导读:本文包含了瘤胃上皮论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:瘤胃,聚糖,上皮细胞,酸中毒,绵羊,甘露,脂肪酸。
瘤胃上皮论文文献综述
金鑫,张曼,杨银凤[1]（2019）在《酿酒酵母甘露聚糖诱导绵羊瘤胃上皮细胞SBD-1表达的信号通路研究》一文中研究指出β-防御素是机体的内源性抗菌肽。酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)甘露聚糖能够诱导绵羊(Ovis aries)瘤胃上皮细胞(ruminal epithelial cells, RECs)β-防御素-1 (sheepβ-defensin-1, SBD-1)的表达,但是诱导机制尚不明确,限制了甘露聚糖制剂的开发利用。为了探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogenactivated protein kinase, MAPK)信号传导通路(p38, ERK1/2, JNK)和核因子κB (nuclear factorκB, NF-κB)通路是否参与甘露聚糖诱导绵羊RECs SBD-1的表达,首先利用qPCR和Western blot方法检测甘露聚糖对p38、ERK1/2、JNK和NF-κB表达的影响;然后用甘露聚糖分别刺激RECs 5、15、30、45和60 min后,通过Western blot检测p38、ERK1/2、JNK、IκB和p65的磷酸化水平;最后采用qPCR和ELISA方法检测p38、ERK1/2、JNK和NF-κB的特异性抑制剂对甘露聚糖诱导SBD-1表达的影响。结果显示,甘露聚糖刺激使RECs中p38、ERK1/2、JNK和NF-κB的m RNA水平以及p38、JNK、ERK1/2、IκB和p65的磷酸化水平均显着提高(P<0.01);同时,甘露聚糖刺激RECs不同时间可以使p38、ERK1/2、JNK、IκB和p65发生磷酸化;此外,p38、ERK1/2、JNK和NF-κB的抑制剂均能极显着降低甘露聚糖诱导SBD-1的表达(P<0.01),且p38抑制剂的抑制效果最明显。上述结果提示,酿酒酵母甘露聚糖诱导绵羊RECs SBD-1表达的过程可能由p38、ERK1/2、JNK和NF-κB信号通路共同调节,并且p38信号通路可能发挥更主要的作用。该研究探讨了甘露聚糖诱导防御素表达的机理,为解释甘露聚糖促免疫功能提供了新线索,也为更好地开发和利用甘露聚糖制剂提供了参考依据。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2019年06期）
张曼[2]（2019）在《酿酒酵母β-葡聚糖对绵羊瘤胃上皮细胞和外植体内β-防御素-1表达影响的研究》一文中研究指出绵羊瘤胃作为反刍动物的第一个胃,经常会受到各种病原微生物的挑战。绵羊瘤胃黏膜上皮在先天性免疫中发挥重要作用,并可以分泌一系列先天免疫分子来防止微生物的侵袭。防御素是一种由黏膜上皮产生并具有广谱抗微生物活性的阳离子肽,被认为是抗生素的潜在替代品。本课题组先前的研究表明酿酒酵母全细胞壁能够上调绵羊瘤胃上皮细胞(Ovine ruminal epithelial cells,ORECs)内 β-防御素-1(Sheepβ-defensin-1,SBD-1)的表达,为了进一步确定酿酒酵母细胞壁诱导SBD-1表达的有效成分,本研究选用来源于酿酒酵母细胞壁的β-葡聚糖刺激ORECs以观察其对SBD-1表达的影响,并进一步研究此诱导过程可能涉及的信号通路。外植体培养具有在受控环境中保留与体内相似的组织学特征等特点,因此外植体培养相对于细胞而言更接近于体内环境。本研究探索了绵羊瘤胃外植体(Ovine ruminal explants,OREs)培养的可行性和最佳条件,并在此基础上研究β-葡聚糖对OREs内抗菌肽SBD-1、促炎细胞因子IL-6和抗炎细胞因子IL-10表达的影响。具体研究内容及结果如下:(1)用不同浓度(0、5、10、20、50和100 μg/mL)的β-葡聚糖刺激ORECs 8 h后,利用qPCR和ELISA方法检测SBD-1的表达变化,从而筛选出诱导SBD-1表达最佳的β-葡聚糖浓度,而后用此浓度刺激ORECs不同时间(0、2、4、8、12和24 h),同样采用qPCR和ELISA方法筛选出诱导SBD-1表达的最佳时间。结果显示:10μg/mL的β-葡聚糖分别刺激ORECs 2和4 h时SBD-1 mRNA和蛋白表达最大。(2)采用Western blot、RT-PCR、免疫组化、免疫荧光、qPCR和ELISA方法检测β-葡聚糖诱导SBD-1表达上调的信号通路。结果表明树突状细胞相关C型凝集素 1(Dendritic-cell-associated C-type lectin 1,Dectin-1)和脾脏酪氨酸激酶(Spleen tyrosine kinase,Syk)在绵羊瘤胃黏膜组织及ORECs内表达,并且用siRNAs干扰或抑制剂抑制Dectin-1、Syk、TLR-2和MyD88表达后减弱了β-葡聚糖诱导的SBD-1表达。用β-葡聚糖处理ORECs导致p38、JNK、ERK1/2和NF-κB表达显着增加,而用抑制剂抑制MAPK和NF-κB途径显着降低了 β-葡聚糖诱导SBD-1的表达,且NF-κB抑制剂效果最明显。(3)培养OREs,并采用H.E染色、qPCR和免疫组化等方法检测OREs的组织结构完整性及细胞活性。H.E染色结果显示:不添加血清的培养基内OREs组织结构更完整。qPCR和免疫组化结果显示:培养24 h以内的OREs E-cadherin的表达与未培养的组织差异不显着,且存在CK-18和Ki-67的阳性信号。(4)将OREs与不同浓度(0、10、50、100、200和400 μg/mL)的β-葡聚糖共培养8 h后,采用qPCR和ELISA方法检测SBD-1、IL-6和IL-10的表达变化,从而筛选出诱导SBD-1、IL-6和IL-10表达最佳的β-葡聚糖浓度,而后用此浓度刺激ORECs不同时间(0、2、4、8、12和24 h)后,同样采用qPCR和ELISA方法筛选出诱导SBD-1、IL-6和IL-10表达的最佳时间。结果显示:50 μg/mL的β-葡聚糖分别刺激OREs 2、8 和 12 h 时 SBD-1、IL-6 和 IL-10 的 mRNA 表达最高,100 pg/mL 的 β-葡聚糖刺激OREs 8 h时SBD-1蛋白表达达到峰值,而分别用50和200 μg/mL刺激OREs 12 h时IL-6和IL-10蛋白表达达到最大。本研究结果表明β-葡聚糖能够提高ORECs内SBD-1的表达,且该过程由Dectin-1-Syk/TLR-2-MyD88-MAPK/NF-κB信号通路共同介导产生,但可能主要通过Dectin-1-Syk/TLR-2-MyD88-NF-κB信号通路。此外,本研究还确定了 OREs体外培养的可行性和最佳条件,并证明β-葡聚糖可以激活OREs中SBD-1、IL-6和IL-10的分泌。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2019-06-01）
金鑫[3]（2019）在《酿酒酵母甘露聚糖对绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1表达影响及其信号通路研究》一文中研究指出绵羊瘤胃上皮作为与环境接触的免疫界面,能够分泌具有针对各种病原体的抗微生物肽(Antimicrobial peptides,AMPs)。防御素作为机体内正常产生的AMPs,具有广谱的抗微生物活性,而绵羊β-防御素-1(Sheep β-defensin-1,SBD-1)作为防御素家族的一员,在整个胃肠道内广泛表达,因此SBD-1可能在绵羊胃肠道先天性免疫中发挥着重要作用。本课题组前期的研究表明酿酒酵母菌及其全细胞壁均能诱导绵羊瘤胃上皮细胞(Ovine ruminal epithelial cells,ORECs)内SBD-1的表达,而甘露聚糖作为酿酒酵母细胞壁的主要成分,具有刺激先天性和适应性免疫反应功能。因此,本试验首先对ORECs的培养、冻存和复苏方法进行研究,然后研究了酿酒酵母甘露聚糖对ORECs SBD-1的表达影响,最后对甘露聚糖诱导SBD-1表达所激活的信号通路进行探索。具体研究内容及结果如下:(1)采用胰蛋白酶连续消化法对瘤胃组织分别进行7次不同时间(40、30、20、10、10、8和5 min)的消化,并对每次消化后的瘤胃组织和细胞进行观察,以确定消化程度。结果发现第4次消化后即可开始收集细胞,并进行原代培养。同时运用差时消化法和差速贴壁法对培养的细胞进行纯化,并利用免疫组化、免疫荧光、细胞生长曲线和RT-PCR方法证实所培养的细胞为ORECs。然后通过检测复苏后的细胞活力和24 h贴壁率发现冻存液的配制比例为VFBS:VDMEM:VDMSO=9:0:1时,冷冻保护效果较好。最后对复苏后的ORECs生物学活性进行检测,结果表明复苏后的细胞同样具有原代ORECs的生物学特性,可用于后续试验研究。(2)用不同浓度(0、10、50、100、200和400 μg/mL)的甘露聚糖刺激ORECs 8 h后,筛选出甘露聚糖诱导SBD-1表达的最佳浓度;然后用最适浓度的甘露聚糖刺激ORECs不同时间(0、2、4、8、12和24 h)后,筛选出甘露聚糖诱导SBD-1表达的最佳时间。qPCR和ELISA结果均显示甘露聚糖能够诱导ORECs SBD-1的表达,且当浓度为50 μg/mL的甘露聚糖刺激ORECs4h时SBD-1的表达量达到最大。(3)采用Western blot、RT-PCR、免疫组化、免疫荧光、qPCR和ELISA方法对甘露聚糖诱导SBD-1表达所激活的信号通路进行研究。结果表明:膜受体树突状细胞相关 C 型凝集素 2(Dendritic-cell-associated C-type lectin 2,Dectin-2)和信号衔接蛋白脾脏酪氨酸激酶(Spleen tyrosine kinase,Syk)在ORECs内均表达,并且用Dectin-2和TLR-2的siRNA或特异性封闭抗体处理ORECs后均可以减弱甘露聚糖诱导SBD-1的表达,且阻断Dectin-2对SBD-1表达的抑制作用更明显。然后用Syk siRNA或Syk特异性抑制剂R406处理细胞后同样发现阻断Syk能够降低甘露聚糖诱导SBD-1的表达。最后分别用p38、JNK、ERK1/2和NF-κB信号通路的特异性抑制剂处理ORECs后均显着降低甘露聚糖诱导SBD-1的表达,且p38通路抑制剂效果最明显。本研究通过消化时间的确定,成功培养出了 ORECs。冻存液的配制比例为VFBS:VDMEM:VDMSO=9:0:1时,对ORECs的冷冻保护效果较好,且复苏后的细胞同样具有原代ORECs的生物学特性。此外,甘露聚糖能够诱导ORECs SBD-1的表达,且膜受体Dectin-2和TLR-2,信号衔接蛋白Syk以及下游的信号通路p38、JNK、ERK1/2和NF-κB均参与甘露聚糖诱导SBD-1的表达过程,但可能以Dectin-2-Syk-p38信号通路为主要的信号通路。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2019-06-01）
赵晨旭[4]（2019）在《SARA奶牛瘤胃炎性反应发生机制及瘤胃上皮SLC22A转运蛋白的变化》一文中研究指出亚急性瘤胃酸中毒(Subacute ruminal acidosis,SARA)是一种易发生于高产奶牛牛群的代谢性疾病。其主要原因是生产过程中过度饲喂精饲料,瘤胃内碳水化合物大量发酵,致使瘤胃内短链脂肪酸(short-chain fatty acid,SCFA)蓄积。SCFA在瘤胃内的浓度过高,会使瘤胃pH降低,当pH低于5.6且每天持续时间在3 h以上即可认定为SARA。瘤胃长时间处于酸性环境,革兰氏阴性菌溶解破裂,释放出其菌壁成分脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)。同时,一些瘤胃细菌在酸性环境下使组氨酸脱羧生成组胺。LPS和组胺都可引起瘤胃炎症发生,损伤瘤胃上皮组织。当上皮损伤达到一定程度时,LPS和组胺可以易位进入血液,引起其它部位炎症如蹄叶炎和肝脓肿等,有时甚至是全身性炎症反应。而SCFA在瘤胃内蓄积的原因主要是生成增多和/或吸收障碍,但目前还不清楚瘤胃SCFA吸收障碍的原因和机制。新近研究发现溶质载体家族SLC22A(solute carrier family)转运蛋白,它的亚族有机阴离子转运载体OATs(Organic anion transporters)是丙酸和丁酸进入肝细胞的摄取通路,具有转运SCFA的作用。而另一亚族新型有机阳离子转运载体OCTNs(organic cation/carnitine transporter),转运体内多种内源性和外源性阳离子和两性离子,如肉毒碱、胆碱和麦角硫因等物质,它们都具有抗炎抗氧化作用。但是SLC22A转运蛋白在反刍动物瘤胃上皮的相关研究却鲜有报道。所以探究奶牛SARA时瘤胃炎症的发生机制和瘤胃上皮SLC22A蛋白表达变化,阐明SARA瘤胃代谢异常、上皮炎性损伤和SCFA吸收障碍之间的内在联系,对于解释奶牛SARA的发生机理和防治具有重要的意义。本实验首先检测了SARA奶牛瘤胃液中SCFA各组分(主要包括乙酸、丙酸和丁酸)、LPS、组胺和乳酸等浓度,发现均显着高于健康奶牛。而后检测了SARA奶牛血液中组胺、LPS、急性期反应蛋白,包括内毒素结合蛋白(Lipopolysaccharide binding protein,LBP)、触珠蛋白(haptoglobin,HP)和血清淀粉样蛋白A(Serum amyloid A,SAA),细胞因子包括肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白细胞介素(interleukin,IL)-6和白细胞介素(interleukin,IL)-1β等指标,各项指标水平均明显高于健康奶牛,提示SARA奶牛出现严重的炎症反应。通过Western blot和荧光定量PCR检测了SARA奶牛瘤胃上皮炎症信号通路核内转录因子(nuclear factor-kappaB,NF-κB)和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)关键蛋白和细胞因子表达变化。实验结果表明SARA奶牛的瘤胃上皮细胞NF-κB和MAPK炎症通路均被激活,通路关键蛋白IκBα、NF-κB p65、JNK和ERK1/2磷酸化水平均明显升高,且细胞因子TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA和蛋白表达均明显高于健康奶牛,进一步证明了SARA奶牛瘤胃炎症的发生。体外实验通过分离培养奶牛瘤胃上皮细胞,通过不同时间点(0、1、3、6、9、18 h)确定最佳刺激时间后,添加不同浓度LPS(0、1、5、10μg/ml)和组胺(0、20、40、60μM)模拟体内健康和SARA的状态,然后通过Western blot检测MAPK和NF-κB炎症通路关键蛋白磷酸化水平,免疫荧光观察p65入核情况,荧光定量PCR和ELISA检测细胞因子的表达变化。实验结果表明,LPS和组胺在刺激瘤胃上皮细胞6-9h时,炎症信号通路NF-κB和MAPK关键蛋白磷酸化水平明显升高,且呈现剂量依赖性升高,NF-κB p65入核明显增多,诱导炎性因子靶基因转录。细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量和mRNA表达量显着提升,诱导炎症发生。另一方面,体内实验采用Western blot和免疫组化方法检测了SLC22A家族关键成员(OAT2、OAT7、OCTN1和OCTN2)在瘤胃上皮的表达和分布,结果表明它们在奶牛瘤胃四个囊腔的上皮中均有表达。SARA奶牛瘤胃上皮转运蛋白OAT2和OAT7表达受到了抑制,OCTN2表达略有下降。说明SARA奶牛瘤胃中SCFA的吸收转运受到影响,肉毒碱和麦角硫因等有益物质的转运也发生障碍。体外实验通过不同浓度的SCFA各组分、LPS、组胺和低pH环境模拟SARA时瘤胃内各因素变化对SLC22A转运蛋白的影响。结果表明,正常生理浓度的乙酸、丙酸和丁酸刺激,对转运蛋白OAT2、OAT7、OCTN1和OCTN2的表达均有促进作用,而高浓度SCFA和低pH环境对蛋白表达抑制;LPS和组胺作用抑制OAT2和OAT7的表达,而组胺促进OCTN1和OCTN2的蛋白表达。综上所述,SARA奶牛瘤胃内高浓度的LPS和组胺,可以激活MAPK和NF-κB炎症信号通路,刺激下游靶基因转录释放促炎细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6,进一步诱导炎症的发生。而瘤胃上皮转运蛋白OAT2、OAT7和OCTN2表达受到抑制,加剧SARA。(本文来源于《吉林大学》期刊2019-06-01）
李洋[5]（2019）在《亚急性瘤胃酸中毒对奶山羊瘤胃上皮挥发性脂肪酸吸收的影响及其机制研究》一文中研究指出瘤胃发酵产生的挥发性脂肪酸(Volatile Fatty Acid,VFA)约50%～85%是直接被瘤胃上皮吸收、转运和代谢,对机体能量平衡调控起到了关键性作用。然而目前关于亚急性瘤胃酸中毒(Subacute Ruminal Acidosis,SARA)对瘤胃上皮VFA吸收的影响还尚不清楚。本研究以奶山羊为动物模型,采用瘤胃灌注技术和分子生物学技术研究SARA对瘤胃上皮乙酸、丙酸、丁酸的吸收率及其吸收代谢相关基因表达的影响,以期探索SARA对瘤胃上皮VFA吸收和代谢的影响机制。1.SARA对瘤胃上皮VFA吸收率的影响本试验采用完全随机设计,选取12只3岁左右、体重为62.13±4.76kg处于泌乳期的经产萨能奶山羊随机分成两组,即对照组(n=6)和SARA组(n=6)。对照组饲喂NFC/NDF=1.15日粮,SARA组依次饲喂NFC/NDF分别为1.15、1.49、2.12和2.66四种日粮。其中每种日粮饲喂15 d,以诱导奶山羊发生SARA。选取6只试验动物(对照组,n=3;SARA组,n=3)采用连续饲喂建立瘤胃相对稳态,通过乙酸、丙酸和丁酸启动-连续灌注,研究SARA对瘤胃上皮VFA产生速率、流通速率以及吸收速率的影响。结果显示:(1)与对照组相比,SARA组瘤胃pH值低于5.5持续时间达4.71 h/d。SARA组瘤胃液乙酸浓度和A/P显着下降(P<0.05),丙酸、丁酸和TVFA浓度显着升高(P<0.05);(2)SARA组乙酸产生速率和流通速率明显下降且吸收速率显着升高(P<0.05),丙酸和丁酸的产生速率、流通速率和吸收速率均明显升高(P<0.05),乙酸和丙酸的吸收率呈上升趋势(P>0.05),只有丁酸的吸收率显着提高(P<0.05)。这些结果表明:SARA改变瘤胃上皮对VFA产生速率、流通速率以及吸收率。2.SARA对瘤胃上皮VFA吸收代谢相关基因mRNA表达的影响试验动物及试验日粮同试验一。选取其余6只试验动物(对照组,n=3;SARA组,n=3)进行屠宰,采集瘤胃腹囊上皮组织采用实时定量PCR技术测定瘤胃上皮细胞VFA吸收和代谢相关基因mRNA表达量。结果显示:SARA组瘤胃上皮细胞VFA吸收相关基因MCT-1、NHE1、NHE3和DRA的mRNA表达量显着增加(P<0.05),瘤胃上皮细胞VFA代谢相关基因ACSS1和ACSS3的mRNA表达量显着降低(P<0.05),ACSS2、HMGCS1、HMGCS2 和 HMGCR 的 mRNA表达量则显着升高(P<0.05)。这些结果表明:SARA影响瘤胃上皮VFA吸收代谢相关基因mRNA表达。3.SARA对瘤胃上皮VFA吸收代谢相关基因蛋白表达量的影响试验动物、试验日粮及试验设计同试验二。采用Western blot技术检测瘤胃上皮细胞VFA吸收和代谢相关基因的蛋白表达量。结果显示:SARA组瘤胃上皮细胞VFA吸收基因NHE1、NHE3、NHE4、MCT-2、AE2和ATP1A1的蛋白表达量显着升高(P<0.05),同时VFA代谢基因ACSS2、ACSS3、HMGCL和ACAT1的蛋白表达量也显着升高(P<0.05)。这些结果表明:SARA影响瘤胃上皮VFA吸收代谢相关基因蛋白表达。上述结果表明:SARA使乙酸产生速率和流通速率明显下降而丙酸和丁酸反之,乙酸、丙酸和丁酸的吸收速率均明显升高,乙酸和丙酸的吸收率呈上升趋势,只有丁酸的吸收率显着提高,其机制与瘤胃pH值、瘤胃上皮细胞VFA吸收代谢相关基因mRNA以及蛋白表达最变化密切相关。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2019-06-01）
王梦雅[6]（2019）在《亚急性瘤胃酸中毒对奶山羊肠道上皮屏障功能的影响及其转录组学研究》一文中研究指出亚急性瘤胃酸中毒(Subacute rumen acidosis,SARA)是现代反刍动物集约化养殖中常见的一类营养代谢病,在国际上备受学者关注。前期该领域的研究工作仅限于SARA对反刍动物瘤胃上皮的影响,然而对其肠道上皮屏障功能影响的报道较为罕见。为此,本论文将从组织、分子以及组学层面系统研究SARA对奶山羊肠道上皮屏障功能的损伤及其可能调控机制。1.SARA对奶山羊肠道上皮形态结构的影响本试验选用12只体况良好、体重相近(62.13±4.76kg)、安装有永久性瘤胃瘘管的泌乳奶山羊,随机分成两组,即对照组(n=6)和SARA组(n=6)。对照组饲喂NFC/NDF为1.15的基础日粮,SARA组依次饲喂NFC/NDF为1.15、1.49、2.12和2.66的4种试验日粮诱导奶山羊发生SARA,每种日粮持续饲喂15 d,为期60 d,在每种日粮饲喂结束前3 d采用pH酸度计对瘤胃pH值进行连续监测,以此作为判定SARA发生的依据,当一天内瘤胃pH值在5.2～5.5持续时间长达3 h以上即视为SARA模型建立成功。在此基础上,分别选取对照组及SARA组各3只奶山羊禁食12 h后进行屠宰,采集十二指肠、空肠、盲肠和结肠各段中间部位上皮组织,利用光学显微镜和透射电镜技术,对肠道上皮形态结构、细胞间超微结构进行观察。结果表明:(1)SARA显着提高了奶山羊十二指肠和空肠的绒毛高度、隐窝深度(P<0.05),黏膜厚度在空肠中显着升高(P<0.05),在十二指肠中升高但无显着性差异(P>0.05);SARA降低了十二指肠(P>0.05)和空肠(P<0.05)的绒毛高度/隐窝深度比值,同时使盲肠和结肠上皮表面出现严重的细胞凹陷及隐窝坏死。(2)SARA使奶山羊十二指肠、空肠和结肠上皮细胞间紧密连接的电子密度降低,细胞间隙增大,线粒体肿胀,部分线粒体脊断裂或消失。以上结果表明:SARA破坏了肠道上皮的形态结构,使其完整性受损。2.SARA对奶山羊肠道上皮通透性的影响试验设计、试验动物及日粮均与试验一相同。利用Ussing chamber系统测定肠道上皮组织电生理参数和异硫氰酸荧光素-葡聚糖4(FD4)流速,并对血浆LPS、D-乳酸含量及DAO活性进行检测,以此来反映SARA对奶山羊肠道上皮通透性的影响。结果表明:(1)SARA组奶山羊十二指肠、空肠和结肠上皮的Isc、Gt和FD4流速显着高于对照组(P<0.05),其PD显着低于对照组(P<0.05)。(2)与对照组相比,SARA组奶山羊血浆LPS、D-乳酸含量及DAO活性均显着升高(P<0.05)。以上结果表明:发生SARA的奶山羊,其肠道上皮通透性显着增加。3.SARA对奶山羊肠道上皮细胞间紧密连接蛋白表达的影响试验设计、试验动物及日粮均与试验一相同。本试验分别采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、免疫组化SP法及免疫印迹技术(Western-Blot)检测肠道上皮Claudin-1、Claudin-4、Claudin-7、Occludin 及 ZO-1 基因的 mRNA 表达水平和蛋白表达水平的变化,以期从分子水平揭示SARA对奶山羊肠道上皮屏障功能的损伤机制。结果显示:SARA显着上调了十二指肠上皮Claudin-1、Claudin-4、Claudin-7及ZO-1的mRNA表达水平和蛋白表达水平(P<0.05),上调了 Occludin的mRNA表达水平(P<0.05)和蛋白表达水平(P>0.05);同时显着上调了空肠上皮Claudin-4、Claudin-7、Occludin及ZO-1的mRNA表达水平和蛋白表达水平(P<0.05),下调了 Claudin-1的mRNA表达水平和蛋白表达水平,但无显着性差异(P>0.05);也上调了结肠上皮 Claudin-1(P<0.05)、Claudin-4(P>0.05)及 Occludin(P<0.05)的mRNA表达水平和蛋白表达水平,下调了Claudin-7(P>0.05)和ZO-1(P>0.05)的mRNA表达水平和蛋白表达水平。以上结果表明:SARA改变了肠道上皮紧密连接基因的mRNA表达水平和蛋白表达水平,且在不同肠段的表达水平有所不同。4.SARA对奶山羊十二指肠组织的转录组学分析本试验利用RNA-seq技术对奶山羊十二指肠组织进行转录组测序。结果表明:对照组和SARA组经过滤共获得30 GB的Clean reads。样本匹配到基因组的总基因数为26 724个,其中只在对照组表达的基因有273个,只在SARA组表达的基因有473个,在两个处理组中均表达的基因有12 989个。采用edgeR软件对基因表达量做差异表达分析,以显着水平P<0.05及|log2FC| ≥ 1为标准筛选差异表达基因(DEGs),结果共获得495个DEGs,其中有177个基因表达上调,318个基因表达下调。将筛选得到的DEGs进行GO功能注释和KEGG pathway富集分析,结果显示,这些上调基因主要与细胞凋亡、炎症反应、白细胞迁移等功能相关,而下调的基因主要与离子转运、脂肪酸代谢、脂质转运(代谢)、有机酸转运(代谢)等功能相关,并且这些DEGs主要富集到紧密连接信号通路、趋化因子信号通路和钙离子等信号通路上。上述结果表明:SARA破坏了肠道上皮的形态结构,导致肠道上皮屏障功能受损,通透性增加。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2019-06-01）
温婧怡[7]（2019）在《酿酒酵母菌细胞壁蛋白粗提物诱导绵羊瘤胃上皮细胞SBD-1表达的研究》一文中研究指出目前抗生素滥用对人和动物健康造成的损害以及对环境的破坏日益突出,这种情况迫使研究人员不断寻找可以替代抗生素的物质。防御素在替代抗生素方面拥有无限潜能,是一类具有广谱抗微生物活性的小分子天然免疫抗微生物肽(Antimicrobial peptides,AMPs)。β-防御素是防御素家族中分布最广的一类防御素,广泛分布于哺乳动物、禽类和鱼类体内,而绵羊β-防御素-1(sheep beta defensin-1,SBD-1)是绵羊胃肠道内分布最为广泛的防御素,尤其在绵羊瘤胃中高度表达。本试验在mRNA和蛋白水平研究酿酒酵母菌细胞壁蛋白粗提物对绵羊瘤胃上皮细胞(ovineruminal epithelia cells,ORECs)SBD-1 表达的影响。试验首先对 ORECs进行体外培养;用超声破碎法将培养的酿酒酵母菌破碎以提取细胞壁,再运用复合酶法提取细胞壁蛋白粗提物;然后以浓度为0、12.5、25、50和100μg/mL的酿酒酵母菌细胞壁蛋白粗提物刺激ORECs 2、4、8和12 h;最后通过实时荧光定量PCR技术(quantitative real-time PCR,qPCR)和酶联免疫吸附测定试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测不同浓度的酿酒酵母菌细胞壁蛋白粗提物诱导ORECs不同时间后SBD-1 mRNA和蛋白的表达变化。结果表明:本试验在体外成功的培养了 ORECs,且当原代细胞生长到第12 d时基本将细胞培养瓶瓶底铺满。运用复合酶法所提取的酿酒酵母菌细胞壁蛋白粗提物通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测符合显色范围。且不论在mRNA还是蛋白水平上,酿酒酵母菌细胞壁蛋白粗提物都可以诱导ORECs SBD-1的表达,且当酿酒酵母菌细胞壁蛋白粗提物浓度为100 μg/mL诱导ORECs 12 h时,SBD-1的表达量达到最大。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2019-06-01）
范古玥[8]（2019）在《SARA奶牛瘤胃上皮细胞自噬变化以及对转运蛋白MCT1和SLC5A8表达的影响》一文中研究指出伴随着我国奶牛养殖产业近几年来的飞速发展,目前初步达成了集约化的畜牧产业模式,但制约畜牧业发展的动物疾病也随之而来。亚急性瘤胃酸中毒(subacute rumen acidosis,SARA)是奶牛生产实践中常见的群发性营养代谢病,瘤胃液pH每天介于5.0~5.5之间的时间持续3小时以上则可定义为SARA。SARA发生原因是由于奶牛瘤胃内容物发酵产生的乙酸、丙酸、丁酸等短链脂肪酸(short-chain fatty acid,SCFA)和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)的含量增加,且在瘤胃内的吸收发生障碍,在瘤胃内大量积累。在瘤胃上皮细胞中钠离子耦合单羧酸转运蛋白1(SLC5A8)和氢离子耦合单羧酸转运蛋白1(MCT1)对SCFA的转运起重要作用,发生SARA的时候,瘤胃长时间处于低pH环境下,使其中的革兰氏阴性菌裂解死亡,释放出大量LPS。之前有研究表明高浓度的LPS可以损伤瘤胃上皮组织,并且在很多组织内可以引起自噬的发生。自噬是一个高度动态的生理过程,主要作用是分解细胞中衰老及破损的蛋白质大分子及细胞器,并产生氨基酸、脂肪酸等基础营养物质供给细胞,在生命活动中起到重要的作用。而高浓度的LPS使自噬被过度激活,结果大量的自噬体无法及时清除,导致异常积聚,但是LPS对瘤胃上皮细胞自噬的具体影响还没有确定。本试验采用体外实验和体内实验研究LPS对瘤胃上皮细胞自噬和转运蛋白SLC5A8和MCT1的影响。在体内实验中应用Western blot检测健康及SARA奶牛瘤胃上皮自噬关键蛋白雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)通路中关键蛋白磷酸化mTOR(pmTOR)、mTOR、微管相关蛋白1轻链3(LC3)和自噬降解底物(p62)蛋白表达的变化,以及MCT1、SLC5A8转运蛋白表达量的变化。结果显示mTOR和LC3蛋白表达量增多,pmTOR和p62蛋白表达量减少;通过透射电镜观察瘤胃上皮组织细胞内自噬泡形成,结果显示自噬泡增多。为进一步研究LPS对瘤胃上皮细胞自噬和转运蛋白SLC5A8和MCT1的影响,应用体外培养的瘤胃上皮细胞方式进行实验。将体外培养的细胞用LPS和组胺分别进行不同时间点的刺激,刺激时间点为0、1、3、6、9、18 h,结果表明LPS和组胺刺激瘤胃上皮细胞的最佳时间点为6h。进行不同LPS浓度梯度刺激(0,1,5,10μg/ml)和不同浓度组胺(0,20,40,60μM),Western blot检测LPS和组胺刺激的p-mTOR、mTOR、LC3、p62蛋白表达量的变化。结果显示LPS刺激的mTOR和LC3蛋白表达量上升,p-mTOR和p62蛋白表达量下降;组胺刺激的mTOR和LC3蛋白表达量下降,p-mTOR和p62蛋白表达量上升。为了验证高浓度LPS是否通过促进自噬来抑制转运蛋白MCT1、SLC5A8,将瘤胃上皮细胞分为空白对照组、LPS组、LPS+自噬的抑制剂(CQ、3-MA)组。Western blot检测LC3、p62蛋白表达变化和MCT1、SLC5A8转运蛋白表达变化,结果显示用高浓度LPS刺激转运蛋白MCT1、SLC5A8会被抑制,而当自噬被抑制的时候转运蛋白MCT1、SLC5A8会被激活。免疫荧光观察MCT1、LC3蛋白表达量的变化情况,结果显示当瘤胃上皮细胞处于高浓度LPS刺激会促进自噬的发生也会抑制转运蛋白MCT1的表达。综上所述,高浓度LPS会使瘤胃上皮细胞自噬加强,并且抑制转运蛋白MCT1、SLC5A8的表达,高浓度组胺则会抑制瘤胃上皮细胞自噬发生。(本文来源于《吉林大学》期刊2019-06-01）
金鑫,张曼,杨银凤[9]（2019）在《脾酪氨酸激酶参与酿酒酵母甘露聚糖诱导绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1(SBD-1)的表达》一文中研究指出为了探索脾酪氨酸激酶(Syk)是否参与酿酒酵母甘露聚糖(S.c M)诱导绵羊瘤胃上皮细胞(ORECs)β-防御素-1(SBD-1)表达的过程,首先利用免疫组化、RT-PCR和免疫荧光等方法检测Syk在ORECs内的表达情况;然后采用qPCR和Western blot方法检测S.c M刺激ORECs后Syk的表达变化,同时用Western blot方法检测Syk的磷酸化水平;接着用3条Syk特异性siRNAs(#1、#2和#3)转染ORECs 24 h后,qPCR检测Syk mRNA的表达变化,筛选出干扰效果最佳的Syk siRNA;最后用效果最佳的siRNA和Syk特异性抑制剂R406分别处理ORECs后,采用qPCR和ELISA检测SBD-1的表达变化,以确定Syk在S.c M诱导SBD-1表达过程中的作用。结果显示:Syk在ORECs内表达;且S.c M刺激ORECs后Syk的mRNA和蛋白表达水平显着高于未刺激组(P<0.01或P<0.05),S.c M刺激ORECs不同时间(5、15、30、45和60 min)均能使Syk发生磷酸化,且刺激15 min后磷酸化水平达到最大(P<0.01);此外,Syk的3条特异性siRNAs转染ORECs后Syk的表达均降低,且Syk siRNA#2的抑制效果最明显(P<0.01);同时Syk siRNA#2和R406均能极显着降低S.c M诱导ORECs SBD-1的表达(P<0.01)。上述结果表明,Syk参与S.c M诱导ORECs SBD-1的表达。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2019年05期）
金鑫,张曼,王云鹤,魏方,温婧怡[10]（2019）在《绵羊瘤胃上皮细胞的体外分离培养、冻存及复苏方法》一文中研究指出本研究旨在建立绵羊瘤胃上皮细胞(Ovine rumen epithelial cells,ORECs)的分离培养、冻存和复苏方法,为反刍动物瘤胃功能的研究和相关瘤胃疾病的发病机制研究提供功能性的细胞模型。以绵羊瘤胃为研究对象,采用胰蛋白酶连续消化法对瘤胃组织进行不同时间(40、30、20、10、10、8和5 min)的消化,并对每次消化后的瘤胃组织和消化液分别进行H.E染色分析和显微镜观察,以确定细胞开始收集及终止消化的时间,最后将收集的瘤胃上皮细胞进行原代培养。在传代培养时,运用差时消化法和差速贴壁法对ORECs进行纯化,并从细胞形态学、细胞生长曲线、角蛋白18(CK-18)免疫荧光染色和上皮细胞标志物E-钙黏蛋白和碱性磷酸酶基因表达等方面对ORECs进行鉴定。然后设置不同体积配方的冻存液,将传代细胞进行冻存,通过检测复苏后的细胞活力和24 h贴壁率确定最佳冻存液配方。结果表明:第4次消化后就基本消化到瘤胃组织的棘层,此时即可开始收集细胞;第7次消化完后瘤胃上皮的基底层细胞基本被消化掉,此时即可终止消化细胞。经纯化后传代的细胞呈现均一的"铺路石"形态,生长曲线明显呈"S"形,且经CK-18免疫荧光染色后鉴定为阳性,同时PCR检测到上皮细胞特异性标志蛋白E-钙黏蛋白和碱性磷酸酶均有表达。此外,ORECs经不同体积配方冻存液冻存复苏后发现,冻存液配方为V_(FBS)∶V_(DMEM)∶V_(DMSO)=9∶0∶1时ORECs的细胞活力及贴壁率最高,且传代后的细胞生长状况良好。因此本试验成功建立了ORECs的体外分离培养、冻存和复苏方法。(本文来源于《中国农业大学学报》期刊2019年05期）
瘤胃上皮论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
绵羊瘤胃作为反刍动物的第一个胃,经常会受到各种病原微生物的挑战。绵羊瘤胃黏膜上皮在先天性免疫中发挥重要作用,并可以分泌一系列先天免疫分子来防止微生物的侵袭。防御素是一种由黏膜上皮产生并具有广谱抗微生物活性的阳离子肽,被认为是抗生素的潜在替代品。本课题组先前的研究表明酿酒酵母全细胞壁能够上调绵羊瘤胃上皮细胞(Ovine ruminal epithelial cells,ORECs)内 β-防御素-1(Sheepβ-defensin-1,SBD-1)的表达,为了进一步确定酿酒酵母细胞壁诱导SBD-1表达的有效成分,本研究选用来源于酿酒酵母细胞壁的β-葡聚糖刺激ORECs以观察其对SBD-1表达的影响,并进一步研究此诱导过程可能涉及的信号通路。外植体培养具有在受控环境中保留与体内相似的组织学特征等特点,因此外植体培养相对于细胞而言更接近于体内环境。本研究探索了绵羊瘤胃外植体(Ovine ruminal explants,OREs)培养的可行性和最佳条件,并在此基础上研究β-葡聚糖对OREs内抗菌肽SBD-1、促炎细胞因子IL-6和抗炎细胞因子IL-10表达的影响。具体研究内容及结果如下:(1)用不同浓度(0、5、10、20、50和100 μg/mL)的β-葡聚糖刺激ORECs 8 h后,利用qPCR和ELISA方法检测SBD-1的表达变化,从而筛选出诱导SBD-1表达最佳的β-葡聚糖浓度,而后用此浓度刺激ORECs不同时间(0、2、4、8、12和24 h),同样采用qPCR和ELISA方法筛选出诱导SBD-1表达的最佳时间。结果显示:10μg/mL的β-葡聚糖分别刺激ORECs 2和4 h时SBD-1 mRNA和蛋白表达最大。(2)采用Western blot、RT-PCR、免疫组化、免疫荧光、qPCR和ELISA方法检测β-葡聚糖诱导SBD-1表达上调的信号通路。结果表明树突状细胞相关C型凝集素 1(Dendritic-cell-associated C-type lectin 1,Dectin-1)和脾脏酪氨酸激酶(Spleen tyrosine kinase,Syk)在绵羊瘤胃黏膜组织及ORECs内表达,并且用siRNAs干扰或抑制剂抑制Dectin-1、Syk、TLR-2和MyD88表达后减弱了β-葡聚糖诱导的SBD-1表达。用β-葡聚糖处理ORECs导致p38、JNK、ERK1/2和NF-κB表达显着增加,而用抑制剂抑制MAPK和NF-κB途径显着降低了 β-葡聚糖诱导SBD-1的表达,且NF-κB抑制剂效果最明显。(3)培养OREs,并采用H.E染色、qPCR和免疫组化等方法检测OREs的组织结构完整性及细胞活性。H.E染色结果显示:不添加血清的培养基内OREs组织结构更完整。qPCR和免疫组化结果显示:培养24 h以内的OREs E-cadherin的表达与未培养的组织差异不显着,且存在CK-18和Ki-67的阳性信号。(4)将OREs与不同浓度(0、10、50、100、200和400 μg/mL)的β-葡聚糖共培养8 h后,采用qPCR和ELISA方法检测SBD-1、IL-6和IL-10的表达变化,从而筛选出诱导SBD-1、IL-6和IL-10表达最佳的β-葡聚糖浓度,而后用此浓度刺激ORECs不同时间(0、2、4、8、12和24 h)后,同样采用qPCR和ELISA方法筛选出诱导SBD-1、IL-6和IL-10表达的最佳时间。结果显示:50 μg/mL的β-葡聚糖分别刺激OREs 2、8 和 12 h 时 SBD-1、IL-6 和 IL-10 的 mRNA 表达最高,100 pg/mL 的 β-葡聚糖刺激OREs 8 h时SBD-1蛋白表达达到峰值,而分别用50和200 μg/mL刺激OREs 12 h时IL-6和IL-10蛋白表达达到最大。本研究结果表明β-葡聚糖能够提高ORECs内SBD-1的表达,且该过程由Dectin-1-Syk/TLR-2-MyD88-MAPK/NF-κB信号通路共同介导产生,但可能主要通过Dectin-1-Syk/TLR-2-MyD88-NF-κB信号通路。此外,本研究还确定了 OREs体外培养的可行性和最佳条件,并证明β-葡聚糖可以激活OREs中SBD-1、IL-6和IL-10的分泌。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
瘤胃上皮论文参考文献
[1].金鑫,张曼,杨银凤.酿酒酵母甘露聚糖诱导绵羊瘤胃上皮细胞SBD-1表达的信号通路研究[J].农业生物技术学报.2019
[2].张曼.酿酒酵母β-葡聚糖对绵羊瘤胃上皮细胞和外植体内β-防御素-1表达影响的研究[D].内蒙古农业大学.2019
[3].金鑫.酿酒酵母甘露聚糖对绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1表达影响及其信号通路研究[D].内蒙古农业大学.2019
[4].赵晨旭.SARA奶牛瘤胃炎性反应发生机制及瘤胃上皮SLC22A转运蛋白的变化[D].吉林大学.2019
[5].李洋.亚急性瘤胃酸中毒对奶山羊瘤胃上皮挥发性脂肪酸吸收的影响及其机制研究[D].内蒙古农业大学.2019
[6].王梦雅.亚急性瘤胃酸中毒对奶山羊肠道上皮屏障功能的影响及其转录组学研究[D].内蒙古农业大学.2019
[7].温婧怡.酿酒酵母菌细胞壁蛋白粗提物诱导绵羊瘤胃上皮细胞SBD-1表达的研究[D].内蒙古农业大学.2019
[8].范古玥.SARA奶牛瘤胃上皮细胞自噬变化以及对转运蛋白MCT1和SLC5A8表达的影响[D].吉林大学.2019
[9].金鑫,张曼,杨银凤.脾酪氨酸激酶参与酿酒酵母甘露聚糖诱导绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1(SBD-1)的表达[J].畜牧兽医学报.2019
[10].金鑫,张曼,王云鹤,魏方,温婧怡.绵羊瘤胃上皮细胞的体外分离培养、冻存及复苏方法[J].中国农业大学学报.2019
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