猪链球菌9型噬菌体裂解酶Ply5218最小功能域及关键氨基酸位点的鉴定

猪链球菌9型噬菌体裂解酶Ply5218最小功能域及关键氨基酸位点的鉴定

论文摘要

为了鉴定猪链球菌9型噬菌体裂解酶Ply5218的最小活性功能域及关键氨基酸位点,利用PCR技术对全长裂解酶Ply5218进行截短并对可能与活性相关的关键氨基酸位点进行定点突变,研究截短与突变后各个蛋白的活性并与全长蛋白活性对比。结果显示,截短片段Ply52181-147可在平板上形成裂菌圈,仍保持裂菌活性,而比该片段更短的截短片段则失去裂菌活性,推测Ply52181-147为Ply5218的最小活性相关功能域;第8、58、136和142位点的氨基酸突变后,裂菌活性部分降低,第34和144位点的氨基酸突变后,则彻底失去裂菌活性。研究结果为深入揭示Ply5218的裂菌机制和进一步改造裂解酶提供了基础数据。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 菌株与主要试剂
  •   1.2 Ply5218基因的系列删除及表达质粒的构建
  •   1.3 截短片段的表达及活性检测
  •     1.3.1 截短片段的表达
  •     1.3.2 截短片段的活性检测
  •   1.4 关键氨基酸位点的选择与突变
  •   1.5 突变体表达质粒的构建、表达及活性检测
  •   1.6 裂解酶Ply5218与突变体的活性比较
  •     1.6.1 蛋白的分离与纯化
  •     1.6.2 制作蛋白浓度标准曲线
  • 2 结果与分析
  •   2.1 载短片段的PCR扩增
  •   2.2 截短片段的表达
  •   2.3 截短片段的活性检测
  •   2.4 关键氨基酸位点的选择与突变
  •   2.5 突变株的活性检测
  •   2.6 突变株蛋白的纯化及活性比较
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 刘洋,王兆飞,孔里程,严亚贤,孙建和

    关键词: 猪链球菌,裂解酶,最小活性功能域,关键氨基酸位点

    来源: 上海交通大学学报(农业科学版) 2019年01期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 上海交通大学农业与生物学院上海市兽医生物技术重点实验室

    基金: 上海市科技攻关项目(16391903400)

    分类号: S852.61

    页码: 41-46

    总页数: 6

    文件大小: 1131K

    下载量: 116

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