潘险峰[1]2003年在《无滑膜肌腱在体滑膜化的实验研究》文中指出肌腱粘连与移植材料有关，尤其与肌腱表面有无滑膜及滑膜囊的完整性有关。滑膜肌腱在抗粘连方面明显优于无滑膜肌腱，但由于有滑膜肌腱结构的特殊性，取材对局部如腱鞘破坏较大，会造成新的残指（趾），其移植材料的来源受到临床应用的限制。受到在皮下埋置硅胶材料可在局部形成滑膜组织结构的启发，设计了无滑膜肌腱在体滑膜化动物实验研究。首先，在动物（兔）皮下手术埋置硅胶囊扩张器，经过不同时间充气和有规律的按摩刺激，使局部形成滑膜样包裹结构，从而构建人工皮下滑膜囊模型，通过大体观察、组织学结构、超微结构、免疫组化以及UDPGD功能性酶活性的检测、滑囊液HA浓度检测等指标，对滑膜囊结构和功能进行研究，探讨其形成的可能性。其次，取动物自体腓骨长肌肌腱段（无滑膜肌腱），游离放进已经形成的皮下滑囊腔内，进行肌腱组织的“在体培养”和滑膜化改造，对培养前后，肌腱组织结构和表面形态变化进行观察，判断肌腱是否被滑膜化。然后，将经过培养改造的滑膜化肌腱作为移植材料，进行屈指肌腱鞘内移植动物实验，观察其愈合情况，对移植肌腱抗粘连效果进行评估，并与未经滑膜化改造的无滑膜肌腱移植实验进行比较。另外，为了探讨肌腱滑膜化的细胞机制，本实验还对人胚肌腱细胞和滑膜细胞进行体外分离和培养，观察细胞生长情况，对培养细胞进行表型鉴定。然后以不同浓度的牛关节滑液，作用于人胚肌腱细胞，用BrdU掺入的方法标记S期细胞，观察肌腱细胞增殖情况，对细胞表达Ⅰ型胶原或CD68和VCAM-1的情况，进行免疫荧光检测，以判断细胞表型是否发生变化。实验结果如下：1. 动物皮下滑膜囊模型的构建将硅胶囊埋置动物皮下2周，取出硅胶囊的部位形成“滑膜囊”样的结构改变，囊腔内表面光滑，滑囊壁由大量胶原纤维和少量细胞构成内表面游离的膜状结构，囊壁细胞具有CD68和VCAM-1阳性以及UDPGD高活性反应的表现，提示这些细胞具有合成HA的旺盛功能。囊内有滑液样液体，清亮、透明、稍粘稠，经离心涂片检验，没有发现细胞成分。滑囊液中HA浓度高于血清水平，统计学相差显着。扫描电镜观察，囊壁内表面有微绒毛结构，透射电镜见囊壁表层细胞具有滑膜A、B型细胞的超微结构特点。2. 无滑膜肌腱在体滑膜化将无滑膜肌腱段在人工构建的皮下滑囊腔内“在体培养”1周，其肌腱外表面形成光滑的膜样结构。超微结构显示滑膜化肌腱表面光滑，无纤维裸露。膜上分布有微孔样<WP=10>结构，与肌腱深层相通。在滑膜化肌腱表层结构中，观察到具有滑膜A、B型细胞超微结构特点的巨噬样细胞和成纤维样细胞。细胞UDPGD酶活性高表达，并可见VCAM-1和CD68阳性细胞。3. 滑膜化肌腱鞘内移植动物实验。在人工构建的动物皮下滑囊腔内“在体培养”后，将完成滑膜化改造的滑膜化肌腱，与屈趾肌腱腱鞘内的有滑膜肌腱相移植，其移植材料与受区愈合良好，移植腱内部无坏死，肌腱吻合口处与腱鞘周围有轻微带状粘连，肌腱段本身同周围组织之间无粘连发生，粘连评分指数、肌腱平均滑动距离以及近节趾间关节（PIP）屈曲角度，均优于对照无滑膜肌腱组，P<0.01。4. 人胚腱细胞和滑膜细胞体外分离培养鉴定肌腱细胞和滑膜细胞在含有10%血清的DMEM培养液中贴壁生长，细胞呈梭形或多角型，外观类似成纤维细胞，两种细胞的分裂增殖速度，肌腱细胞较滑膜细胞缓慢；体外培养的肌腱细胞表达Ⅰ型胶原，原代培养滑膜细胞分别表达VCAM-1和CD68，随传代增加，CD68阳性细胞消失；滑膜细胞UDPGD呈阳性表达。培养的肌腱细胞和滑膜细胞符合体内细胞的表型特点。5. 滑液对培养人腱细胞的影响人肌腱细胞能够在滑液培养基中存活，并增殖，其生长速度普遍比在含血清的培养液中培养时要慢。在各种浓度的牛滑液培养液中，20%浓度组的肌腱细胞，其增殖速度相对最快，优于对照组。没有发现在滑液环境下培养的肌腱细胞UDPGD酶活性高表达以及VCAM-1、CD68阳性等细胞表型的改变。以上实验结果表明： ⑴皮下形成的滑囊腔，实现了人工皮下滑液囊构建的动物模型，囊表层细胞具有滑膜细胞的表型特征及分泌滑液样液体的功能，其功能结构类似关节滑囊腔。⑵无滑膜肌腱在皮下滑囊腔内不但能够存活，而且可被滑膜化。⑶经滑膜化改造的肌腱可明显减轻移植后粘连，有利于屈指（趾）功能恢复，其抗粘连效果明显优于对照组无滑膜肌腱。⑷肌腱细胞和滑膜细胞在体外分离培养，其细胞表型与体内同类细胞相同。⑸关节滑液可以提供肌腱细胞基本的代谢营养，并能使肌腱细胞分裂增殖，且不会造成细胞表型改变。单纯的滑液并不是改变滑膜化肌腱表层结构的决定性因素，肌腱滑膜化还有别的原因。
潘险峰, 张正治[2]2004年在《无滑膜肌腱在体滑膜化的实验研究》文中进行了进一步梳理肌腱缺损(tendon injury or tendon defect)在平、战时都很常见,自体肌腱移植,是补救肌腱缺损的首先。自体肌腱又分为有滑膜肌腱(intrasynovial tendon,IT)和无滑膜肌腱(extrasynovial tendon,ET),有滑膜肌腱的来源有限,临床多用掌长肌腱、指长伸肌腱、阔筋膜等无滑膜肌腱作替代移植,但存在移植肌腱与周围组织粘连问题。研究证实有滑膜肌腱在减少粘连方面,明显优于无滑膜肌腱。在移植前将无滑膜肌腱进行滑膜化(synovialization)改造具有重要的意义。许多实验表明,在无血供、完整的滑液腔内,肌腱段不仅能存活,而且在断端及表面形成光滑的结构。我们尝试在动物皮下建立滑囊腔,将无滑膜肌腱在滑囊腔内进行滑膜化改造,再以滑膜化肌腱替代移植,为临床寻找一种可行的肌腱移植材料。
张正治, 刘正津, 糜建红, 宋一平[3]1995年在《无滑膜肌腱滑膜化的实验研究及其意义》文中认为将家兔和胎儿的鞘外无滑膜肌腱段分别放入膝关节腔内进行在体肌腱培养和体外与滑膜细胞联合培养。结果显示：在体培养的肌腱段表面出现了光滑的，具有滑膜组织形态结构的特征，游离于关节腔内，无粘连发生；体外与滑膜细胞联合培养的胎儿肌腱段表面，被滑膜细胞爬行并覆盖。实验表明：无滑膜肌腱在滑液环境中可向有滑膜肌腱转化，并且可以通过体外培养进行滑膜化改造，使之滑膜化。
潘险峰, 张正治, 孙玮, 潘峰, 苟俊[4]2004年在《无滑膜肌腱在体滑膜化实验研究》文中指出目的 探讨无滑膜肌腱在皮下滑囊腔内滑膜化的可行性。方法 将兔腓长肌腱段放入预制的自体皮下滑囊腔进行在体培养 ,通过大体、组织学、超微结构以及免疫组化等观察 ,对无滑膜肌腱滑膜化改造情况进行研究。结果 无滑膜肌腱在人造皮下滑囊腔存活游离状态 ,呈其表面形成光滑的膜样结构 ,超微结构显示滑膜化肌腱表面光滑 ,有微孔样结构 ,表层细胞具有滑膜A、B型细胞的超微结构特点 ,免疫组化显示表达VCAM 1和CD68阳性 ,UDPGD酶高活性。结论 无滑膜肌腱在人造皮下滑囊腔内可被滑膜化改造
张正治, 刘正津, 糜建红[5]1995年在《无滑膜肌腱滑膜化的实验研究及其意义》文中认为无滑膜肌腱滑膜化的实验研究及其意义张正治，刘正津，糜建红第叁军医大学重庆６３００３８本实验将家兔的鞘外无滑膜肌腱段放入膝关节腔内进行在体肌腱培养，另将胎儿无滑膜肌腱段体外与滑膜细胞联合培养，培养的肌腱段经组织学切片，免疫组化染色，扫描电镜观察。结果显...
陈钢[6]2011年在《过表达synoviolin促进功能性滑膜形成的实验研究》文中进行了进一步梳理1.背景与目的肌腱损伤修复术后形成限制性粘连对手外科医生而言是一个巨大的挑战。目前，临床上通常使用无滑膜肌腱段作为移植材料修复屈肌腱缺损。但是，在愈合过程中通常都伴随有术后粘连的发生。这主要是由于无滑膜肌腱表面没有滑膜组织覆盖。滑膜在肌腱愈合与粘连防治中发挥着重要的作用。它通过阻止外源性成纤维细胞的过度增生以及腱周组织与肌腱的接触抑制了外源性愈合；滑膜分泌的滑液能促进肌腱滑动，减少摩擦，营养肌腱，增强肌腱的内源性愈合。如果能使易于取材的无滑膜肌腱表面形成滑膜组织，即无滑膜肌腱滑膜化，将对粘连防治起到巨大的作用。为此，我们一直在寻找简单有效地无滑膜肌腱滑膜化方法。2003年，日本科学家在类风湿性关节炎病人的滑膜细胞中发现了一种新基因synoviolin。它是一种E3泛素酶，含有RING-H2基序和六个跨膜结构域，主要定位在内质网上，它在内质网相关蛋白降解系统（ER-associated degradation）中发挥重要的作用。Synoviolin在风湿关节炎病人的滑膜细胞中表达增高，它通过抑制滑膜细胞凋亡使滑膜细胞过度生长和增殖。既然synoviolin能够使滑膜细胞增殖，而无滑膜肌腱滑膜化可以有效地防粘连，如果将过表达synoviolin的滑膜细胞包裹在无滑膜肌腱周围，将可能在肌腱表面形成一层滑膜，从而促进肌腱的愈合并减轻粘连的发生。本课题的目的就是明确synoviolin对滑膜细胞的增殖作用，探讨过表达synoviolin使无滑膜肌腱滑膜化的可行性及有效性，为无滑膜肌腱滑膜化抗粘连提供简单有效的方法。2.方法2.1synoviolin慢病毒表达载体的构建利用Gateway技术构建增强绿色荧光蛋白（EGFP）和synoviolin基因共表达的慢病毒表达载体，通过与包装质粒共转染293FT细胞，包装生产慢病毒，经超速离心浓缩收集病毒颗粒，采用转染293FT细胞的方法测定慢病毒功能滴度，为后续研究提供了高效的转基因平台。2.2synoviolin在滑膜细胞的表达及对其增殖、HA分泌的作用采用酶消化法分离纯化原代滑膜细胞，免疫组化染色对其进行鉴定。慢病毒感染滑膜细胞后，RT-PCR和Western Blot检测synoviolin mRNA和蛋白质表达水平。采用MTT法和流式细胞术检测synoviolin对滑膜细胞增殖的影响，ELISA技术检测过表达synoviolin后滑膜细胞分泌透明质酸的情况。2.3synoviolin促进功能性滑膜形成的作用手术分离取出兔的无滑膜肌腱段，将Lenti-synoviolin和Lenti-lacZ感染的滑膜细胞分别与肌腱共培养，体外进行无滑膜肌腱的滑膜化。HE染色和扫描电镜观察肌腱表面滑膜形成情况，切片细胞计数比较滑膜形成的速度，阿辛蓝染色法检测共培养形成的滑膜分泌透明质酸的情况。3.结果3.1synoviolin慢病毒表达载体的构建3.1.1PCR扩增获得含SalI和BamHI酶切位点的synoviolin目的基因片段；3.1.2将目的基因连接到pMD18-T载体中进行扩增；3.1.3经酶切、连接、转化等步骤后得到真核表达载体pIRES2-synoviolin-egfp；3.1.4双酶切获得synoviolin-egfp基因片段，将其克隆至pENTR1A的多克隆位点得到入门克隆pENTR1A-synoviolin-egfp；3.1.5利用Gateway技术的LR重组反应将synoviolin-egfp基因片段转入目的载体，获得慢病毒表达载体pLenti4/TO/V5-DEST-synoviolin-egfp；3.1.6将慢病毒表达载体与包装质粒共转染293FT细胞，包装获得慢病毒；3.1.7超速离心浓缩收集病毒颗粒，转染293FT细胞后通过荧光表达测定病毒滴度。Lenti-synoviolin的病毒滴度为1×108TU/mL。3.2synoviolin在滑膜细胞的表达及对其增殖、HA分泌功能的影响3.2.1滑膜细胞的形态及鉴定原代培养的滑膜细胞经HE染色，普通光镜下，细胞呈梭型或柱形，细胞核呈卵圆形位于细胞中央，核仁明显。免疫组化染色检测发现滑膜细胞对vimentin蛋白表达阳性，CD14、CD68蛋白表达阴性，说明该细胞来源于中胚层，并具有成纤维细胞的特点，是滑膜细胞B型细胞，即成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocyte，FLS)。3.2.2滑膜细胞转染Lenti-synoviolin后过表达synoviolin慢病毒感染滑膜细胞48h后，RT-PCR及Western blot检测发现，与对照组相比，Lenti-synoviolin感染滑膜细胞后synoviolin基因的mRNA和蛋白水平均有显着的增高。3.2.3过表达synoviolin促进滑膜细胞增殖并改变其细胞周期采用MTT法分析发现，与对照组相比，滑膜细胞转染synoviolin48h后增殖能力显着增强（P<0.01）。流式细胞术检测细胞周期发现，G1期细胞比例小于对照（P<0.05），S期细胞比例显着高于对照（P<0.01），细胞增殖指数高于对照（P<0.05），提示过表达synoviolin对滑膜细胞有促进增殖的作用。3.2.4过表达synoviolin促进滑膜细胞HA分泌增加为了检测synoviolin对滑膜细胞HA分泌能力的影响，我们使用兔透明质酸ELISA试剂盒对感染Lenti-synoviolin的滑膜细胞进行了检测。结果发现，病毒感染滑膜细胞后，细胞上清HA含量均有显着升高，其中24h和48h（P<0.05），72h（P<0.01）。提示过表达synoviolin有促进滑膜细胞分泌HA的作用。3.3synoviolin促进功能性滑膜形成的作用3.3.1过表达synoviolin促进滑膜的形成滑膜细胞感染Lenti-synoviolin或Lenti-lacZ后，分别与无滑膜肌腱体外共培养3天和7天后，HE染色和扫描电镜观察到肌腱表面可见细胞附着生长并形成细胞层。通过对肌腱表面的细胞计数，结果显示，过表达synoviolin组肌腱表面滑膜细胞数量明显高于对照组，提示过表达synoviolin能加速滑膜的形成3.3.2共培养肌腱具有分泌HA的功能滑膜细胞与无滑膜肌腱共培养3天后阿辛蓝染色观察发现，Lenti-synoviolin和Lenti-lacZ组在0.06M MgCl2浓度时染色均呈阳性，而在MgCl2浓度为1,2.61,3.56时，两组染色均呈阴性。这个现象说明肌腱表面有细胞合成的酸性粘多糖（透明质酸）存在，提示共培养肌腱具有分泌HA的功能。4.结论4.1过表达synoviolin促进滑膜细胞的增殖；4.2过表达synoviolin促进滑膜细胞透明质酸的分泌；4.3过表达synoviolin促进功能性滑膜的形成。
康庆林[7]1998年在《肌腱组织及细胞培养研究进展》文中进行了进一步梳理肌腱组织及细胞培养研究进展康庆林①②综述蒋祖言①王爱民①审校肌腱损伤或移植后几乎不可避免发生粘连，是手外科的一大难题。研究表明肌腱愈合存在内在愈合和外在愈合两种方式，其中外在愈合是粘连发生的病理基础。因此，如何最大限度诱导和激发肌腱组织和细胞的内在愈...
潘险峰, 张正治, 苟俊, 程昌志, 白贵友[8]2004年在《皮下滑膜囊动物模型的建立及其生物学特性实验研究》文中提出目的 建立动物皮下滑液囊模型 ,研究其功能结构特点 ,探讨形成的可能机制。方法 在兔皮下埋置硅胶气囊 ,经扩张按摩刺激 ,逐渐形成包裹囊腔 ,通过对大体形态、组织学和超微结构、细胞表型、UDPGD功能性酶以及滑囊液HA浓度的研究 ,与正常滑膜囊比较。结果 术后 2周时 ,皮下形成“滑囊腔”结构 ,肉眼见囊腔内表面光滑 ,扫描电镜见囊壁内表面有微绒毛结构 ,囊壁表层有A、B型细胞的超微结构特征 ;细胞分别表达CD68、VCAM 1和UDPGDmRNA ,囊壁表层UDPGD酶活性高于深部 (P <0 .0 1) ;囊内液体清亮透明 ,未发现细胞成分 ,透明质酸近似浓度 160ng ml,高于血清水平 (P<0 .0 1)而接近关节滑液 (P >0 .0 5 )。结论 皮下形成的滑囊腔模型 ,其功能结构在一定程度上类似关节滑囊腔 ,囊壁表层细胞具有滑膜细胞的表型特征。
宋晖[9]2003年在《屈肌腱损伤的愈合与粘连预防》文中研究说明手部屈肌腱损伤的治疗是手外科的一大难题。肌腱术后粘连常影响到肌腱修复的质量与手指的功能。如何正确修复损伤的肌腱及术后护理 ,已经进行了大量的基础理论与临床实践研究。现就肌腱的血运、滑液、愈合与营养、粘连与预防等综述如下。1 肌腱的血运[1]肌腱有血液供应
常菁[10]2008年在《可吸收壳聚糖复合膜的制备及预防肌腱粘连功能的实验研究》文中指出目的:在手外科领域中,肌腱粘连是肌腱损伤后常见的并发症,其防治一直是外科学界普遍关注的问题。肌腱粘连是指肌腱损伤修复过程中周围组织的增生和侵入,一定的粘连有利于断端获得血管输送血液的营养,同时还可促使成纤维细胞接触肌腱而发挥修复作用。但粘连过多会使修复后的肌腱功能受到限制,严重影响手部的各种运动功能,往往需要通过手术来松解粘连的肌腱,改善肌腱的滑动功能。精细的手术操作和早期的功能锻炼虽可减轻肌腱粘连的程度,但仍不能完全防止粘连的形成,因此,防止粘连是手外科领域至今尚未能解决的难题。由于肌腱的愈合需要有滑液的营养,因此单纯的物理阻隔会影响肌腱的愈合,这就需要找到一种既不影响肌腱愈合,又能阻止其与周围组织粘连的适合材料。壳聚糖是自然界唯一带正电荷多糖,其特有的理化性质已成为医药界及生物医学领域的研究热点。研究证明,壳聚糖具有良好的成胶成膜性、生物可降解性、降解速度可控性,在医用材料领域应用前景广阔。本实验研究旨在制备一种可预防粘连的壳聚糖复合膜,并对其功能、作用机理及应用前景进行探讨。方法:1、实验所需壳聚糖及其衍生物等原料的制备、纯化和性质评价。2、确定复合膜各组分比例,以1,4丁二醇双缩水甘油醚为交联剂,流延法制备羧甲基壳聚糖、N-乙酰化壳聚糖、羟丙基壳聚糖复合膜(CM-C-HP复合膜),运用扫描电镜、红外光谱、细胞培养、体内植入等方法对复合膜的理化性质、生物相容性、生物降解性进行系统评价。3、以鸡为实验模型,切除趾浅屈肌腱,横断趾深屈肌腱,形成趾深屈肌腱断裂动物模型。设置实验组、阳性对照组、阴性对照组和正常对照组,运用生物力学测试、组织学检测、彩超声像图等方法对复合膜预防肌腱粘连作用进行评价。4、利用MTT、透射电镜、凝胶电泳、流式细胞仪等测定方法研究羧甲基壳聚糖和羟丙基壳聚糖共混糖溶液对L929成纤维细胞生长的影响,从复合膜抑制成纤维细胞生长的角度探讨复合膜预防肌腱粘连的机理。结果:1、制备出的材料样品符合医用材料要求,无菌无热原,生物相容性好,生物降解性可控。综合评价各材料多方面性质,选择乙酰化壳聚糖、羧甲基壳聚糖和羟丙基壳聚糖作为制备复合膜的基本原料。2、CM-C-HP复合膜具有良好的柔韧度、机械强度、通透性,无溶血现象,无细胞毒性和全身急性毒性,对L929成纤维细胞生长有明显抑制作用,体内植入实验显示了良好的生物相容性和生物可降解性,具有比壳聚糖更为优良的手术缝合可操作性。3、在以鸡为肌腱断裂模型的预防粘连实验中,CM-C-HP复合膜组肌腱吻合口周围的粘连带、肉芽组织、胶原纤维及成纤维细胞均明显少聚乳酸薄膜组,肌腱活动度生物力学测试结果明显优于阴性对照组,说明CM-C-HP复合膜具有良好的防粘连作用。4、L929细胞经不同浓度羧甲基壳聚糖和羟丙基壳聚糖共混糖溶液培养24h、48h和96h后,测定MTT、透射电镜、凝胶电泳、细胞周期等指标,结果表明共混糖溶液对成纤维细胞生长有明显抑制作用,细胞周期发生中断,细胞被阻滞于G0-G1期。该部分内容提示复合膜通过抑制成纤维细胞生长来预防肌腱粘连,从细胞和分子水平初步探讨了复合膜预防肌腱粘连的机理。结论:本研究中的CM-C-HP复合膜作为预防粘连的生物膜材料,柔软光滑,机械强度高,具有良好的通透性、生物相容性、生物可降解性、降解速度可控性及手术缝合可操作性,预防粘连作用显着,效果优于聚乳酸薄膜产品,而且取材方便,价格低廉,是一种具有广阔应用前景的预防粘连复合膜。
参考文献：
[1]. 无滑膜肌腱在体滑膜化的实验研究[D]. 潘险峰. 第叁军医大学. 2003
[2]. 无滑膜肌腱在体滑膜化的实验研究[C]. 潘险峰, 张正治. 中国康复医学会修复重建外科专业委员会第十四次全国学术交流会论文集. 2004
[3]. 无滑膜肌腱滑膜化的实验研究及其意义[J]. 张正治, 刘正津, 糜建红, 宋一平. 第叁军医大学学报. 1995
[4]. 无滑膜肌腱在体滑膜化实验研究[J]. 潘险峰, 张正治, 孙玮, 潘峰, 苟俊. 第叁军医大学学报. 2004
[5]. 无滑膜肌腱滑膜化的实验研究及其意义[J]. 张正治, 刘正津, 糜建红. 四川解剖学杂志. 1995
[6]. 过表达synoviolin促进功能性滑膜形成的实验研究[D]. 陈钢. 第叁军医大学. 2011
[7]. 肌腱组织及细胞培养研究进展[J]. 康庆林. 中国临床解剖学杂志. 1998
[8]. 皮下滑膜囊动物模型的建立及其生物学特性实验研究[J]. 潘险峰, 张正治, 苟俊, 程昌志, 白贵友. 第叁军医大学学报. 2004
[9]. 屈肌腱损伤的愈合与粘连预防[J]. 宋晖. 医学综述. 2003
[10]. 可吸收壳聚糖复合膜的制备及预防肌腱粘连功能的实验研究[D]. 常菁. 中国海洋大学. 2008