构建基于Keima蛋白的细胞自噬评价体系

构建基于Keima蛋白的细胞自噬评价体系

论文摘要

目的:构建表达Cyto-Keima蛋白的宫颈癌细胞系HeLa及小鼠原代神经元,作为新的细胞自噬评价体系。方法:包装pCDH-Cyto-Keima慢病毒,感染HeLa细胞和小鼠原代神经元,采用激光共聚焦荧光显微镜观察Cyto-Kei?ma蛋白在HeLa细胞和小鼠原代神经元中的表达情况,用已知自噬诱导剂和抑制剂处理细胞,检测该体系对自噬的响应。结果:感染Cyto-Keima慢病毒48 h后,通过激光共聚焦荧光显微镜观察,细胞表达Cyto-Keima蛋白;在Earle平衡盐溶液或自噬诱导剂雷帕霉素处理下,HeLa-Cyto-Keima细胞和Cyto-Keima原代神经元自噬水平明显增强;在自噬抑制剂巴弗洛霉素A1和氯喹处理下,细胞自噬水平明显降低。结论:构建了基于Cyto-Keima蛋白的细胞自噬评价体系。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •   1.2 细胞培养
  •   1.3 包装Cyto-Keima慢病毒
  •   1.4 构建HeLa-Cyto-Keima细胞系
  •   1.5 获取胎鼠原代神经元
  •   1.6 构建Cyto-Keima神经元细胞
  •   1.7 药物处理
  •   1.8 自噬体系的评价
  •   1.9 数据分析
  • 2 结果
  •   2.1 HeLa-Cyto-Keima细胞系的构建
  •   2.2 HeLa-Cyto-Keima细胞自噬评价体系验证
  •   2.3 Cyto-Keima神经元细胞的构建
  •   2.4 Cyto-Keima神经元细胞自噬评价体系验证
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 董华,李婷,陈佳意,姚铖铖,潘欣,李爱玲

    关键词: 自噬,蛋白,评价体系,细胞,原代神经元

    来源: 生物技术通讯 2019年02期

    年度: 2019

    分类: 基础科学

    专业: 生物学

    单位: 国家生物医学分析中心

    基金: 国家自然科学基金(31570840)

    分类号: Q25

    页码: 158-162+200

    总页数: 6

    文件大小: 4274K

    下载量: 73

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