源和诱导物对Physisporinus sp.胞外产漆酶的影响，研究发现最适碳源和最适氮源分别为葡萄糖和胰蛋白胨，藜芦醇为该菌株胞外产漆酶的最佳诱导物。通过盐析、疏水层析和离子交换层析，可以将胞外漆酶进行分离纯化。通过80%饱和度的盐析操作，漆酶比活为116.4U/mg，收率80.8%，纯化倍数为1.5倍；疏水层析后收率为42.1%，纯化倍数为10.1倍，漆酶比活为781.9U/mg；采用阴离子交换层析，最终的收率为20.4%，纯化19.6倍，漆酶比活为1515.1U/mg。SDS-PAGE结果显示叁步分离后的漆酶蛋白达到电泳纯，其表观分子量为62KDa。以ABTS为底物，该漆酶的最适pH值为3.0，最适反应温度为60℃。该漆酶在40℃条件下保持稳定，50℃下保存1h剩余酶活为84%，60℃下保存1h剩余酶活为50%，表现出良好的温度稳定性。该漆酶在pH﹥6.0条件下比较稳定。以ABTS和DMP为底物测定其动力学常数，结果表明，与DMP相比，该漆酶对ABTS显示较好的亲和力，其Km值和Vmax值分别为1.27×10-3和16.87μM/（L﹒min），而以DMP为底物，其Km值和Vmax值分别为2.82×10-3和5.24μM/（L﹒min）。多数的金属离子对漆酶的活性略有提升，而Fe2+、Ni2+、Co2+和Hg2+能显着抑制漆酶的酶活。有机溶剂能够显着抑制漆酶的酶活，其中5%的甲醇抑制效果最弱。纯化后的漆酶应用于偶氮类染料SY,，DR5B，CB38和DB22的脱色，实验显示在没有介体存在下，该漆酶对四种偶氮染料显示出较低的脱色能力，3小时后四种染料的脱色率分别为13%，2%，7%和12%。然而在丁香醛作为介体的条件下，该漆酶对四种偶氮类染料显示出较好的脱色能力。在丁香醛浓度为0.5mM时，10min该漆酶对SY的脱色率为98%；0.1mM的丁香醛存在下，10min该漆酶对DR5B的脱色率则可以达到97%；丁香醛浓度为0.1mM时，10min该漆酶对CB38和DB22的脱色率分别为53%和48%。然而随着染料浓度的增加，该漆酶对四种染料的脱色效果逐渐降低。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
酶纯化和性质论文参考文献
[1].马倩倩.白腐菌Pleurotusostreatus漆酶纯化和酶学性质研究[D].辽宁工业大学.2019
[2].胡一杰（Alhujaily.Physisporinussp漆酶纯化、性质及对染料的脱色研究[D].华中科技大学.2014
[3].黄世臣,赵敏.BipolarisaustraliensisHD-1胆红素氧化酶纯化、鉴定及其酶学性质[J].安徽农业科学.2014
[4].王和利,陈迪新,王洪涛.核桃青皮多酚氧化酶纯化及酶学性质研究[J].湖北农业科学.2013
[5].张清霞,杨荣华,徐敬友,纪兆林,陈夕军.粘帚霉GR-6菌株种类鉴定及其β-1,3-葡聚糖酶纯化与酶学性质[J].江苏农业学报.2013
[6].冯晓雨.海洋内生拟盘多毛孢菌J63发酵产漆酶及漆酶纯化和性质的研究[D].浙江大学.2012
[7].王维维,邱树毅,谢晓莉,吴鑫颖,李广神.胞外单宁酶纯化及酶学性质的研究[J].食品科学.2011
[8].张清霞,李世俊,徐敬友,纪兆林,陈夕军.中华根瘤菌L03几丁质酶纯化及其酶学性质研究[J].中国生物防治学报.2011
[9].代海兵,王菡.漆酶纯化及部分性质研究[J].牡丹江医学院学报.2008
[10].梁勤,周刚.蜜蜂球囊菌几丁质酶纯化及酶学性质的研究[C].第九届亚洲养蜂大会论文摘要集.2008